平板菌落数法.ppt

微生物学实验微生物学实验实验八实验八 微生物检测微生物检测 刘森林 执 教 单单 位位 生命科学学院生命科学学院生命科学学院生命科学学院v学习平板菌落计数法学习平板菌落计数法实验目的实验目的实验原理实验原理v1．编号．编号v取无菌平皿取无菌平皿9个，分别用记号笔标明个，分别用记号笔标明10-4、、10-5、、10-6（稀释度）各（稀释度）各三套另取三套另取6支试管，加入支试管，加入9ml无菌水，依次标明无菌水，依次标明10-2、、10-3、、10-4、、10-5、、10-6v2．稀释．稀释v水样：用水样：用1ml无菌试管吸取无菌试管吸取1ml样品精确加入加有样品精确加入加有9ml无菌水的无菌水的10-1的试管中，此即为的试管中，此即为10倍稀释将倍稀释将10-1试管振荡，使其充分混匀用试管振荡，使其充分混匀用另一吸管吸取另一吸管吸取10-1菌液菌液1ml，精确加入，精确加入0.5ml至至10-2试管中，此即为试管中，此即为100倍稀释其余倍稀释其余10-3、、10-4、、10-5、、10-6依次类推依次类推v固体样品：准确称取固体样品：准确称取10g上午膜样，加入上午膜样，加入90ml无菌水中，充分混匀无菌水中，充分混匀后即为后即为10倍稀释。

将倍稀释将10-1试管振荡，使其充分混匀用另一吸管吸试管振荡，使其充分混匀用另一吸管吸取取10-1稀释液稀释液1ml，精确加入，精确加入0.5ml至至10-2试管中，此即为试管中，此即为100倍稀倍稀释其余10-3、、10-4、、10-5、、10-6依次类推依次类推 三三.实验步骤实验步骤v3．加样倒平板：．加样倒平板：v用不同的灭菌吸管分别吸取用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、、10-5、、10-6稀稀释液释液1ml，分别注入，分别注入3个灭菌培养皿中分别立个灭菌培养皿中分别立即倾注约即倾注约15ml已熔化并冷却到已熔化并冷却到45Ċ左右的牛肉膏左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀（每稀释度做水样与培养基充分混匀（每稀释度做3个）另取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照培养基凝固后，倒置于，做空白对照培养基凝固后，倒置于37℃℃温箱中培养温箱中培养 三三.实验步骤实验步骤v4．计数．计数v 培养培养24-48h后，取出培养平板，并按下后，取出培养平板，并按下列公式进行计算：列公式进行计算：v 每毫升中菌落形成单位（每毫升中菌落形成单位（cfu））=同一稀同一稀释度的平均菌落数释度的平均菌落数x稀释倍数稀释倍数v 注：注： 一般选择每个平板上长有一般选择每个平板上长有30-300个个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。

菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜 三三.实验步骤实验步骤v三．作业：三．作业：v 计算菌体含量计算菌体含量(单位单位:cfu/mL)。