AKTA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤.doc

AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤首先是所有溶液抽滤，超声波（主要是去除溶液中的气泡）；开机（仪器自检），点开Unicorn，选default,ok；clearall（即出现流程图界面）；首先将20%乙醇换为超纯水;Mannul，点任意选项，出现操作对话框;Pump---flow=1.0，execute，（注意：必须先设定流速，使其形成通路；即有流速时再作其他操作）此时观察柱压，柱压切记w0.3Mpa;如果柱压高，则要更长时间洗柱压基本稳定时，洗泵：pump---pumpwashpurifierA1ONB1ONexecute;这项仪器自动完成；完成后自动恢复为上一步的状态；此时还应该注意柱压注意中间有多次平衡状态出现：一种状态进入另一种状态时，一般要平稳几个柱体积；此时可以洗上样环；待平衡时换液：pause,A1A液B1B液，continue,然后达到平衡态;洗泵：pump---pumpwashpurifierA1ONB1ONexecute;此时A泵走A液，B泵走B液此时可以安装镍柱；待稳定下来准备上样：将流速降下来，flow=0.5，先是load（默认）状态下，将蛋白溶液用注射器打入上样环（上样环是2ml的，所以一般最多上样2ml，否则浪费；）；然后改为inject状态，execute，待走出2.5柱体积时重新改为load状态，平衡几个柱体积;如果中间需上样多次，load,execute;pause;加样后,continue;inject,execute;同样图上显示》2ml时改状态为load;非目的蛋白不会挂在柱子上，此时出现蛋白峰，在峰上时收穿透；平衡后，洗脱。

准备接收纯化出的蛋白，改流速flow=1.0,gradient;100%B8min;execucte;待B%>20%时，设定pump---outletvalve----feed,executefrac——0.5ml,execute;首先出现的是杂蛋白的峰，也可以接收一般第二个峰是目的蛋白接收完后，吸收值的曲线会一直上升，是咪唑的吸收不再接收时，Frac=0,execute;pumpoutletvalvewasteF1咪唑吸收值平行，然后再走几个柱体积；B液已达100%，停止走B液：gradient=O（即0%B）;time=0min;这时走A液，冲洗整个体系；之后，pause,将A,B液换为20%乙醇continue,洗系统；洗泵，步骤同上；洗feed系统；之后feed改为wasteF1；摘下镍柱；此时上样环已经独立，可随时洗；此时也会有柱压过高的问题，可能是20%乙醇内有气泡造成的洗好后，-----end关闭所有窗口，关机前期摇菌，诱导，破碎，蛋白纯化用溶液的配制有待详细列出结束实验实验结束后，必须将系统清洗后，才能关机清洗管道：系统泵管清洗，。