增食因子A在鹌鹑脑干内分布及表达.pdf

增食因子A 在鹌鹑脑千内的分布及表达摘要增食因子( o r e x i n s ) 是新发现的一组神经肽，分为o r e x i nA 、o r e x i nB ( 0 x A 、O ] ( B ) 两种，它们来源于同一前体O r e x i n s 主要由下丘脑神经元产生，通过其神经纤维的直接投射或释放入脑脊髓液作用于远处的靶细胞，激活两种与G 蛋白耦联的细胞表面受体O X R I 、O X R 2 本试验为了探讨0 ) 【A 在鹌鹑脑干内的分布、表达量的日节律变化以及禁食对其表达量的影响，选用了来自同一父母代的鹌鹑9 0 羽，自由采食、饮水，光控饲喂3w ( 光照／黑暗为1 2 ／1 2 h ) ，然后在一昼夜2 4 h 内分8 个时段处理动物，每隔3 h 用磷酸缓冲液配制的多聚甲醛固定液灌流固定1 0 羽鹌鹑脑组织作为一组，另外1 0 羽动物作为禁食组，禁食给水4 8 h 后取其脑组织做冰冻切片采用免疫组织化学S A B C法显色，并用图像分析软件( H P I A S - 1 0 0 0 ) 对O X A 在鹌鹑脑干内的分布及表达进行定性定量研究结果显示O X A 阳性神经元胞体主要分布在下丘脑的室旁核( P V N ) 、室周区( P V H T ) 、后内侧核( 肝H ) 和外侧核( L H A ) ，其神经纤维贯穿整个脑干。

在与昼夜节律有关的神经核团被盖脚桥核( T P P ) 、中缝核( R ) 、背缝核( D R ) 和蓝斑( L o C )中，O X A 阳性神经纤维免疫强度在2 4 h 内呈明显的节律性波动；在禁食4 8 h 后，L } I A处O X A 阳性神经元密度极显著增加( p 筝∞一∞叱增食因子A 在鹌鹑脑干内的分布及表达5 禁食条件下，O X A 阳性神经元密度及有关区域O X A 阳性神经纤维相对免疫强度的变化5 l 禁食条件下，O X A 阳性神经元密度的变化禁食4 8 h 后，鹌鹑丘脑D M 和D L 出现O 】【A 阳性神经元，密度分别为1 7 ．9 ±1 ．4和1 6 ．9 ±1 ．1 ( 个／单位面积) ，下丘脑P V N 、P V H T 、M P H 和L 姒的0 ) 【A 阳性神经元密度分别为i 0 ．7 - + 1 _ 8 、7 ．6 - - + 1 ．3 、7 ．3 ±1 ．2 、1 6 ．9 ±1 ．4 ( 个／单位面积) ；对照组丘脑D M 和D L 内未见0 X A 阳性神经元，下丘脑P V N 、P V H T 、M P H 和L 姒内0 X A 阳性神经元密度分别为1 0 ．8 士1 ．6 、6 ．9 ±1 ．3 、6 ．7 ±1 ．3 、8 ．7 ±1 ．2 ( 个／单位面积) 。

与对照组相比，禁食组聊、D L 和L H A 的O X A 阳性神经元密度变化极显著( p < 0 ．0 1 )( 图4 、5 、1 7 ) ，下丘脑M P H 的0 X A 阳性神经元密度变化显著( p < O ．0 5 ) ，见表3 ，图2 l 表3 ．禁食4 8 h 后，鹌鹑丘脑、下丘脑处O X A 阳性神经元密度的变化T a b l e3 ，T h ec h a n g e so f a m o u n to f O X A —i m m u n o r c a c m i v on e u r o n sp e ru n i ta r e ai nt h ct h a l a m u sa n dh y p o t h a l a m u so f f o o d - i n l a i b i t e dq l l a i l注：+ 表示与对照组相比差异显著( p < 0 ．0 5 )# 表示与对照组相比差异极显著( p < 0 ．0 1 )N o t e ：- C o m p a r ev i t ht h ec o n t r o lg r o u p ( p < o ．0 5 )} 十C o m p a r ew i t ht h ec o n t r o ] g r o u p ( p < O ．0 1 )1 6增食因子^ 在鹌鹑脑干内的分布及表达图2 1 ．禁食4 8 h 后，鹌鹑丘脑、下丘脑处0 ) ( A 阳性神经元密度变化图F i g ．2 1 ．T h e b a r g r a p h o f t h ec h a n g e s o f 8 n l o u n t o f O X A —i m m u n o r e a c d v e n c u r o I l s p e r u n i t a r e a i n t h et h a l a m u sa n dh y p o t h - l a m u $ o f f o o d - i n h i b i t e dq u a i l5 ．2 禁食条件下，丘脑内O X A 相对免疫强度的变化禁食4 8 h 后，丘脑R o 、T 、q f 、T e O 和s a c 等处O X A 相对含量( 相对免疫强度)有极显著的增加，仅F P L 处O X A 相对含量增加不明显，见表4 ，图2 2 。

