培养基配制的基本过程.doc

培养基配制的基本过程1.配制溶液向容器内加入所需水量的一部分， 按照培养基的配方， 称取各种原料， 依次加入使其溶 解，最后补足所需水分对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应 在全部原料溶解后加水补足配制固体培养基时， 先将上述已配好的液体培养基煮沸， 再将称好的琼脂加入， 继续加 热至完全融化并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦2.调节 pH 值用 pH 试纸(或 pH 电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的 pH 值，如不符合需要， 可用 10%HCl 或 10%NaOH 进行调节，直到调节到配方要求的 pH 值为止3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤用纱布过滤时， 最好折叠成六层，用 滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤4.分装已过滤的培养基应进行分装 如果要制作斜面培养基， 须将培养基分装于试管中 如果 要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内分装时，一手捏松弹簧夹， 使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶， 依次接取 培养基分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染装入试管的培养基量， 视试管和锥形瓶的大小及需要而定。

一般制作斜面培养基时， 每 只15X150毫米的试管，约装 3〜4毫升(1/4〜1/3试管高度)，如制作深层培养基，每只 20 X220毫米的试管约装12〜15毫升每只锥形瓶装入的培养基， 一般以其容积的一半为宜5. 加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染棉塞应采用普通新鲜、 干燥的棉花制作， 不要用脱脂棉， 以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用 制作棉塞时， 要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度， 揪取手掌心大小一块， 铺在左手拇指 与食指圈成的圆孔中， 用右手食指插入棉花中部， 同时左手食指与姆指稍稍紧握， 就会形成1 个长棒形的棉塞棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以 防空气中微生物沿皱折侵入棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合 适棉塞的 2/3 应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取塞好棉塞的试管和锥形瓶应 盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌6. 制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行 1 )制作斜面培养基在实验台上放 1 支长 0.5〜1 米左右的木条，厚度为 1 厘米左右。

将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基2)制作平板培养基将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点 燃酒精灯， 右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞， 将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培 养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入 10 毫升，以铺满皿底为度铺放培 养基后放置 15 分钟左右，待培养基凝固后，再 5 个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱 里， 24 小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。