实验一淀粉酶生产菌的筛选.docx

实验一 淀粉酶生产菌的筛选 实验一淀粉酶生产菌的筛选 （一）目的要求 通过本实验教学使学生掌握淀粉酶产生菌的筛选方法；熟悉产生菌筛选的原理 （二）实验内容 1、培养基制备： 配制肉汤培养基45ml，分装于250ml三角瓶中，纱布封口，灭菌 配制初筛平板培养基（可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，硫酸镁0.5g，硫酸亚铁0.01g，琼脂20g，水1010ml,pH7.2-7.4）350ml，分装于500ml三角瓶中，封口膜封口，灭菌 2、倒平板： 将融化的初筛平板培养基冷却至50～60℃，以无菌操作法倒至已灭菌的培养皿中，至盖满底部冷却凝固待用 3、样品预处理： 取5g土样接入45ml肉汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成土壤悬液，此时的稀释度为10-1另取4支试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5共5个梯度，每支试管内加入9mL无菌水。

用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液，加入到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加入到10-3试管中，依此类推直至10-5试管 4、平板涂布分离： 分别从不同稀释度的试管中吸取0.1ml悬液，均匀涂布于初筛培养基平板上，于37℃培养24～48h 5、菌株检测： 待初筛平板长出菌落后，根据菌落不同挑取菌落进行保存并编号同时，将检测试剂（Lugol碘液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以便进行下一步实验 6、保存菌种： 将得到的菌株转接至斜面培养基上，30℃培养48～73h，待菌苔长好后，4℃保存 （三）仪器设备 高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、电子天平、电炉、恒温振荡器、恒温培养箱、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、移液管、洗耳球、试管、试管架、接种针、涂布棒等 （四）主要耗材 实验一淀粉酶生产菌的筛选 （一）目的要求 通过本实验教学使学生掌握淀粉酶产生菌的筛选方法；熟悉产生菌筛选的原理 （二）实验内容 1、培养基制备： 配制肉汤培养基45ml，分装于250ml三角瓶中，纱布封口，灭菌。

配制初筛平板培养基（可溶性淀粉20g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，硫酸镁0.5g，硫酸亚铁0.01g，琼脂20g，水1010ml,pH7.2-7.4）350ml，分装于500ml三角瓶中，封口膜封口，灭菌 2、倒平板： 将融化的初筛平板培养基冷却至50～60℃，以无菌操作法倒至已灭菌的培养皿中，至盖满底部冷却凝固待用 3、样品预处理： 取5g土样接入45ml肉汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成土壤悬液，此时的稀释度为10-1另取4支试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5共5个梯度，每支试管内加入9mL无菌水用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液，加入到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加入到10-3试管中，依此类推直至10-5试管 4、平板涂布分离： 分别从不同稀释度的试管中吸取0.1ml悬液，均匀涂布于初筛培养基平板上，于37℃培养24～48h 5、菌株检测： 待初筛平板长出菌落后，根据菌落不同挑取菌落进行保存并编号同时，将检测试剂（Lugol碘液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以便进行下一步实验。

6、保存菌种： 将得到的菌株转接至斜面培养基上，30℃培养48～73h，待菌苔长好后，4℃保存 （三）仪器设备 高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、电子天平、电炉、恒温振荡器、恒温培养箱、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、移液管、洗耳球、试管、试管架、接种针、涂布棒等 （四）主要耗材 。