标准病理制片流程课堂PPT.ppt

----------------杨飞城123456789101112谢谢聆听谢谢聆听~~13•HEHE染色操作步骤染色操作步骤•苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法14•工具工具/ /原料原料•固定液——甲醛（福尔马林）•脱水剂——酒精•透明剂——二甲苯•石蜡•脱蜡剂：二甲苯•至水剂：酒精•染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染色液•生理盐水、蒸馏水、PBS实验必备溶剂15适用范围适用范围组织学、胚胎学、病理学教学与科研16•he染色实验具体步骤•1 取材，固定：固定液——甲醛（福尔马林）•从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。

17•修剪，脱水，透明：脱水剂修剪，脱水，透明：脱水剂————酒精酒精• 透明剂透明剂————二甲苯二甲苯•不同组织固定时间不同，固定成功后需要修剪25px*25px*5px，放入包埋盒中，流水冲洗（去除组织中的固定液）30分钟至于不同浓度的酒精脱水，一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋18•浸蜡，包埋：石蜡•将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温待石蜡完全浸入组织块后进行包埋，冷却凝固成块即成包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片•切片、展片、烤片：•将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干19•脱蜡、至水、染色：• 脱蜡剂：二甲苯• 脱水剂：酒精• 染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染20•染色液•染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

• 苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性21•HEHE染色过程：染色过程：•1•将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟•2•酸水及氨水中分色，各数秒钟•3•流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻•4•入70％和90％酒精中脱水各10分钟•5•入酒精伊红染色液染色2—3分钟22•脱水、透明：•染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明•封片•将已透明的切片滴上树胶，盖上盖玻片封固待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用23请观看视频～～～谢谢聆听谢谢聆听~~24。