SN_T 1781-2023 进出口化妆品中咖啡因的测定.docx

SN/T 1781—2023进出口化妆品中咖啡因的测定1 范围本文件规定了进出口化妆品中咖啡因的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法本文件第一法适用于液态水基类、膏霜类、乳液类、香波类、固 态 散 粉 类、唇 膏 类 等 进 出 口 化 妆 品 中咖啡因的液相色谱法测定;第二法适用于液态水基类、膏霜类、乳液类、香波类、固态散粉类、唇膏类等进出口化妆品中咖啡因的液相色谱-质谱/质谱法测定和确证2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必 不 可 少 的 条 款其 中,注 日 期 的 引 用 文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包 括 所 有 的 修 改 单)适 用 于本文件GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义第一法 高效液相色谱法 HPLC 法)4 方法提要试样采用甲醇-水-正己烷超声提取净化后,经高效液相色谱仪测定,外标法定量5 试剂和材料除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的一级水125. 甲醇,色谱级5. 正己烷,分析纯34 C i C 55. 甲醇-水溶液:量取50 mL 甲醇和 50 mL 水置于具塞三角瓶中,摇匀备用。

5. 咖啡因标准溶液(ofen): AS:8-08-2;纯度大于95%5 5 (5. 咖啡因标准储备液(00mg/L):准确吸取适量咖啡因标准溶液 5.4),置于10mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀该溶液于0 ℃~4 ℃保存6 1 (5. 咖啡因标准中间液(0mg/L):准确吸取适量咖啡因标准溶液 5.5),置于100mL 容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混匀该溶液于0 ℃~4 ℃保存7 1 2 5 1 21 2 5 05. 咖啡因标准工 作 液:准 确 移 取 咖 啡 因 中 间 液 (0 mg/L)(5.6)0. mL、0. mL、 mL、 mL、5 mL、0 mL 至10 mL 容 量 瓶 中,用 甲 醇 稀 释 至 刻 度,摇 匀,即 得 0. mg/L、0. mg/L、1. mg/L、1SN/T 1781—20230 0 18 : 29 12. mg/L、5. mg/L、0 mg/L 的系列标准工作溶液;于0 ℃~4 ℃保存5. 滤膜 0. μm,聚四氟乙烯滤膜5. 比色管:具塞,0 mL 1 515.0 离心管:具塞,5 mL,0 mL6 仪器和设备12346. 高效液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器。

6. 超声波清洗仪6. 漩涡振荡器6. 高速离心机7 测定步骤17. 试样的处理117.. 液态水基类、膏霜类、乳液类和香波类化妆品5 (5 ( 5 3称取试样约0. g(精确到0.01g),置于10 mL 具 塞 比 色 管 中,加 入 8 mL 甲 醇 5.1),超 声 提 取20 min,冷却至室温,用甲醇定容至刻度,混 匀 准 确 吸 取 1 mL 样 品 提 取 液 至 15 mL 离 心 管 中,加 入1 mL 水,涡旋振荡0. min加入5mL 正己烷 5.2),涡旋振荡0. min, 500r/min 离心5min弃去上层正己烷,下层清液经滤膜过滤后,供液相色谱仪测定127.. 固态散粉和唇膏等彩妆类化妆品5( 3称取试样约0. g(精确到0.01g),置于50 mL 离心管中,加入20 mL 正己烷,涡旋分散均匀后,准确加入20 mL 甲醇水溶液 5.3),超声提取20 min, 500r/min 离心5 min弃去上层正己烷,下层清液经滤膜过滤后,供液相色谱仪测定27. 测定217.. 液相色谱测定条件液相色谱参考条件如下:C 5 6: 04a) 色谱柱:18 柱, μm,4. mm(内径)×250 mm,或相当者;b) 流动相:甲醇+水,梯度洗脱,见表1;c) 流速 1. mL/min;d) 柱温:0 ℃;1e) 进样量:0μL;2f) 检测波长:75nm;2梯度时间/min甲醇/%水/%050502505031090510905.15050155050SN/T 1781—2023表1   流动相梯度洗脱程序Xi = (-c   0)×V 10001000      …………………………(1 )m    ×227.. 定量测定( ( 11将标准工作溶液 5.7)与试样溶液按色谱条件 7.2.)进行测定,以标准溶液浓度为横坐标,对应的峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量。

