组胺对受体亲和力常数和拮抗剂对组胺拮抗参数(pA2)的测定.docx

专业： 药学院溯》孚丿、学实验报告姓名：_万鹏辉学号：3110103840十 日期： 13.10.9 地点： 课程名称： 药理学实验 指导老师： 丁玲 成绩: 实验名称：组胺对受体亲和力常数（pD2）和拮抗剂对组胺拮抗参数（pA2）的测定实验类型: 验证型 同组学生姓名：葛倩倩、张敏哲【实验目的】利用离体豚鼠回肠制备，观察组胺对受体亲和力及拮抗剂对组胺竞争性拮抗作用，并了解pD2和pA2值的测定方法及意义实验原理】1、 组胺作用于豚鼠的回肠H1受体，引起肠肌收缩2、 根据不同浓度的组胺引起肠段收缩高度，求出pD2值3、 加入拮抗剂，若提高组胺浓度，仍能达到先前的收缩高度，表明拮抗剂对组胺有竞争性拮抗4、 在加入一定浓度的拮抗剂后，组胺浓度提高1 倍就能产生原浓度的效应，而拮抗剂这个摩尔浓度的负 对数即为pA2值5、 本实验采用苯海拉明作为拮抗剂°pD2是激动剂与受体亲和力的定量参数，称为亲和力指数pA2是 竞争性拮抗剂作用强度的参数【实验材料】豚鼠、离体器官恒温浴槽、张力换能器、Med Lab记录仪、剪刀等小型手术器械磷酸组胺溶液[3xl0-7mol/L、3xl0-6mol/L、3xl0-5mol/L、3x10-3mol/L]盐酸苯海拉明溶液[3x10-7mol/L、3x10-6mol/L、3x10-5mol/L、3x10-3mol/L] 【实验内容】1、 取一段备用回肠，两端用缝针穿线，一端系在通气钩上，放入浴槽（台氏液30ml），另一端连张力 换能器，通过记录仪描记肠段收缩；2、 让回肠在浴槽内稳定 10 分钟，记录一段基线，在浴槽内加入药液，观察并记录（约2 分钟），当肠 段收缩达顶点，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液30ml；3、 待基线回到用药前水平，记录一段基线，在浴槽内加入下一个药液，开始记录，收缩曲线至顶点开始 回落时，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液20ml；4、 如上依次加入不同量的磷酸组胺溶液： 3x10-6mol/L 0.1ml， 3x10-5mol/L0.1ml 、 0.25 及 0.5ml， 3x10-4mol/L0.1、0.25 及 0.5ml,使浴槽中磷酸组胺的最终浓度为 10-8mol/L、10-7mol/L、2.5x10-7mol/L、 5x10-7mol/L、10-6mol/L、2.5x10-6mol/L，5x10-6mol/L，描记不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线；5、 如 步骤4,每次加药均先在浴槽中加入3x10-5mol/L盐酸苯海拉明溶液0.1ml,使其终浓度为10-7mol/L， 然后依次加入不同浓度的磷酸组胺溶液，描记当溶液中有10-7mol/L苯海拉明共存时不同浓度磷酸组 胺所致的肠段收缩曲线；6、 再依次试验盐酸苯海拉明终浓度为10-6mol/L和10-5mol/L时，对磷酸组胺的拮抗作用；7、 描记完毕,测量每次加入磷酸组胺后的收缩曲线高度,将加盐酸苯海拉明前,磷酸组胺引起的肠段收 缩极限高度作为100%（Emax），计算不同组胺引起肠段收缩高度相当于极限高度的百分率。

以磷酸 组胺摩尔浓度的对数值为横坐标，以收缩高度占极限高度的的分数E/Emax）为纵坐标，作浓度反应 曲线图,然后计算 pD2 值和 pA2 值实验数据】实验记录Emax=2.5,明显不准确，但由于Emax数据不影响实验结果，为展示接下来的数据处理过程，取 Emax=3.2 进行实验操作表1离体回肠在不同苯海拉明溶度下给与磷酸组胺引起的张力(g)变化表磷酸组胺mol/L01.00E-09苯海拉明溶度(mol/L)1.00E-051.00E-081.00E-07EE/EmaxEE/EmaxEE/EmaxEE/EmaxEE/Emax1.00E-080.1060.0331.00E-070.1780.0562.50E-070.6600.2065.00E-071.3250.4140.3500.1091.7900.5590.0550.0170.0180.0061.00E-061.9870.6212.50E-062.4000.7501.7590.5501.9240.6010.0860.0270.0460.0145.00E-062.4900.7782.3600.7382.1600.6750.6630.2070.0950.0301.00E-052.8800.9002.6900.8411.3010.4070.2630.0825.00E-052.8500.8913.0100.9412.9500.9221.4060.439表2磷酸组胺溶度与lg(x-l)关系表磷酸组胺[D](mol/L)-lg[D]Emax/E=xlg(x-1)1.00E-088.00030.1891.465l.00E-077.00017.9781.2302.50E-076.6024.8480.5855.00E-076.3012.4150.1511.00E-066.0001.610-0.2142.50E-065.6021.333-0.4775.00E-065.3011.285-0.545E/EmaxB计算可得， pD2=5.613,[A1]=2.436*10-6计算可得 pD2=4.063，[A4]=8.653*10-5表3拮抗剂苯海拉明摩尔浓度的负对数值与lg(x-l)关系表[Ab]lg(x-1)[B]-lg[B]2.44E-062.630.211.00E-099l.26E-05l3.60l.l01.00E-0778.65E-0593.341.971.00E-055R2值为0.9999说明线性良好，与理论符合。

计算得pA2为9.49【实验讨论】1、 为什么pD2值要以E=50%Emax效应时激动剂的负对数摩尔浓度来表示？E [DR] [ D]当药物的内在活性a为1时由于 = = 其中DR表示药物受体复合物，R表示总E [R ] K + [D] tmax T DE受体量，D表示药物，Kd为解离常数当 —=50%时，解离常数Kd即等于药物剂量[D], PD2即为max此时解离常数KD的负对数，便于计算2、 为什么pA2要以再有拮抗剂存在时，加大一倍激动剂浓度达到原来效应，这时拮抗剂的负对数摩尔浓 度来表示？[A ] E [A ]由于符合pA 二-lg[B] + lg(斗-1)，当 =50%时，即[AB]=2[A0]此时lg( b -1)项为 0，x [A ] E B 0 [A ]0 max 0pA二-lg[B]，通过图像观察或公式计算便可轻松得到，便于计算x3、 由于PD2即为此时解离常数KD的负对数，与Emax无关，且[Ab]为不同苯海拉明溶度下的pD2,因此， 在未测定Emax值的前提下，取适当Emax值进行数据分析不会影响pD2的实验结果；且由于[Ab]为 不同苯海拉明溶度下的pD2值，根据公式pA二-lg[B] + lg(tAJ-1)，取适当Emax值进行数据分2 x [A ]0析同样不会影响pA2的实验结果。