赤雹果水提取物镇痛作用与前列腺素E2关系研究.doc

1赤雹果水提取物镇痛作用与前列腺素 E2 关系研究作者：陈光晖 佟继铭 刘玉玲 宋利萍【关键词】 赤雹果 水提取物 镇痛 前列腺素 E2Abstract：ObjectiveTo observe the relationship between PGE2 and the analgesic effect of the water extract of Thladiantha dubia fruits. MethodsThe analgesic effect of FTDB was evaluated by the classical writhing test. The content of PGE2 was detected in peritoneal fluid of mice.Results1.0, 2.0 and 4.0 g/kg of WEFTD markedly reduced the numbers of pain reaction induced by antimony potassium tartrate solution(P<0.05 vs model group) and obviously decreased the content of PGE2 in peritoneal fluid of mice (P<0.05 vs model group). ConclusionWEFTD has obvious analgesic effect and its one of mechanisms is to inhibit the synthesis or release of PGE2.Key words：Thladiantha dubia fruits； Water extraction； Analgesic； PGE22赤雹 (Thladiantha dubia Bunge,TDB)为葫芦科多年蔓生草本植物［1］ ，赤雹果是赤雹的干燥成熟果实，民间常用于治疗腰腿痛、风湿痛、痛经、软组织损伤等多种疼痛，还具有较强的抗炎和抗过敏作用，且无明显的毒副作用，是值得进一步研究的抗炎镇痛药。

前期研究已经证明赤雹果水提取物（WEFTD）具有明显的镇痛作用［2］ ，其镇痛作用与阿片受体无关［ 3］ 为进一步探讨赤雹果的镇痛作用机制，本实验采用小鼠扭体法对 WEFTD 的镇痛作用与PGE2 关系进行了研究1 器材1.1 动物 选用昆明种小鼠 70 只，体重 20～22 g，雌雄各半，河北医科大学实验动物中心合格证号：医动字第 04056 号实验前禁食 12 h（自由食水） 1.2 药物与试剂 WEFTD，由承德医学院中药研究所制备阿斯匹林，石家庄永强制药厂产品，批号 001009酒石酸锑钾，杭州临安金龙化工有限公司；吗啡，东北第六制药厂产品，批号0010109PGE2 试剂盒，南京建成生物工程研究所氢氧化钾（KOH）化学纯上海泗联化工厂产品，批号 970402 甲醇（Methanal）分析纯,上海化学试剂厂产品，批号 99040531.3 仪器岛津 260 紫外- 可见分光光度计(日本)，DT-100A 分析天平(北京光学仪器厂) ，DHF-1 高速分散器(上海金达生化仪器厂)，TLL-D 台式冷冻离心机(军事医学科学院实验仪器厂 )，WSZ-261-79 恒温箱(上海医疗器械七厂 )。

2 方法2.1 小鼠扭体法［4 ］小鼠 70 只，禁食 12 h（自由食水） ，取出60 只，随机分为模型（NS）组，WEFTD 低、中、高（1 000，2 000， 4 000 g/kg）剂量组，吗啡（Mor）7.5 mg/kg 组、阿斯匹林（Asp）200 mg/kg 组,每组 10 只 Mor 皮下注射（Sc）给药；其它组灌胃给药(ig)，给药容积 0.2 ml/10 g 体重，盐水组 ig 等容积的生理盐水Sc 给药后 15 min，ig 给药后 40 min，腹腔注射 0 .05%酒石酸锑钾 0.2 ml /只致痛，观察小鼠产生“扭体”反应(腹部凹陷，躯干后腿伸直，臀部高起)，计数致痛后 15 min 内各小鼠的扭体反应次数，并按文献方法［2］计算扭体反应抑制率2.2 小鼠腹腔液中 PGE2 测定小鼠扭体反应记录 15 min 后,把上述 60 只小鼠及备用的 10 只对照组小鼠快速断头处死，撕开腹部皮肤浆膜，收集腹腔液 2 ml，离心（2 500 r/min, 10 min, 4℃ ） ，取上清液 0.5 ml，加入 0.5 mol/L KOH-甲醇溶液 2 ml，在 50℃ 水浴中异构化 20 min，用甲醇溶液稀释到 5 ml，离心 10 min（2 500 4r/min） ，取上清液，在 278 nm 紫外光处测定。

