丹参药材中丹参酮ⅡA含量测定方法改进.doc

1丹参药材中丹参酮ⅡA 含量测定方法改 进作者：靳维荣，孙强，单成钢，王志芬【摘要】 目的对丹参药材中丹参酮ⅡA 含量测定方法(药典方法和改进方法)进行对比研究分析，确定改进方法的可行性和优越性方法在原高效液相色谱( HPLC)法的基础上，通过改变流动相的配比关系，对原药典测定方法作出改进，并将测定结果与药典方法测定结果进行比较结果①采用改进后的测定方法，色谱峰峰形好，丹参酮ⅡA 主峰和其它峰分离度及拖尾因子符合要求;②同一批次丹参的丹参酮ⅡA 含量测定结果表明两种测定方法无显著性差异(P0.05);同时，改进的测定方法可以将测定时间大大缩短，节约流动相结论改进后的方法重现性好，测定结果准确可靠，节约检测时间和流动相，降低检验成本，是值得推荐的一种替代方法 【关键词】 复方丹参片; 丹参酮ⅡA; 测定方法; 改进丹参是临床上广泛使用的祛瘀止痛，活血通经，清心除烦的药材， 《中国药典》2005 年版Ⅰ部采用高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA 含量在实际检测工作中发现采药典方法中的以甲醇-水(73∶27)流动相，流速 1 ml·min-1 时，丹参酮ⅡA 保留时间在 21 min 左右，出峰时间较晚，浪费流动相和检测时间。

为此，我们对丹参中丹参酮ⅡA 含量测定方法的流动相进行了改进1 仪器与试药Agilent 1200 高效液相色谱仪，Agilent DAD 检测器，Agilent Chemstation 工作2站(美国安捷伦科技公司)照品：丹参酮ⅡA(中国药品生物制品检定所，批号：110766 -200416);丹参药材(市场采购);甲醇为色谱纯 (天津市科密欧化学试剂开发中心);水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯2 方法和结果2.1 药典测定方法[1]色谱柱为 Phenomenex Prodigy ODS3-C18 色谱柱(4.60 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-水(73∶27);检测波长 270 nm，流速 1.0 ml·min-1，柱温为室温 2.2 改进的测定方法在药典测定方法基础上，改变流动相为：甲醇-水(80∶20)，其余和药典方法相同2.3 供试样品溶液的制备采用《中国药典》2005 年版Ⅰ部丹参药材中丹参酮ⅡA 含量测定项下的方法制备2.4 对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA 对照品 10.02 mg，置 50 ml 棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，另取 2 ml 置 25 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹参酮ⅡA 对照品溶液(16.03 μg/ml)。

2.5 线性关系考察按“2.2”项下的色谱条件，分别用自动进样器进5，7.5，10，15，20，25 μl 的上述对照品溶液，记录色谱图以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，线性回归，得方程: Y=1 744.1X-21.93，r= 0.999 3(n=6)，结果表明丹参酮ⅡA 0.080 2～0.400 8 μg 间呈良好的线性关系2.6 精密度和稳定性实验取“2.4”项下的对照品溶液，连续进样 6 次，记录丹参酮ⅡA 的峰面积，计算 RSD=1.33%(n=6)并于室温下放置 2，4，6，8，12，24 h 后3测定，计算测定丹参酮ⅡA 峰面积的得 RSD=1.72% (n=6)，峰面积积分值基本不变2.7 回收率实验精密称取已知含量的丹参药材样品 6 份，同“2.3”项下方法，制成供试品溶液，取供试品溶液 1 ml，置 1 000 ml 的容量瓶中，加入丹参酮ⅡA 对照品 0.015 0 mg，用甲醇稀释到刻度，采用改进后的方法进行测定，并计算回收率结果见表 1，平均回收率为 97.90%，RSD 为 1.37%表 1 丹参酮ⅡA 对照品回收率测定结果取样量 m/g 样品含量 m/mg 加入量 m/mg 测得量 m/mg 回收率(%)平均回收率(%)2.8 样品测定采用改进的测定方法和药典方法分别对同一批丹参药材中的丹参酮ⅡA 进行了测定，结果表明两种测定方法结果无显著性差异(P0.05)，结果见表 2 表 2 两种测定方法对同一批次样品测定结果测定方法样品序号丹参酮ⅡA 含量(%) 。

见图 1～4图 1 药典测定方法下丹参酮ⅡA 对照品 HPLC 图谱图 2 改进的测定方法下丹参酮ⅡA 对照品 C 图谱图 3 药典测定方法下丹参样品的 HPLC 图谱图 4 改进的测定方法下丹参样品的 HPLC 图谱3 讨论测定结果表明，改进的测定方法测定丹参样品时，丹参酮ⅡA 主峰和其它峰分离度 R 大于 1.5;主峰拖尾因子 T 在 0.98～1.03 间，符合《中国药典》2005 版Ⅰ部的要求两种方法对同一批次的丹参药材测定的结果没有显著性差异(P0.05)，但改进的测定方法可以将测定时间大大缩短，同时节约流动相，此方法经济、快速，是非常值得推荐的一种替代方法参考文献】4[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社，2005:527.。