表4 ．禁食4 8 h 后，鹌鹑丘脑内O X A 相对含量的变化T a b l e4 ．T h ec h a n g e so f m l a t i v ea m o u n to f O X A - i m m u n o m a c t i v ef i b r e si nt h et h a l a m u so ff o o d - i n h i b i t e dq u a i l注：·表示与对照组相比差异显著( p < 0 ．0 5 )# 表示与对照组相比差异极显著( p < O ．0 1 )N o t e ：●C o m p a r ew i t ht h ec o n t r o lg r o u p ( D < 0 ．0 5 )·4C o m p a r ew i t ht h ec o n t r o lg r o u p ( o < 0 ．0 1 )1 7增食因子A 在鹌鹑脑千内的分布及表达图2 2 ．禁食4 8 h 后，鹌鹑丘脑内0 x A 相对含量的变化图F i g ．2 2 ．T h eb a rg r a p ho f t h ec h R t 培e so f r e l a t i v ea m o u n to f O X A - i m m u n o v e a c t i v ef i b r e si nt h et h a l a m u so f o f f o o d - i n h i b i t e dq u a i l5 ．3 禁食条件下，中脑、脑桥内0 X A 相对免疫强度的变化禁食4 8 h 后，T P P 、L o C 、f l m 等处O X A 相对含量( 相对免疫强度) 极显著增加( 图1 8 、1 9 ) ，而R 、D R 内变化不明显，如表5 ，图2 3 。

表5 ．禁食4 8 h 后中脑、脑桥内O X A 相对含量的变化T a b l e5 ．T h ec h a n g e so f r e l a t i v oa m o u n to f O X A —i m m u n o 托∞廿V ef i b r e si n 吐l em i 曲r a i na n db r a i np o n so f f o o d - i n h i b i t e dq u a i l洼：十表示与对照组相比差异显著( p < 0 ．0 5 )料表示与对照组相比差异极显著( p < 0 ．0 1 )N o t e ：●C o m p a r ew i t ht h ec o n t r o lg r o u p ( p < 0 ．0 5 )# C o m p a r ev i t ht h ec o n t r o lg l “ o u p ( D < o ．0 1 )1 8增食因子^ 在鹤鹑脑干内的分布及表达图2 3 ．禁食4 8 h 后，鹌鹁中脑、脑桥内0 X A 相对含量变化图F i g ．2 3 ．T h e b a r g r a p h o f t h e c h a n g e s o f m l a t i v e a m o u n t o f O X A - i m m u n o r e a c t i v e f i b r e s i n t h em i d b r a i n a n db r a i np o r t so f f o o d - i n h i b i t c dq u a i l增食园子A 在鹌鹁脑千内的分布及表达讨论1 鹌鹑O X A 阳性神经元胞体在间脑中的分布、形态与大鼠的异同鹌鹑和大鼠下丘脑L H A 均有O X A 阳性神经元分布，这提示在禽类和哺乳类下丘脑外侧都是能量调控中心，显示了禽类和哺乳类中枢神经在进化上的亲缘性。

在鹌 鹑，O x A 阳性神经元胞体还出现在丘脑的蹦、D L 及下丘脑的P V N 、P v H T 和删而大鼠O X A 阳性神经元胞体还分布于下丘脑背侧及后侧区，但在丘脑区没有O X A 阳性神经元胞体( N a m b ue ta l ，1 9 9 9 ) 另外，在鹌鹑的c t 、c p 及S O N 内也发现少量O X A阳性胞体，而大鼠的这些部位没有O X A 阳性胞体这一研究结果提示鹤鹑o r e x i n s能神经系统的神经通路与大鼠的有所不同，这可能是由于哺乳纲与鸟纲动物之间的种属差异所致O X A 阳性胞体在两种动物问脑内都有圆形、椭圆形、锥形等多种形态，但鹌鹑0 ) 【A 阳性胞体直径比大鼠的小，大鼠的在3 0 - 4 0 1 _ l m 之间，鹌鹑的在2 0 1 山n左右，这是由物种不同所导致的另一差异2O X A 阳性神经元胞体分布的局限性和阳性神经纤维分布的广泛性本试验发现O X A 阳性神经元胞体分布局限在间脑，尤其集中在下丘脑的P V N 、P v H T 、M P H 和L H A ，而在中脑及脑桥段都未发现其阳性胞体但0 X A 阳性神经纤维在间脑、中脑和脑桥内投射的范围极为广泛。

下丘脑位于间脑的腹侧，构成第三脑室底壁和侧壁腹侧部，是重要的植物性神经的皮质下中枢，也是神经内分泌的核心部位，其中的多种神经核团在神经体液调节等方面发挥至关重要的作用下丘脑P V N对机体自主性神经内分泌功能的调节起重要作用( S w a n s o ne ta l ，1 9 8 3 ) ，参与多种应激反应时对垂体一肾上腺皮质轴的激活( B a e r t s c h ie ta l ，1 9 8 3 ；陈宜张等，1 9 8 7 ) L H A 与内脏、躯体运动、情绪、行为等活动密切相关，并参与摄食及生殖的调控，且在一定程度上参与镇痛等位于第三脑室腹侧周缘的下丘脑室周区含室周核，是下丘脑内小细胞神经分泌系统的重要组成部分免疫组织化学的研究已经证明该区存在包含生长抑素在内的多种促垂体激素合成细胞，是生长抑素的重要产出部位，另外在调节垂体前叶激素的分泌方面也起重要作用( 姚泰，2 0 0 0 ) 鹌鹑0 X A阳性神经元虽然只位于有限的几个核团区域，但这些核团功能的多样性，提示与哺乳类相似，在鹌鹑等禽类机体中0 X A 参与了能量代谢、神经内分泌、昼夜节律、生殖机能的调节在这个过程中，O X A 神经元从下丘脑各核团获得信号，信号经加工整合后被送到丘脑、中脑及脑桥，且可自＆进一步被向上送到端脑，向下送到脊髓。

O X A 阳性神经纤维投射的广泛性是O X A 行使多种生物效应的形态学基础增食园子A 在鹌鹑脑干内的分布及表迭3 关于O X A 阳性神经纤维在2 4 h 内的免疫强度的变化昼夜节律是有机体适应环境的主要特征之一所有高等动物都有一个由视网膜、下丘脑视交叉上核( S C N ) 和松果。