消化系统疾病动物模型.ppt

第 八 章 消化系统疾病动物模型The animal models of digestives system diseases*1任立群第 一 节 急性胃炎动物模型 *2任立群体重300g左右雄性Wistar大鼠一、酸制剂诱发急性胃炎模型急性胃炎动物模型实验动物实验动物Date3任立群大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：（1）水杨酸制剂（如20 mmol/L阿司匹林或水杨酸溶液）按100 mg/kg体重灌胃；（2）10 mmol/L的醋酸；（3）不同浓度的盐酸（1，10，100 mmol/L）；（4）同种动物胆汁；（5）2 mmol/L的牛磺胆酸；（6）15%的乙醇；（2）-（6）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃； 急性胃炎动物模型 操作方法操作方法Date4任立群4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性 弥漫性炎症改变胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层 内见中性粒细胞浸润急性胃炎动物模型结结 果果病病 变变Date5任立群碱性肠液倒流入胃，刺激胃黏膜可引起炎 症，即胆汁反流性胃炎常见于原发性或继 发性幽门功能紊乱或胃切除术后。

本法取上 部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大 鼠胃内，使之对胃黏膜产生持续刺激，形成 胃炎二、胆汁反流性胃炎模型急性胃炎动物模型造模原理造模原理Date6任立群体重180~220g左右雄性Wistar大鼠 急性胃炎动物模型实验动物实验动物Date7任立群1. 制备上部小肠液；2. 大鼠禁食不禁水24h，灌胃给予受试药3h后，开腹 结扎幽门，向胃内注入小肠液，2 ml/只（正常对照 组注入2 ml生理盐水）缝合腹壁，腹腔注射阿托 品5 mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃黏膜损 伤模型的形成； 3. 4h后腹腔注射戊巴比妥钠处死大鼠，开腹，结扎贲 门，取出胃，沿胃大弯剪开用滤纸吸干表面水分 ，立即称量胃重，以胃湿重/体重之比（胃系数）表 示胃水肿程度4. 肉眼观察并计数整个胃黏膜出血点数，作为损伤指 数急性胃炎动物模型操作方法操作方法Date8任立群模型组动物胃系数和损伤指数明显增 加，肉眼观察模型组胃黏膜充血、水肿， 皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血 点急性胃炎动物模型结结 果果Date9任立群Date10任立群第 二 节慢性胃炎动物模型 *11任立群体重200~250g雄性Wistar大鼠。

一、胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型实验动物实验动物用人胆汁与甘油（v/v,1:1）的混合液灌胃，每周1 次，每次4ml，连续灌胃10周后处死大鼠，切除全胃， 用 10%甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色和刀豆 蛋 白A异染，进行组织病理学检查，重点观察幽门腺和胃 底 腺的变化操作方法操作方法慢性胃炎模型Date12任立群胃腺管全长（从黏膜表面到腺体底部的距离 ）、 腺管圆柱部（从黏膜表面到刀豆蛋白A异染阳性部 位的上缘）及颈黏液细胞（又称副细胞、刀豆蛋白 异染阳性部位的长度）均明显增长，固有腺变小 ， 这些改变以胃底部为显著，其程度与所用胆 汁 的量呈量效关系结结 果果慢性胃炎模型Date13任立群慢性胃炎模型二、同种或自身免疫法慢性胃炎模型操作方法操作方法用同种或自身的胃液（按4~5ml/kg体重取胃液浓缩 50倍），或取胃粘膜的生理盐水匀浆与弗氏佐剂以1:1的 比例制成乳剂，皮下注射进行免疫隔15~30d再注射1 次，可诱发胃粘膜炎症细胞浸润和萎缩性病变结结 果果同“胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型”Date14任立群慢性萎缩性胃炎模型Date15任立群三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型n病因:酗酒、用药不当、饮食习惯不良、 幽门螺杆菌感染、自身免疫。

