实验五-肠道感染细菌的分离与鉴定.docx

实验五肠道细菌的分离与鉴定一、 目的和要求：1. 学习肠道细菌的分离鉴定程序2. 观察肠道细菌中金黄色葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌 在培养基中的生长情况及菌落特征二、 实验器材：1.5ml离心管，大便采集杯，污物杯，加样枪及枪头， 无菌，涂布棒，油性笔和打火机,EMB琼脂平板、SS琼脂平板、 麦康凯琼脂平板、振荡器三、 实验原理：肠道细菌种属很多,分布广泛,其中大多数是人类肠道 正常菌群的主要成员,一部分是条件致病菌,少数为致病菌1)伊红美蓝琼脂平板(EMB)：为弱选择培养基，供分离肠道致病菌用伊红与美蓝在培养基中起指示剂作用，分解乳糖的细菌 (如大肠埃希菌)，菌落呈紫黑色或紫红色，具有金属光泽；不 分解乳糖的细菌，菌落为无色 2) SS 琼脂平板：用于分离志贺菌和沙门氏菌的强选择培养基，它对大肠埃希菌有较强的抑制作用，而对肠道病原菌则无明显抑 制作用大肠埃希菌分解乳糖产酸，通过中性红指示剂呈红色 菌落；志贺菌和沙门氏菌不分解乳糖而分解蛋白质产生碱性物 质，故呈透明微黄色菌落产生硫化氢的细菌菌落中心呈黑色 3)麦康凯琼脂平板：胨提供碳氮源、维生素和生长因子;牛胆盐可 抑制革兰氏阳性菌的生长;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培 养基的凝固剂;乳糖为可发酵的糖类;中性红是pH指示剂，细菌发酵乳糖产酸时菌落呈粉红色并在菌落周围出现胆盐沉淀的浑浊圈。

细菌EMB平板SS琼脂平板麦康凯琼脂平板大肠埃希菌菌落紫色或紫黑色、常有金属光泽菌落较大、不透明、呈红色菌落红色、光滑湿润伤寒沙门菌菌落半透明、无色菌落半透明、无色或微黄色菌落半透明、无色痢疾志贺菌菌落半透明、无色菌落半透明、无色或微黄色菌落半透明、无色产气肠杆菌粉红色大菌落、中心可呈紫色菌落较大、淡红色菌落红色、光滑湿润变形杆菌菌落无色菌落半透明、周围、淡蓝菌落半透明、无色,扁平而薄,易融和形成薄膜状四、 实验方法：（1）4 个同学为一组将每组采集到的粪便样本进行标记(2) 2个同学分别在1ml无菌水和1ml DEPC水中加入0.1g粪便样本 振荡混匀 3) 2500rpm 离心 5 分钟后，取上清 4000rpm 离心 20 分钟弃部 分上清，离心管内留750ul样本混匀后，每个平板取250ul (—次性 移液管的第一个刻度)均匀涂布于EMB琼脂平板、SS琼脂平板及麦 康凯琼脂平板上，认真标记4)将涂布好的培养皿放置于37oC温箱培养18-24小时，观察菌落 特征五、实验结果：(1)观察培养基中出现的菌落形态及颜色并进行描述 2)分析实验结果。