维生素D-营养强化剂.doc

维生素 D英文名称：Vitamin D功能：营养强化剂（一） 本次申请的维生素 D 使用范围和使用量食品分类号 食品类别 最大使用量 （g/kg）14.02.03 果蔬汁（肉）饮料 0.000002-0.00001（二）技术必要性一．维生素D对于钙、磷的吸收和代谢 至关重要，适当对食品进行强化是必要的；维生素D是脂溶性维生素，其主要的生理功能是 维持血清钙和磷的正常浓度 维生素D缺乏会导致婴幼儿佝 偻病，成人缺乏会导致骨质软化症，而老人缺乏维生素D会导致骨质 疏松维生素D的食物来源并不丰富，只存在于鸡蛋、牛肉、 鱼类，牛奶和人乳含量并不高因此对食物进行强化变得十分必要食品强化维生素D 在许多国家被采用来改善摄入水平而近几年来的关于维生素D 摄入水平的研究表明：地区因素（高纬度地区）、老年人活动受限以及生活方式等因素导致的日光暴露不足会大大降低皮肤合成维生素D 的量，因此通 过食物补充维生素D变得尤为重要二． 根据试验性使用效果报告，果蔬汁饮料是合适的载体根据中华人民共和国卫生部2004年第6号公告内容：维生素D使用于强化钙的果汁及果汁饮料类、果味饮料类中，最大使用量为2-10μg/L也就是说：维生素D是允许使用在果蔬汁饮料和果味饮料中的，只是前提是必须为强化了钙的果蔬汁饮料和果味饮料。

我们认为，目前市场上强化钙的食品种类繁多，钙的强化并不一定要通过同一载体来实现，饮料中的维生素D同样可以促进 其他食物来源的钙的吸收，根据我们进行的维生素D3在果蔬汁饮料中的试验性使用效果报告和稳定性报告，强化维生素D3对于果蔬汁饮料外 观、口味等性状均无明显影响；维生素D3在果蔬汁饮料中的稳定性比较好，可以在 产品保质期内保持一定的稳定性在工艺上具有可实现性三）维生素 D 的质量规格要求1.性状：类白色至淡黄色自由流动的颗粒2.技术要求2.1 理化指标项 目 指 标粒度美国标准筛100％通过 20 号筛至少 80％通过 40 号筛至少 15％通过 100 号筛水中的分散性 符合规定干燥失重 （％） ≤ 8鉴别－维生素 D3 －生育酚 符合规定符合规定维生素 D3 和维生素 D3 前体的含量（IU/g） 100000-110000微生物菌落总数（CFU/g） ≤酵母菌和霉菌 (CFU/g) ≤肠道菌 (CFU/g) ≤大肠杆菌 (10g 中)100010010不得检出沙门氏菌 (25g 中)金黄色葡萄球菌 (10g 中)铜绿假单胞菌 (10g 中)不得检出不得检出不得检出2.2 检测方法2.2.1 水中分散性将 100 毫升 20℃恒温的蒸馏水加入到 250 毫升锥形瓶中，加入 1 克样品，用磁力搅拌器搅拌 5 分钟，形成一均质的不含任何固体颗粒的乳状液。

2.2.2 干燥失重精确称取 1 克（准确称量）样品，在 105℃干燥 4 小时2.2.3 鉴别－ 维生素 D3 应符合规定－ 生育酚 应符合规定薄层色谱法（TLC）薄层板 ICN 生物医用的 ICN 硅胶板 F254，0.5 毫米流动相 环己烷－乙醚（50＋50）层析缸不必预先进行展开剂饱和溶剂前沿距离 15 厘米迁移时间 100 分钟应用：用两条垂直线将 TLC 板分成三部分分 别取 10 微升对照溶液 a、对照溶液 b 和样品溶液，在左边部分点样；分别取 10 微升对照溶液 c 和样品溶液，在中间部分点样；取 20 微升样品溶液，在右 边部分点样样品溶液：称取 1.5 克样品至 50 毫升离心管中，加入 6 毫升 2％的氨水，在60℃下超声处理 2 分钟冷却后，加入 4 毫升无水乙醇和 10 毫升正己烷，振摇 5 分钟离心，取 5 毫升上层（正己烷）清液在旋转蒸发器上蒸干，并用 0.8 毫升正己烷溶解残留物20 微升该溶液相当于大约 50 微克维生素 D3 和 40 微克生育酚。

