药物分析 第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析.ppt

第九章 二氢吡啶类钙 通道阻滞药物的分析 药物分析 主讲: 戈振凯 药物分析教研室 v定义义: 钙钙通道阻滞药药，是指能选择选择 性地阻滞 Ca2+经细经细 胞膜上电压电压 依赖赖性钙钙通道进进入胞 内、减少胞内Ca2+浓浓度，从而影响细细胞功 能的药药物，也称 “钙钙拮抗药药”（calcium channel blocker） 二氢吡啶类（Dihydropyridines，DHP） 钙通道阻滞药物：为目前临床上特异性最高、 作用最强的一类钙拮抗剂，广泛应用于缺血性 心血管疾病，高血压、脑血管疾病等的治疗 硝苯地平为第一个上市的DHP药物 v中国药典2010版收载： 硝苯地平、尼群地平、尼莫地平、尼索地平、 非洛地平及制剂17种 v其他国家药典收载： 苯磺酸氨氯地平、拉西地平、伊拉地平、尼伐 地平、盐酸尼卡地平及制剂 一、结结构(Structure) 吡啶的结构： 母核结构：苯基-1,4二氢吡啶的母核 第一节 二氢吡啶类药物的结构与性质 二氢吡啶类药物的基本骨架 ： 为活性必需，变成 吡啶环或六氢吡啶环 活性消失 为活性必 需，若为乙 酰基或氰基 活性降低， 若为硝基则 激活钙通道 邻、间位有吸 电子基团活性较 佳，对位取代活 性下降 取代基与活性关系次序 ： H 甲基环烷基苯基 或取代苯基 影响作用部 位，5,6位取 代酯基不同， 为手性中心 硝苯地平（nifedipine)尼群地平（nitrendipine) 尼莫地平（nimodipine)尼索地平（ nisoldipine) 非洛地平（ Felodipine) 拉西地平（Lacidipine) 伊拉地平（Isradipine)尼伐地平（Nilvadipine) 苯磺酸氨氯地平 Amlodipine Besylate 二、主要理化性质( (feature)feature) 1. 二氢吡啶环的还原性 二氢吡啶环具有还原性，可用氧化还原反应鉴 别和氧化还原滴定法进行含量测定。

2. 硝基的氧化性 苯环上大多有硝基，可被还原为芳伯氨基，用 重氮化-偶合反应鉴别 3. 二氢吡啶环氨基质子解离性 二氢吡啶类药物与碱作用后，二氢吡啶环1,4-位 氢可以发生解离，形成共轭环发生颜色变化，可以进 行鉴别 4. 旋光性 本类药物的C4位多为手性碳原 子，具有旋光性 6. 吸收光谱特性 本类药物具有芳环，有明显的紫外吸收特征和红 外特征定性定量分析） 5. 不稳定性 二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学 反应，因此要避光保存此类药物 第二节 鉴别试验(identification) （一）与亚铁盐的反应 一、化学鉴别法 利用苯环硝基的氧化性，可将Fe(OH)2氧化 成Fe(OH)3(红棕色沉淀） 如：尼莫地平及制剂的鉴别（ChP2010） 尼莫地平 溶 解 乙醇 新制5%硫酸亚铁铵2ml,1.5mol/L H2SO4溶液1滴 0.5mol/L氢氧化钾溶液1ml 振 摇 灰绿色沉淀红棕色沉淀 1min （二）与NaOH反应 DHP在丙酮溶液与NaOH试液反应，1,4-位氢 发生解离，产生共轭效应，显橙红色 如：硝苯地平，尼群地平，尼索地平（ChP2010 ） 橙红色溶液 硝苯地平 溶解 丙酮20%氢氧化钠溶液3-5滴 振摇 （三）沉淀反应 本类药物含有1,4-二氢吡啶结构，可与重金 属盐类形成沉淀。

