achr亚基片段联合il6dna免疫大鼠建立实验性重症肌无力模型.doc

免疫学专业毕业论文 [精品论文] AChRα亚基片段联合IL-6 DNA免疫大鼠建立实验性重症肌无力模型关键词：重症肌无力 DNA免疫 乙酰胆碱受体α1亚基 自身免疫性疾病重症肌无力摘要：目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基用来自不同物种的包含AChRα1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法 方法： 将含人乙酰胆碱受体α亚基N端主要免疫区(AchRα205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5α菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。

构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchRα205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchRα205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显 结论： 以人AChRα205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。

正文内容 目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基用来自不同物种的包含AChRα1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法 方法： 将含人乙酰胆碱受体α亚基N端主要免疫区(AchRα205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5α菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchRα205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。

免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchRα205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显 结论： 以人AChRα205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基用来自不同物种的包含AChRα1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用。

但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法 方法： 将含人乙酰胆碱受体α亚基N端主要免疫区(AchRα205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5α菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchRα205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchRα205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显。

结论： 以人AChRα205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基用来自不同物种的包含AChRα1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法 方法： 将含人乙酰胆碱受体α亚基N端主要免疫区(AchRα205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5α菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒。

构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchRα205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchRα205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显 结论： 以人AChRα205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型。

目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基用来自不同物种的包含AChRα1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，可以建立实验性自身免疫性重症肌无力动物模型(EAMG)，供研究重症肌无力的发病机制和寻找有效治疗方法使用但现阶段使用的模型建立方法或材料来源缺乏，或成本高昂，成功率也相差较大本研究用DNA免疫方法探索一种更简便、实用的EAMG模型建立方法 方法： 将含人乙酰胆碱受体α亚基N端主要免疫区(AchRα205)的基因、含大鼠白介素-6(IL-6)cDNA序列的基因分别亚克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)构建pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6两种重组质粒，转化DH5α菌，筛选阳性克隆，进行测序鉴定pcDNA3.1(+)/AchR a205质粒存在两处碱基突变，采用定点突变技术纠正后获得了含正确基因序列的重组质粒构建的pcDNA3.1(+)/IL-6质粒经测序鉴定无突变用重组质粒pcDNA3.1(+)/AchRα205单独或与pcDNA3.1(+)/IL-6联合免疫雌性Lewis大鼠，对照组用pcDNA3.1(+)免疫。

免疫后观察实验大鼠的临床症状，并对血清抗AChR抗体、肌电图、组织病理与超微结构、组织基因整合和RNA转录进行检测与评估 结果： 实验组动物出现了临床肌无力症状；肌电图重复神经电刺激(RNS)呈衰减反应；血清AChR抗体滴度增高，最高77.82pmol/L；组织学检查有肌细胞横断面钝圆、肌间隙少量淋巴细胞浸润和肌细胞中心核，酶免疫组织化学检测少部分肌细胞膜受体着色稀少；超微结构发现有线粒体空泡样变、突触后膜皱褶变少、变浅、结构简单化等退行性改变；这些变化在pcDNA3.1(+)/AchRα205与pcDNA3.1(+)/IL-6双质粒共注射建模组更明显 结论： 以人AChRα205基因为目的基因、大鼠IL-6基因为细胞因子佐剂、pcD-NA3.1(+)为表达载体重组的质粒pcDNA3.1(+)/AChRα205、pcDNA3.1(+)/IL-6免疫Lewis大鼠建立了EAMG动物模型目的： 引起自身免疫性疾病重症肌无力(MG)的主要免疫原是人突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(AChR)α1亚基用来自不同物种的包含AChRα1亚基主要免疫结构域(MIR)的蛋白或肽段免疫一些品系的动物，。