MS培养基配方.doc

实验八MS培养基的配制和灭菌一、实验目的：了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法二、实验材料：天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶三、方法步骤1、母液配制大量元素（母液I）mg/L100ml2）微量元素（母液II）（3）铁盐（母液III）⑷有机成分（母液W）WA和WB⑸植物生长调节物质（2,4-D,NAA）以上各种营养成分的用量，除了母液I为10倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液其中，母液I、母液II及母液W的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1L母液III的配制方法是：将称好的FeSO4・7H2O和Na2-EDTA・2H2O分别放到450mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1L，保存在棕色玻璃瓶中各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、6.苄基嘌吟（6BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（0.1mg/mL）。

其配制方法是：分别称取这3种物质各10mg，将2，4-D和NAA用少量（1mL）无水乙醇预溶，将6BA用少量（1mL）的物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL，即得质量浓度为0.1mg/mL的母液2、培养基配制（1）配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为100ml，母液11、111、WA和WB各10ml再取2，4-D10ml、NAA2ml，与各种母液一起放入烧杯中2）称取54g卡拉胶；300g蔗糖；活性炭1g3）在胶桶中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质4）加水定容至1升，开搅拌机，搅匀混合液定容至10升，搅匀5）向母液混合物加入白沙糖，继续搅拌；然后停一下搅拌机再加卡拉胶，开搅拌机混匀；接着再停搅拌机加活性炭，开搅拌机搅匀6）调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（5.4〜7.0）测培养基的pH,一直到培养基的pH为5.8为止（培养基的pH必须严格控制在5.8）（7）将培养基分装到所选用的培养容器中，约30ml/瓶8）盖住瓶口（9）灭菌。

待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖在98kPa、121.3£下，灭菌20min灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固最好放置1d后再使用四、分析1. MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累2. 在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分例如能用卡拉胶就不用琼脂3. 用搅拌机比较方便但要人工不好，分配溶液缺乏量化4. 加入活性炭可使培养基变黑，有利于离体生根，还可以降低分泌物的毒害作用附：MS培养基配方:成分分子量使用浓度（mg/L）大量兀素（母液I）硝酸钾101.111900硝酸铵80.041650磷酸二氢钾136.09170硫酸镁246.47370氯化钙147.02440微量兀素（母液II）碘化钾166.010.83硼酸61.836.2硫酸锰223.0122.3硫酸锌287.548.6钼酸钠241.950.25硫酸铜249.680.025氯化钻237.930.025铁盐（母液III）乙二胺四乙酸二钠372.2537.3硫酸亚铁278.0327.8有机成分（母液W）肌醇100甘氨酸2盐酸硫胺素VB10.1盐酸吡哆醇VB60.5烟酸VB5或VPP0.5蔗糖342.3130g/L琼脂7g/L#。