紫外分光光度计法测定果蔬中维生素C的含量.doc

紫外分光光度计法测定几种常用果蔬中维生素C的含量摘要：运用维生素Ｃ对紫外产生吸取和对碱不稳定的特性，用紫外分光光度法测定５种常用果蔬中维生素Ｃ的含量最大吸取波长为243nm，原则曲线方程为A=0.00537c，有关系数为R^2＝0.995399种果蔬中维生素Ｃ含量［ｍｇ·（１００ｇ）－１］分别为：青尖椒111.8、上海青104.2、韭菜82.5、小白菜78.9、西芹59.70、胡萝卜49.8、西兰花28、茄子26.4、山药14.9该措施简朴、迅速，成果令人满意1.前言 维生素Ｃ又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素能避免牙龈出血及萎缩、提高人体免疫力，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效天然存在的抗坏血酸有L型和D型2种，后者无生物活性维生素C是呈无色无臭的片状晶体，易溶于水，不溶于有机溶剂在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是由氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时，可增进其氧化破坏氧化酶一般在蔬菜中含量较多，故蔬菜储存过程中均有不同限度流失但在某些果实中具有的生物类黄酮，能保护其稳定性 维生素Ｃ的测定措施重要有紫外分光光度法、红外光谱法、2,6－二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸取法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法[2-12]等。

其中原子吸取法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；碘量法和电位滴定法操作环节较繁琐，并且受其他还原性物质、样品色素颜色和测定期间的影响；紫外分光光度法是根据维生素Ｃ对紫外产生吸取和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱解决样品液两者吸光度之差，通过原则曲线方程，即可计算样品中维生素Ｃ的含量 本实验采用市售的西芹为研究材料，用紫外分光光度法测定韭菜中维生素C的含量2.实验2.1 材料、试剂和仪器 市售西芹 10%HCl、抗坏血酸、1mol/lNaOH、蒸馏水UV-紫外可见分光光度计、KDC-40-电子天平、FA1104-离心机2.2 措施2.2.1 原则溶液的配制 精确称取0.050g抗坏血酸，加10ml 10%HCl溶解，用蒸馏水定容至500ml，混匀，即得100ug/ml维生素Ｃ原则溶液2.2.2 原则曲线的绘制 分别精确移取100ug/ml维生素Ｃ原则溶液0ml、0.03ml、0.06ml、0.09ml、0.12ml、0.15ml、0.18ml、0.24ml、0.30ml于试管中，分别加入蒸馏水至总体积为3ml以水为参比，在243nm处测定吸光度，以维生素Ｃ浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制原则曲线。

2.2.3 果蔬样品的解决 将西芹洗净晾干，取10.4489g于研钵中，先加入10%HCl 5ml，再加入5ml，研磨匀浆，转移至50ml容量瓶中，稀释至刻度，混匀移至离心管中3000r/min离心10min，取上清液即为待测果蔬提取液2.2.4 待测果蔬提取液吸光度的测量 取0.1ml待测果蔬提取液，放入盛有0.2ml 10%HCl的试管中，再加入蒸馏水4.7ml，摇匀以蒸馏水为空白对照，在243nm处测定其吸光度(A₁)2.2.5 碱解决果蔬提取液吸光度的测量 依次吸取0.1ml待测果蔬提取液、1ml蒸馏水和0.4ml 1mol/l NaOH溶液放入试管中，摇匀；静置20min后加入0.4ml 10%HCl，混匀，再加入3.1g蒸馏水以蒸馏水为空白对照，在243nm处测定其吸光度(A₂)2.2.6 吸光度拟定 果蔬样品吸光度=待测果蔬提取液吸光度（A₁）-碱解决果蔬提取液吸光度（A₂）2.2.7 维生素Ｃ含量的计算 测得果蔬样品的吸光度后，根据原则曲线方程，即可计算出果蔬中维生素Ｃ的含量[mg/100g]维生素Ｃ含量＝(c·V总·V待测总·100）/（V₁·W总·1000）式中：ｃ为依原则曲线方程计算得到的维生素Ｃ浓度,ug/ml V₁为测吸光度时吸取样品溶液的体积,ml； V总 为吸取样品定容总体积,ml； V待测总 为待测样品总体积,ml； W总 为果蔬质量，g； 100为100g果蔬。

3. 成果3.1 原则曲线 由原则曲线可得线性回归方程为A=0.05371x，有关系数R²=0.995393.2 维生素C含量的测定 由图可知，蔬菜中的维生素C含量分别为[mg/100g]：青尖椒111.8、上海青104.2、韭菜82.5、小白菜78.9、西芹59.70、胡萝卜49.8、西兰花28、茄子26.4、山药14.99种蔬菜中维生素c的含量关系为：青尖椒>上海青>韭菜>小白菜>西芹>胡萝卜>西兰花>茄子>山药3.3 结论与分析3.3.1 结论 运用维生素Ｃ在紫外光区有明显的吸取和对碱不稳定的特性，建立了果蔬中维生素Ｃ含量的测定措施在一定浓度范畴内，维生素Ｃ浓度与紫外吸光度呈良好的线性关系，回归方程为A=0.05371x，有关系数R²=0.99539 9种蔬菜中Vc含量大小依次为：青尖椒>上海青>韭菜>小白菜>西芹>胡萝卜>西兰花>茄子>山药3.3.2 误差分析 （1）. 碾磨不充足，研钵上有残留，导致部分维生素C残留在蔬菜内，故测Vc含量值偏低 （2）.将研钵中的研磨液转移至容量瓶中时有部分研磨液漏出， 仪器清洗不干净，导致定容后容量瓶内Vc 浓度偏低 (3)取上清液时有少量底层物质吸入其中，导致测吸光光度值有误差。

该措施简朴易行、敏捷度高、成果精确，可迅速测定果蔬中维生素Ｃ的含量。