牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用【本科临床医学论文设计下载】.doc

临床医学论文•牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用【摘要】 目的探讨牛大力多糖对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用方法采 用环磷酰胺和荷瘤的方法建立免疫抑制小鼠动物模型，小鼠以灌胃的方法给予不 同剂量牛大力多糖，利用MTT检测淋巴细胞转化及巨噬细胞吞噬中性红实验，分 析牛大力多糖对免疫抑制小鼠的影响结果牛大力多糖可增强吞噬细胞的吞噬 功能，增加抗体形成细胞的数量，促进淋巴细胞转化结论牛大力多糖明显具 冇增强小鼠免疫功能的作用，以高剂量组效果最为显著关键词】 牛大力多糖；环磷酰胺；荷瘤；免疫调节Abstract : Objcctivc To investigate immunorcgulatory activity of polysaccharide of Niudali (NDLS) on immunosuppressed mice.Methods The mode 1s of immunosuppressed mice were established by treating with cyclophosphamide and tumor-bearing. Di fferent doses of NDLS were oral ly administered to the mice. MTTmethod was used to observe the prol iferat ion of lymphocytes and the function of macrophages in abdominal activity was al so measured. Spect rophotomet ry was adopted to evaluate the abi1i ty of plaque forming cells.Results NDLS enhanced the function of macrophage, increase the amount of plaque forming cells, and promote the prol i ferat ion of lymphocytes ・ Conclusion NDLS can enhance the immunofund ion of immunosuppressed mice.Key words : polysaccharide of Niudali; cyclophosphamide;tumor・beai-ing; immunoregulat ion牛大力为豆科崖豆藤属植物美卜jlj崖豆藤(Mil let tin specisoa Champ) 5以 根入药，始载《花草药性备要》全年可采。

以秋季挖根为佳其性平，味甘，归 肺、肾经具有补虚润肺、强筋活络的功能，药理硏究表明其对实验小鼠B淋巴 细胞分泌特异抗体及T淋巴细胞产生白介素・2具有免疫调节作用〔1〕但是对 于牛大力的化学成分及其生物活性少有报道，本实验硏究了牛大力多糖(NDLS) 对环磷酰胺(Cy)和荷瘤所致免疫功能低下小鼠的免疫调节作用，以期为牛大力的 开发硏究捉供基础依据1材料与方法1.1药物 牛大力经南方医科大学中医药学院中药鉴定教硏室陈兴兴鉴 定，用无菌生理盐水配成所需浓度1.2试剂与仪器 (1)试剂：1640培养液、MTT、ConA均为Hyclone公司 产品Cy为上海第十二制药厂产品2)仪器：DG3022型酶联免疫检测仪，华 东电子仪器厂；721型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；5%CO2培养箱 (WJ-3A)，上海跃进医疗器械厂1.3动物KIH种小白鼠50只，体重18〜22 g，由南方医科大学实验动物 中心提供，雌雄各半1.4实验方法1.4.1分组及给药KIH种小鼠50只，体重18〜22 g，雌雄各半，随机分 为对照组、模型组、NDLS低中高剂量组(100、200、400 mg/kg)，每组10只 对照组、模型组给予同容量的生理盐水，每天1次，连续10 d。

1.4.2造模〔2〕于给药第4天ip 60mg/kg Cy，建立免疫低下小鼠模型 无菌条件下抽取接种7 d小鼠的腹水，用灭菌生理盐水1:3稀释，接种小鼠足 趾丿支下，0.2 ml/只，于接种后第2天开始给药，10 d后处死力、鼠，建立荷瘤力、 鼠模型1.4.3抗体形成细胞(PFC)的测定〔3〜4〕 采用溶血分光光度法，于给药 第4天ip 5%新鲜无菌绵羊红细胞(SRBC)悬液0.2 ml进行免疫，末次给药后1 h 处死小鼠，制备脾细胞悬液，取1 x 107脾细胞悬液、1:10豚鼠血清和0・2% SRBC 各1 ml混匀，37 C水浴1 h，离心取上清，用721分光光度计在560 nm处 测吸光度1.4.4淋巴细胞转化实验〔5〕给药结束后处死动物，无菌取脾，制备脾 细胞悬液将同一组细胞悬液混合，调细胞浓度为5xl06/ml，取150 “ 1细胞悬液加入96孔培养板，并加入50 Q ConA(终浓度2 /zg/ml)，置37 C 5% C02培养箱培养48 h，弃上清，加MTT 10 “1孵育4 h，每孔加酸化异丙醇100 “ 1，用酶标仪在570 nm处测定吸光度1.4.5腹腔巨噬细胞吞噬功能实验 无菌抽取荷瘤小鼠腹腔液，离心洗涤 2次‘用培养液将细胞浓度调至1.5xl06/ml，于96孔板加细胞悬液200 “ 1，置37 C 5% C02培养箱过夜，取出，弃上清，每孔各加0.073%的中性红50 “1， 继续培养30 min，弃中性红，用预温的PBS洗2次，再加细胞裂解剂，用酶标 仪在540 nm处测定吸光度。