以吸收光密度值显示 PGE2 的含量2.3 观察指标各给药组小鼠在酒石酸锑钾腹腔注射后的扭体反应次数各实验组小鼠及对照组小鼠的腹腔液中 PGE2 含量（A ）值2.4 统计学分析应用 SPSS10.0 软件进行分析实验数据用±s 表示，组间差别比较采用方差分析3 结果3.1 对扭体反应的影响 WEFTD 3 个剂量组小鼠的扭体反应次数均明显减少（与模型组比较 P <0.05 ～ 0.01） ，并可剂量依赖性地提高扭体反应抑制率见表 1表 1 WEFTD 对酒石酸锑钾致小鼠扭体反应的影响与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，n=103.2 PGE2 的含量测定模型组小鼠腹腔液中 PGE2 含量比对照组小鼠显著升高，Asp，Mor，WEFTD 组小鼠腹腔液中 PGE2 含量显著低于模型组见表 2表 2 腹腔注射酒石酸锑钾对扭体反应小鼠腹腔液中 PGE2 含量（A 值）的影响与对照组比较，*P<0.01 ；与模型组比较，▲P<0.01 ；n=1054 讨论赤雹果是满族人长期沿用的药材，民间应用经验证明其对风湿痛，跌打损伤性疼痛、关节肿痛、肌肉痛，乳房胀痛、痛经均有显著的疗效，且无明显的毒副作用。

前期研究证明 WEFTD 对多种疼痛模型有明显的镇痛作用［2］ ，其镇痛作用与阿片受体无关［ 3］ 为了进一步探讨 WEFTD 的镇痛作用机制，本研究采用小鼠扭体法对WEFTD 的镇痛作用与 PGE2 的关系进行了分析，结果显示 WEFTD可显著减少酒石酸锑钾诱发的小鼠扭体反应次数，并明显减少小鼠腹腔液中 PGE2 含量小鼠扭体实验是通过化学刺激性物质注入小鼠腹腔后，刺激脏层和壁层腹膜，引起较大面积较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现扭体反应化学刺激引起的组织损伤同时伴随大量致炎介质的释放，致炎介质对感受伤害的神经元作用方式有两种，或是直接偶合于细胞膜受体，如特定的离子通道（氢离子、三磷酸腺苷、5-HT） ，或是通过细胞内的第 2 信使的间接作用，如作用于 β2 受体的缓激肽，细胞因子（白细胞介素、肿瘤坏死因子） ，二十碳酸（前列腺素，白三烯）等等前列腺素是重要的炎性介质，前列腺素不直接刺激伤害感受器，而是使其对机械刺激感受伤害的化学介质如缓激肽和组胺敏化，产生炎性疼痛，抑制前列腺素的生物合成，是非甾体抗炎药的镇痛机制之一［5］ 本研究证明 WEFTD 显著减少小鼠腹腔液6中 PGE2 的含量，提示其镇痛作用与抑制 PGE2 的合成和/或释放有关。

具体的作用方式有待进一步研究参考文献】［ 1］ 宋立人，红 恂，丁绪亮，等. 现代中药大辞典，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2001 ：1022 .［2］ 佟继铭，宋利萍，刘玉玲，等. 赤雹果水提取物的镇痛作用与阿片受体的关系［J］.承德医学院学报，2007,24(3)：229.［3］ 佟继铭，李兰芳，宋利萍，等. 赤雹果水溶性提取物镇痛作用研究［J］.承德医学院学报，2006，23(4)：337.［4］ 徐叔云 药理实验方法学［M ］.北京：人民卫生出版社，2002：282，283.［5］ 李振军，李学旺，唐福林. 非甾体类抗炎药治疗新进展［J］. 国外医学· 内科学分册，1998，25 （8）：344.。