川茸中藁本内酯的分离鉴定及药材质量标准研究.doc

川茸中藁本内酯的分离鉴定及药材质量标准研究张玲刘友平 李惠勇李旻范嬪娴（成都中医药大学 四川成都610075）摘要：目的：分离蕖木内酯对照品对川茸质量标准进行研究方法：采用硅胶柱 层析对川時中藁本内酯进行分离，UV、】H・NMR、^GNMR等波谱分析技术鉴 定分离成分，并用HPLC法对药材中的藁本内酯进行含量测定结果：分离成分 经鉴定，为Z■藁本内酣；经测定，其药材中含量不低于0.70%结论：以藁本内 酯为对照詁建立的含量测定方法将为川苛质量标准提升提供理论依据关键词：川茸；藁木内酯；成分分离；含量测定Ligustilide Separation and Study onChuanxiong quality standardsZHANG Ling , LIU You-ping , LI Hui-yong , LI Min ,FAN Jing-xian(Chengdu University of TCM, chengdu 610075, China)Abstact:Objective: Ligustilide reference substance separation for Chuanxiong quality standards research. Method:Compound was isolated with silica gel chromatography and identified by means of spectral analysis .such as UV、MR、 13C-NMR; HPLC method was established to determine the ligustilide in herbs.Result:Compound was identified to Z-ligustilidc and determined no less than 0.70% in herbSeConclusion: the establishment of the determination of ligustilide will provide a theoretical basis of raising Chuangxiong quality standards .Key words: Ligustilide chuanxiong, Ligustilide, Separation of components, Content determination川巧为伞形科(Umbcllifbrac)植物川'^Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥 根茎，具有活血化瘀、祛风止痛的功效人现代化学和药理研究表明，藁木内酯 具有抗血小板聚集，松驰子宫和气管平滑肌，抑制中枢神经系统等活性〔“〕，在 川茸中可达1 %以上叫 在川茸挥发油中达30%以上⑸。

因此,藁本内酯可作为 川茸药材质量评价的指标成分Z—本研究对川茸药材中藁本内酯进行了分离鉴 定，建立了HPLC测定川茸中藁本内酣的方法，并对川茸主产地药材中的藁本内 酣进行了含量测定，提出了川茸中藁本内酣的质量控制指标1・仪器与材料LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；CLASS-VP工作站（日本岛津公 司）；SPD-10A紫外检测器（日本岛津公司）；Bruker Avance 600核磁共振仪（瑞 ± Bruker公司）;紫外可见分光光度计MV-VIS 8500（无锡科达公司）;BP211D 电子分析天平（十万分之一，徳国Sartorius公司）；BUG25T2超声波清洗机（25kHz, 500W,上海必能信超声波有限公司）；R-201型旋转蒸发仪（上海中胜生物技术 有限公司）o层析硅胶（100-200R. 300-400ri,青岛海洋化工厂），甲醇（色谱纯，TEDIA 公司），其它试剂均为分析纯（成都市科龙化工试剂厂）川苛药材于2007年11刀口购于都江堰徐渡乡川苟GAP基地，经成都中医纱大 学中纱鉴定教研室陈新副教授鉴定为Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。

2.方法及结果2.1藁本内酯的分离鉴定2.1. 1制备工艺：川茸粗粉1.5kg,乙醇渗漉，提取物上硅胶柱层析，以石油瞇 （60〜90°C） ■乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，TLC检查合并和同组分，冉进行石油 瞇（30〜60°C） ■乙瞇洗脱，得纯品2. 1.2结构鉴定：该化合物为淡黄色油状物，略有酯香味;UVXmax（nm）： 208, 280, 320； P・NMR、叱・NMR数据与文献⑹数据对照，鉴定为Z■藁本内酯波 谱数据及其归属见表1,结构式见图1Table「H・NMR、13C-NMR (CDCI3) data and attribution of CompoudLocation'H 6[ppm]JH ShapH No.13C 8[ppm]1167.543148.513a147.1942.61dd228.0952.48m222.3666.02m1130.0276.28d1116.877a123.8085.23t1112.9392.38q222.34101.50m218.44110.96t313.731110Fig.l Z- Ligustilide2.2藁本内酯稳定性研究文献⑺切报道，藁本内酯在室温条件下极不稳定，保存15d纯度由99.48%降至41.97%, 4°C冰箱中5d后含量就降到86.67%；藁本内酯在氯仿中可稳定保存1年。