n造模评价：组织病理学是评价造模成功的 最主要指标，主要观察和测量胃黏膜厚度 、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量 、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率 等Date16任立群造模方法n综合法一胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫 n综合法二去氧胆酸钠+热糊+主动免疫 n综合法三去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌n氨水单因素法慢性胃炎模型Date17任立群综合法一采用胆汁或其主要成分去氧胆酸钠、热水、免疫损伤 等复合刺激因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，造成胃黏膜 慢性损伤，胃黏膜营养代谢障碍，以致胃黏膜萎缩变薄，腺 体减少，炎症细胞浸润和结缔组织增生而形成慢性萎缩性胃 炎造模机制造模机制慢性胃炎模型实验动物实验动物体重200~250g 雄性Wistar大鼠Date18任立群u主动免疫:皮下注射佐剂抗原0.3ml，一个月后 重复注射一次同种大鼠胃黏膜生理盐水组织匀 浆与弗氏佐剂1：1乳液）u胆汁灌胃:在进行第一次免疫的同时，采用无 化脓性炎症病人的引流胆汁，按12.5ml/kg体 重，每日一次，连续70du热水灌胃:在胆汁灌胃的同日（间隔5h），灌 胃给予50℃热水12.5ml/kg体重，每日1次， 连续70d。

操作方法操作方法慢性胃炎模型Date19任立群*组织病理学检查组织病理学检查药物疗效观察药物疗效观察胃黏膜变薄，胃固有腺体减少，粘膜肌层增厚阳性对照药可用维酶素，0.5mg/kg体重，或三九胃泰 ，2~4g/kg体重，灌胃给予结结 果果慢性胃炎模型胃黏膜pH值升高，胃黏膜血流量及胃黏膜电位差下降生理性指标生理性指标 Date20任立群注意事项注意事项n每日灌胃2次，时间长，要求灌胃操作技术 熟练，避免不必要的损失n注意饲养、卫生环境慢性胃炎模型Date21任立群综合法二应用去氧胆酸钠、热糊灌胃和免疫损伤 的 方法造成胃黏膜损伤，以致胃黏膜营养代谢 障 碍，最后形成慢性萎缩性胃炎造模机制造模机制慢性胃炎模型实验动物实验动物体重180~220g 雄性Wistar大鼠Date22任立群u饮用水:以0.2%去氧胆酸钠作为饮用水，连续 90du主动免疫:第1周和第5周，皮下注射佐剂抗原 （同上）0.3mlu热糊灌胃:每隔1d灌胃给予55℃热糊10ml/kg 体重，连续90d操作方法操作方法慢性胃炎模型Date23任立群n胃酸、胃蛋白酶测定检测指标检测指标n组织病理学检查炎症分级0级：无炎症1级：在粘膜表层或底部有少量散在的白细胞2级：在粘膜各部分均有较多的炎细胞3级：粘膜内有聚集成堆的白细胞慢性胃炎模型Date24任立群粘膜病变以胃窦部及胃体部明显，表现为粘膜变薄，粘膜肌层增厚，炎细胞浸润及胃泌酸功能下降。

结结 果果慢性胃炎模型Date25任立群注意事项注意事项n同“综合法一”；n因去氧胆酸钠成本高，可以猪胆汁代替；n阳性对照药可选维酶素，0.25~0.5g/kg体重 慢性胃炎模型Date26任立群综合法三采用去氧胆酸钠、酒精、氨水和吲哚美辛等因素对胃黏膜进行较长时间的刺激 ，造成胃黏膜慢性损伤，形成慢性萎缩性胃 炎造模机制造模机制慢性胃炎模型Date27任立群*去氧胆酸钠去氧胆酸钠 模拟胃反流情况，胆酸可破坏胃黏膜细胞 的脂蛋白层，引起粘膜炎症各因素之作用各因素之作用高浓度酒精高浓度酒精 直接破坏胃黏膜屏障引起炎症低浓度氨水低浓度氨水 慢性刺激胃黏膜，从而破坏胃黏膜屏障及 胃黏膜防御功能吲哚美辛吲哚美辛 抑制胃黏膜前列腺素合成酶，使胃黏膜内 前列腺素合成减少，减弱细胞保护作用慢性胃炎模型Date28任立群体重180~220g Wistar大鼠实验动物实验动物慢性胃炎模型Date29任立群120.5%去氧胆酸钠加热至55℃，每日8 时灌胃60%酒精每周二、五8时空腹灌胃2mlA因素症状B因素造模4种因素340.1%氨水作为饮料自由饮用1%羧甲基纤维素钠配制的0.5mg/kg 吲哚美辛混悬液每日8：30灌胃2mlC因素D因素慢性胃炎模型Date30任立群u对大鼠施加上述四种因素。