1.5统计学方法 统计分析采用SPSS13.0软件，结果以均数土标准差表示, 经方差齐性检验后行单因素方差分析，方差齐性时，采用LSD方法进行组间多重 比较;方差不齐时，采用DunneHT3方法进行组间多重比较，以P<0.05定为差异 有统计学意义2结果2.1牛大力多糖对Cy处理”、鼠脾淋巴细胞增殖能力勻PFC的影响 实验结 果表明牛大力多糖可明显捉高Cy处理小鼠脾淋巴细胞无丝裂原的OD値、ConA 的0D値和PFC的0D値，口与剂量呈正相关，详见表1表1牛大力多糖对Cy 处理小鼠脾淋巴细胞增殖能力与PFC的影响2.2牛大力多糖对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力与PFC的影响 实验结果 表明牛人力多糖可明显提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞无丝裂原的0D値、ConA的0D 値和PFC的0D値，且与剂量呈正相关，详见表2表2牛大力多糖对荷瘤小鼠 脾淋巴细胞增殖能力与PFC的影响2.3牛大力多糖对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的影响 实验结果表 明牛大力多糖可明显提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力，且与剂量呈正相关， 详见表3表3牛大力多糖对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的影响3讨论机体的免疫功能与肿瘤的发生发展有密切关系。

当宿主免疫功能低下或受抑 制时，肿瘤发牛率增高，而在肿瘤进行性生长时肿瘤患者的免疫功能受抑制，二 者也互为因果〔6〕植物多糖具有显著的免疫活性，尤其是在抗肿瘤方面疗效明确Cy为较强 的免疫抑制剂，它对多种免疫活性细胞均有抑制作用肿瘤患者常伴有免疫功能 低下及免疫器官萎缩目前认为，机体的免疫功能降低有利于肿瘤的形成和发展 因此，本实验采用Cy和荷瘤的方法制备免疫功能低下的动物模型结果显示， 对照组和模型组实验指标差异具有统计学意义，说明本实验成功复制了实验动物 模型实验硏究表明，NDLS可促进免疫抑制小鼠的IgM抗体的生成，增加抗体 形成细胞的数量，促进B淋巴细胞增殖及分泌NDLS对免疫抑制小鼠和由ConA 诱导的脾T淋巴细胞转化能力低下的现象均有明显增强无丝裂原作用，并呈浓度 依赖性的双向作用机体免疫状态失常是肿瘤发生勻发展的重要因索，免疫功能抑制或紊乱， 使肿瘤细胞能够逃避机体免疫系统对其的杀伤作用肿瘤细胞分泌的可溶性免疫 抑制因子可诱导免疫抑制细胞活化，进一步削弱机体整体的免疫功能，因此肿 瘤患者多表现不同程度的免疫功能减弱目前已知针对多种病毒、肿瘤的细胞免 疫是机体的重要防御因素〔7~8〕。

提高肿瘤病人的免疫机能是肿瘤免疫治疗的 重要方面，此项硏究为牛大力多糖提高肿瘤患者免疫功能提供了实验依据该药 具有药源充足、疗效显著、毒副作用小及不易产生耐药性等优点，具有广阔的应【参考文献】〔1〕吕世静，黄槐莲,吴宋厦•牛大力对抗休及IL・2产生的影响〔J〕•上海免 疫学杂志,1997,17(1):56.〔2〕戴伟娟，司瑞运，辛勤，等•无花果多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用〔J〕・ 中国中医药信息杂志,2002,9(3):23・〔3〕徐叔云，卞如廉，陈修•药理实验方法学〔M〕•第2版.北京:人民卫生出版 社，1991 : 1228.〔4〕熊平原•医学免疫学与微生物学实验教程〔M〕•第2版•南宁:广西师范人 学出版社，1997 : 15.〔5〕戴伟娟，索金良，林志彬.4・硒硫酸酯多糖体外给药的免疫药理学硏究〔J〕• 北京医科大学学报,1994,26(2):83・〔6〕Tsai JP, Chen HW, Cheng ML, et al. Analysis of host versus tumor interaction in cancer patients: opposing role of transforming growth factor2bctal and intcrlcukin26 in the development of in situ tumor immunity 〔J〕 . Tmm unobiol.2005,210(9):661-671.〔7〕Tomas H, Veronica C, Neuman N,et al. Effect ive induct ion of HIV-specific CTL by mul t i -epi tope using gene gun in a combined vaccination regime [ J ] . vaccine,1999 * 17 :589-596.〔8〕 Sin KQ,Hama JK,Sasaki S,ct nl. IL・15 expression plasmid enhances cel1・mediated i mmun i t y induced by an HIV・1 DNA vaccine 〔J〕・ vaccine,1999,17:858-866.。