实验研究表明，藁本内酣对照晶在・18°C冰箱中90d内含量几乎没有变化，可 见避光低温有利于保存2.3川茸药材中藁本内酯的HPLC含量测定2. 3. 1 色谱条件:色谱柱：HypersiLODSCis （4.6mmx200mm, 5um）；流动相:甲醇一水（60： 40）；流速1.0ml/min；检测波长320nmo在此色谱条件下，川茸药材小藁本内酯与其它组分能达到基线分离（见图2）L18Fig. 2 HPLC-Chromatogram of reference substance and sampleA. reference substonce； B. sample； a. Z- Ligustilide£一、:J -厂一一2. 3.2对照品溶液的制备：取藁本内酯对照品约60mg,精密称定，置25ml容量 瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为2. 42mg/m 1的对照品储备液， 精密量取Ind,置10ml容量瓶，加甲醇稀释置刻度，摇匀，即得2. 3.3供试品溶液的制备：取药材粉末（过3号筛）0.5g,精密称定，置50 ml具塞 锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL,密闭，称重，超声提取45miii后取出，称重， 加甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2. 3.4线性范围考察：分别精密吸取0. 2ml. 0.5ml、lml、1.5ml、2ml的藁本内酯 对照品储备液，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释置刻度，摇匀，得浓度分别为0. 0484mg/nil> 0. 121 mg/ml> 0.242 mg/ml、0. 363 mg/ml> 0. 484 mg/ml 的对照 詁溶液，吸取上述不同浓度的对照甜溶液各10M,分别进样测定，以藁本内酯质 量x（昭）对峰面积积分值A进行线性冋归，得标准曲线方程A=2167715x+116629, r=0.9998,表明藁本内酯在0.484|ig〜4.84pg范围内与峰而积积分值呈良好的线性 关系2. 3.5精密度试验：取对照品溶液，依选定的色谱条件连续进样6次，测定峰面 积，其RSD为0.58 %( n = 6)2. 3.6稳定性试验：分别取对照品溶液和供试品溶液于棕色瓶中，密闭、室温保 存于0, 2, 6, 12, 24 h进样2次，测定藁本内酯的峰面积，其RSD分别为0.38 %, 0.86 % (n = 5)说明藁本内酯在此溶液中稳定性良好2. 3.7重复性试验：取同一样品粉末6份，照供试品溶液制备方法制成供试品溶 液，进样测定，计算藁本内酯的含量，其RSD为1.89%(n = 6)o说明此方法重复 性良好。

2. 3.8加样回收率试验：取已知藁本内酯含量的川茸药材约0.25 g, 6份，精密称 定分别精密加入藁本内酯量的对照詁溶液5ml和10ml甲醇按照供试品溶液制 备方法制成供试品溶液，分别测定藁本内酯的含量其平均回收率为96.27 %(RSD2.8%, n = 6)Tab2 Average recovery of LigustilideSamplesContent/mgAdded/mgFound/mgRecovery/%Average recovery/%RSD/%11.8751.213.01897.8221.8621.212.98796.8831.8841.213.00597.0998.6252」341.7991.213.086102.5651.8581.213.01198.1461.9211.213.10899.262. 3.9样品测定：取川茸样品10份，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液, 各进样10 U1测定2次根据回归方程计算样品中藁本内酯的含量结果表明药材 111藁本内酯含量不低于0.70%o3 •讨论3. 1传统方法提取川時挥发油多采用水蒸气蒸憾提取，提取温度高，且蒸惚液为 油水混合物，不易分离，得率低；本实验采用乙醇渗漉提取川药油，条件温和, 经济高效，能使川茸中挥发油类成分不被破坏，得到较好的分离。

3.2川茸药材现有标准(《中国药典》2005年版)尚无含量测定，本实验对川苛 中有效成分藁本内酯进行了分离鉴定，并以此为对照品，建立了HPLC含量测定 方法，所做工作将为川茸药材标准的提升提供理论依据参考文献：[1] ZHANG T M.The Chinese Herbal pharmacy.ChangSha:Hunan Science and Technology Publishing House, 2002, 255-256.[2] SATCM of Chinese herbal medicine Editorial Board. The Chinese herbal medicine. Vol.5.Shanghai:Shanghai Science and Technology Publishing House,1999:976,893.[3] TAO J Y. Angelica component ligustilide's effect of antiasthmatic.Phannaceutical Journal, 1984, 19(8):561.[4] WU G T, SHI L F, HU J H. Research of determinating ligustilidc in Chuanxiong by Supercritical fluid extraction .Pharmaceutical JournaX, 1998, 33(6)： 457.[5] LING。