u12周后，处死动物u过碘酸-希夫（PAS）染色操作方法操作方法注意事项注意事项u氨水要新鲜配制慢性胃炎模型Date31任立群氨水单因素法氨水是一种胃黏膜屏障破坏剂，大 鼠 长时间饮用低浓度氨水，对胃黏膜造成慢 性损伤，从而破坏胃黏膜屏障及胃黏膜防 御功能，使胃黏膜营养代谢障碍，导致胃 粘膜萎缩造模机制造模机制慢性胃炎模型Date32任立群体重200~220g Wistar大鼠实验动物实验动物慢性胃炎模型操作方法操作方法饮以0.02%氨水，同时每隔7d灌胃给予1%氨水1次，10ml/kg体重，连续90d，或每2d定时给予0.04%氨水1ml/100g体重1次，连续2周Date33任立群34/20实验结束后，取胃，甲醛固定3d后，自 胃体前、后壁及小弯部取材，常规石蜡切 片，HE染色及PAS染色同时测定下列指标 ：检测指标检测指标慢性胃炎模型Date34任立群检测指标1胃腺管长度2胃黏膜PAS染色阳性层厚度测量pH值测定43壁细胞计数慢性胃炎模型Date35任立群检测指标1胃腺管长度2胃黏膜PAS染色阳性层厚度测量pH值测定43壁细胞计数乌拉坦腹腔注射麻醉下开腹，在腺 胃部开一个小口，将pH计玻璃电极 插入胃内测量胃体部及幽门部胃黏 膜表面pH值。

慢性胃炎模型Date36任立群37/20结结 果果胃体部胃黏膜腺体总长度、腺管腺部长度、表面上皮厚度均明显减少；胃黏膜PAS染色阳性层显著变薄；胃黏膜壁细胞数明显减少；胃黏膜表面pH值明显升高慢性胃炎模型Date37任立群注意事项注意事项n大鼠以成年雄性大鼠为佳，幼龄大鼠胃黏膜 修复能力强，造模后其胃黏膜萎缩的程度较 成年鼠轻n本法胃黏膜萎缩的程度较综合法轻，可加 大氨水浓度和延长造模时间以加重病变n氨水具有挥发性，应隔日配制以保证其浓 度 n表面上皮细胞及其下的腺上皮能分泌中性糖 蛋白，PAS反应阳性，颈粘液细胞亦呈阳性 反应慢性胃炎模型Date38任立群第 三 节急性胃溃疡动物模型 *39任立群溃疡病的病因n致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药 不合理应用、幽门螺杆菌感染等n防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、 粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长 因子和内生性前列腺素等n溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素 的平衡失调所致Date40任立群① 应激法② 幽门结扎法③ 药物法④ 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物模型在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结 扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血 平法和乙醇法可任选其一。

乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松 ……Date41任立群① 应激法② 幽门结扎法③ 药物法④ 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物模型治疗性给药——醋酸法复制的模型 预防性给药——其他模型乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松 ……Date42任立群① 应激法② 幽门结扎法③ 药物法④ 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物模型阳性对照药： H2受体拮抗药——西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁 等 加强胃黏膜防御功能——甘珀酸，果胶铋，硫糖铝乙醇 组胺 促胃液素 肾上腺类固醇 水杨酸盐 血清素 利血平 保泰松 ……Date43任立群研究抗胃溃疡药物胃黏膜形态观察胃分泌试验胃黏膜血流量测量胃粘液测定抗炎镇痛试验抑制幽门螺杆菌试验等Date44任立群一、应激性胃溃疡模型Date45任立群应激刺激 血管收缩 胃运动亢进 副交感神经-垂体-肾 上腺系统兴奋性↑ 应激性溃疡胃酸、胃蛋白酶和胃泌素分泌↑ 胃黏膜缺血、缺氧和 抵抗力↓ 交感神经兴奋性↑ 应激性胃溃疡模型 造模机制造模机制Date46任立群应激刺激有那些?外伤休克感染过冷、过热心理创伤 饥饿 水浸束缚 应激性胃溃疡模型Date47任立群体重1。