如： 尼莫地平+HgCl2白色沉淀 尼群地平+KBiI4橙红色沉淀 尼莫地平 注射液 萃 取 乙醚取乙醚层蒸干，加乙醇2ml 振摇 白色沉淀 分液漏斗1%氯化汞溶液3ml （四）重氮化-偶合反应 利用苯环硝基的氧化性，在酸性条件下被锌 粉还原成芳伯胺基，可用重氮化-偶合反应进行 鉴别如：硝苯地平（BP2010，JP15） 硝苯地平 滤 液 盐酸-水-乙醇(1.5:3.5:5)10ml 亚硝酸钠溶液(10g/L)5ml 摇匀显红色 温热，锌粒0.5g,放置5min，过滤 放置2min 氨基磺酸氨溶液 (50g/L)2ml 盐酸萘乙二胺溶液 (5g/L)2ml （一）紫外分光光度法 （二）红外分光光度法 本类药物含有苯环，可采用红外吸收光谱进行 鉴别 药物溶剂 浓度 (mg/ml) nm (nm)吸收度 (A) 尼群地平无水乙醇 1353/303比值2.1-2.3 二、分光光度法 （一）HPLC法 （ 二）TLC法 BP2010：硝苯地平及制剂、非洛地平及制剂、 尼莫地平片（注射液） USP33：硝苯地平胶囊 Ch.p2010:尼群地平片鉴别 三、色谱法 二氢吡啶类药物遇光极不稳 定，易发生光化学歧化作用，引入 杂质，因此各国药典标准中均规定 在避光条件下进行有关物质检查， 大多采用HPLC法 例：硝苯地平中有关物质检查 第三节 有关物质的检查 (Detection of specific impurities) 硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降 解氧化产物： 杂质I： 2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯 杂质II： 2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯 具体方法（P259-260） 1.供试液和的制备 2.有关杂质对照品液和的制备 3.色谱条件 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇-水（3 ：2） 检测波长：235nm。

结果：按外标法以峰面积计算，均不得超过0.1%， 其他单个杂质的峰面积不得大于对照品溶液中硝苯 地平峰面积，杂质总量不得过0.5% 铈量法 UV HPLC 第四节 含量测定(AssayAssay) 二氢吡啶类药物具有还原性，可用铈量法测 定含量 铈量法：也称为硫酸铈法，是以Ce(SO4)2为 标准溶液的氧化还原滴定法 一、铈量法 基本原理： Ce4+ （黄色） C 3+（无色） 终点指示： Ce4+为黄色，Ce3+为无色， Ce4+可自身作为指示剂 ，但不够灵敏 常用邻二氮菲作为指示剂，即稍过量的Ce4+将指示 液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色 ，以指示终点的到达 特点： 以Ce(SO4)2为滴定液的氧化还原滴定，酸度低时Ce4+ 易水解，故应在强酸条件下进行；且Ce(SO4)2标准溶 液稳定，长时间放置、曝光、加热不会引起浓度变化 Ce4+还原为Ce3+是单电子转移，不是生成中间价态 ，反应简单，副反应少 大部分有机物不与Ce(SO4)2作用，不干扰测定 特别适用于糖浆剂以及片剂等制剂药物的含量测定 v邻二氮菲指示液（临用新制） v邻二氮菲-Fe(II)指示剂： v配置方法：将1.485g一水合邻二氮菲和0.695g FeSO47H2O溶于100mL水中配制。

v如硝苯地平的测定 测定原理：可用下列反应式表示： 终点时（邻二氮菲-Fe(II)指示剂）:微过量的Ce4+将 指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无 色，以指示终点的到达 如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用 该法定量ChP2010） v ChP2010硝苯地平的含量测定： 取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶 解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml） 50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（ 0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右， 继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校 正每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的 C17H18N2O6 含量计算公式： 本类药物具有苯环，在紫外光区有特征吸收，可 用UV法测定含量 尼群地平胶囊的含量测定(Ch.p2010): 操作： 10粒 100ml 100ml 吸光度A 取对照品同法测定，计算 无水乙醇取2ml 无水乙醇 353nm 测定 二、紫外-可见分光光度法 v高效分离，高灵敏度和高选择性可消除有关物质及制剂 中辅料的干扰，准确测定药物含量。

v各国药典测定这类药物及制剂大多采用此法 v例：尼莫地平分散片的含测（Ch.p2010）： v色谱条件：色谱柱：ODS，流动相：甲醇-乙腈-水(35:38:27)，流速： 1.0ml/min，检测波长：235nm v理论塔板数：以尼莫地平峰计不低于8000，分离度符合要求 v测定方法：避光操作 取细粉（相当于10mg） 50ml 50ml 峰面积 取对照品同法测定，计算 流动相 超声15min 离心10min 取上清液5ml 10ul 三、高效液相色谱法 体内药物分析 v DHP类药物口服剂量小，肝脏首过作用大，生物利用度低， 血液浓度低，定量限要求在0.1ng/ml，大多采用灵敏度高的 测定方法：GC-MS、LC-MS v血液中氨氯地平的含量测定 v 临床主要应用左旋氨氯地平，消旋氨氯地平药效只有左旋体 的1/2，血浆浓度测定主要测定左旋体 v 例：LC-MS/MS测定人血浆中苯磺酸氨氯地平的浓度（西南民 族大学学报，2009,35(4) v 以苯海拉明为内标测定 体内药物分析 体内药物分析 。