试样溶液中待测物的响应值应在标准工作曲线的线性范围内,超出线性范围则应稀释后再进行分析必要时,阳性样品需经液相色谱-质谱/质谱法进行确证试验咖啡因的标准物质液相色谱图参见附录 A.237.. 空白试验除不称取试样外,均按上述步骤进行8 结果计算和表述1用色谱数据处理机或按式()计算试样中咖啡因的含量,计算结果须扣除空白值:c式中:Xi ———试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/kg);μμgc ———由标准曲线得到的样液中被测组分的浓度,单位为微克每毫升(g/mL);c0 ———由标准曲线得到的空白试验中被测组分的浓度,单位为微克每毫升(g/mL);V ———样液最终定容体积,单位为毫升(mL);m ———最终样液所代表的试样质量,单位为克()计算结果保留三位有效数字9 定量限本方法的定量限为10 mg/kg10 回收率1化妆品中咖啡因的添加浓度及回收率数据见附录 B.3SN/T 1781—2023L第二法 液相色谱-质谱/质谱法(C-MS/MS法)11 方法提要试样采用甲醇-水-正己烷提取 净 化 后,离 心,取 清 液 稀 释 后 供 液 相 色 谱-质 谱/质 谱 仪 测 定,外 标 法定量。

12 试剂和材料除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的一级水无特别说明,其他试剂和材12料的要求与5 一致12. 乙腈,色谱级12. 甲酸,色谱级 / 1312. 5 mmolL 甲酸溶液:吸取96μL 甲酸(2.)至 500 mL 水中,摇匀备用4 5 ( 512. 咖啡因标准使用液(00μg/L):准确移取咖啡 因 标 准 中 间 液 5.6)2. mL 至 50 mL 容 量 瓶 中,用甲醇稀释至刻度,摇匀该溶液于0 ℃~4 ℃保存5 5 1   4 2 50 0 0 0 0212. 咖啡因 标 准 工 作 液:分 别 准 确 移 取 咖 啡 因 标 准 使 用 液 (00μg/L)(2. )0. mL、0. mL、1. mL、2. mL 和5. mL 至 50 mL 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得 2. μg/L、5. μg/L、10μg/L、0μg/L 和50μg/L 的系列标准工作溶液,现配现用13 仪器和设备除检测仪器按照13. 规定外,其他仪器和设备的要求与6一致1 E13. 液相色谱-质谱/质谱仪:三重四级杆串联质谱仪,配电喷雾离子源(SI)。

14 测定步骤114. 试样的处理1114.. 液态水基类、膏霜类、乳液类和香波类化妆品5 (5 ( 5 3(12称取试样约0. g(精确到0.01g),置于10 mL 具 塞 比 色 管 中,加 入 8 mL 甲 醇 5.1),超 声 提 取20 min,冷却至室温,用甲 醇 定 容 刻 度,摇 匀 准 确 吸 取 1 mL 样 品 提 取 液 至 15 mL 离 心 管 中,加 入1 mL 水,涡旋振荡0. min加入5mL 正己烷 5.2),涡旋振荡0. min, 500r/min 离心5min弃去上层正己烷,准确吸取1mL 下层清液至10mL 容量瓶中,用甲醇水溶液 5.3)稀释至刻度,摇匀经滤膜过滤后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定14.. 固态散粉类和唇膏类等彩妆类化妆品5 (( 3(称取试样约0. g(精确到0.01g),置于50 mL 离心管中,加入20 mL 正己烷 5.2),涡旋分散均匀后,准确加入20mL 甲醇水溶液 5.3),超声提取20min, 500r/min 离心5min弃去上层正己烷,准确吸取1mL 下层清液至10mL 容量瓶中,用甲醇水溶液 5.3)稀释至刻度,摇匀。

经滤膜过滤后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定4梯度时间/min乙腈/%5mmol/L 甲酸溶液/%010900.5109049555.59555.511090101090化合物离子对m/z去簇电压DP/V碰撞室入口电压EP/V碰撞室出口电压CXP/V碰撞能量CE/V咖啡因195/138*4981025195/1104981023注:“*”为定量离子SN/T 1781—2023214. 测定2114.. 液相色谱-质谱/质谱条件由于不同设备存在差异,不能给出液相色谱-质谱/质谱仪的统一条件,以下条件经验证是适宜的:C , 1 3/:45a) 色谱柱:18 柱 2. mm(内径)×100 mm, μm,或相当者;b) 流动相:乙腈-5 mmolL 甲酸溶液,梯度洗脱,见表2;c) 流速 0.25 mL/min;d) 柱温:0 ℃;e) 进样量: μL;f) 离子源:电喷雾离子源;g) 扫描方式:正离子;h) 检测方式:多反应监测(MRM);1 53 3i) 质谱/质谱参考条件:气帘气压力(CUR):72kPa;电 喷 雾 电 压:500V;离 子 源 温 度(TEM):650 ℃ ;雾化器压力(GAS1):79kPa;辅助气压力 (Gas2):79kPa;多反应监测条件见表3。

表2   流动相梯度洗脱程序表3   咖啡因的多反应监测(MRM)条件2214.. 液相色谱-质谱/质谱测定和确证1  5 12将标准工作溶液(2.)按液相色谱-质谱/质谱条件(4.2.1)进行测定,以标准溶液浓度为横坐标,对应的峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量试样溶液中待测物含量应在标准曲线的线性范围之内,超出线性范围则应稀释后再进行分析在该条件下,咖啡因的多反应监测总离子流图见附录 A.。