对照溶液 a：将 50 毫克维生素 D2 晶体溶解在 20 毫升正己烷中，取 10 微升点样（相当于 25 微克）对照溶液 b：将 50 毫克维生素 D3 晶体溶解在 20 毫升正己烷中，取 10 微升点样（相当于 25 微克）对照溶液 c：将 100 毫克生育酚溶解在 50 毫升正己烷中，取 10 微升点样（相当于 20 微克）检测：将层析板置气流中干燥 2 分钟a) 用玻璃板将右边部分和中间部分盖住，用浓硫酸喷涂 TLC 板的左边部分b) 用玻璃板将左边部分和右边部分盖住，用磷钼酸溶液（10％乙醇溶液）喷 涂中间部分c) 用玻璃板将中间部分和左边部分盖住，用三氯化锑溶液（20％氯仿溶液） 喷涂右边部分三次所得到的层析谱在原点不显示浅灰蓝色的斑点，主显色斑点也没有拖尾条纹Rr 值和斑点颜色 物质 Rf a) b) 维生素 D2 0.4 红棕色 － 维生素 D3 0.4 浅绿棕色 －生育酚 0.8 － 蓝色2.2.4 维生素 D3 和维生素 D3 前体的含量尽快进行试验，避免暴露在光线和空气中。

用液相色谱法测试待测溶液：称取相当于 100 000IU 的制剂，精确到 0.1％，放入烧瓶中，加入 5ml 蒸馏水， 20ml 乙醇，1ml 抗坏血酸钠溶液，3ml 新鲜制备的50%（m/m）氢氧化钾溶液，水浴加 热回流 30min，流水冷却后转移入分液漏斗，再依次用以下溶液冲洗并入分液漏斗，水两次，每次15ml，乙醇一次 10ml，两次戊 烷，每次 50ml剧烈震摇 30 秒钟，静置分层，将下层水相移至另一个分液漏斗，加入 10ml 乙醇、 50ml 戊烷后，震摇，分层后将水相移至第 3 个分液漏斗，同时将戊烷层移入第一个分液漏斗中用戊烷两次，每次 10ml 冲洗第二个漏斗，洗液并入第一个分液漏斗在第三个漏斗中加入 50ml 戊烷，震摇，将戊 烷层移倒第一个漏斗中用 30g/l 氢氧化钾乙醇（乙醇浓度为 10% V/V）溶液洗该戊醇层，洗两层，每次 50ml用水洗，每次 50ml，洗至水层对酚酞呈中性将溶液移到磨口玻璃塞的烧瓶在 40℃水浴，旋转减压蒸发烧瓶中的物质，用流水冷却，并通入氮气储存将剩余物立即溶解在 5.0ml 甲苯 R 中，加入流动相 20.0ml 以得到浓度为 4000IU/ml 的溶液。

对照液（a）：取 10.0mg 未加热的维生素 D3 CRS 溶解在甲苯 R 中，并用流动相稀释至 100.0ml对照液（b）：将 1.0g 维生素 D3，90℃下在有回流冷凝器的水浴中加 热45 分钟，并冷却对照液（c）: 取 0.10g 未加热的维生素 D3，溶解在甲苯 R 中，并用相同溶剂稀释到 100.0ml对照液（d）:用流动相将 5.0ml 对照液（c ）稀释到 50.0ml将溶液保存在冰浴中对照液（e）：取 5.0ml 对照液（c）于容量瓶中，加入 10mg 丁羟基甲苯R，通入氮气排出空气 90℃下在有回流冷凝器的水浴中加 热 45 分钟，避光、通入氮气然后冷却并用流动相稀释至 50.0ml色谱测量可操作如下：－长度为 0.25m，内径为 4.6mm 的不锈钢柱子，用适当的硅胶填充（5um）－流动相为 2ml/min，为 3 体积戊 R 和 997 体积正己烷 R,254nm 处的分光光度计探测器建议使用自动进样装置注入适当体积的对照液（b），调整系统的灵敏度，以使主峰高至少在整个记录范围的 50％，注入对照液（b）六次当所述条件下的色谱被记录时，大致的相对保留时间为维生素 D3 前体 0.4，反式-维生素 D3 为 0.5，维生素 D3 相对标准误差不超过 1％，维生素 D3 前体和反式-维生素 D3 峰的分离度不少于 1.0。

如有需要则调整组分比例和流动相的流速以获得此分离度注入适当体积的对照液（d）和对照液（e）.按照下式计算转换因子（f）K=对照液（d）色谱中维生素 D3 的峰面积（高度）L＝对 照液（e）色谱中维 生素 D3 的峰面积（高度）M＝对 照液（e ）色谱中维生素 D3 前体的峰面积（高度）注入适当体积的对照液（a），调整系统的灵敏度以使主峰高在整个记录范围的 50％注入适当体积的试液，用同样的方法记录色谱按照下式计算维生素 D3 的含量，以 IU/g 计m=试液中待测品的量，以毫克计mˊ＝对 照液（a）中维生素 D3CRS 的量，以毫克计v＝试液的体积（25ml）vˊ=对照液（a ）的体积（100ml）SD=试液色谱中维生素 D3 的峰面积（高度）SDˊ＝对照液（a ）色谱中 维生素 D3 的峰面积（高度）Sp＝试液中前 维生素 D3 的峰面积（高度）f = 转换因子K—LMf=mˊvˊvmX XSD+(f x Sp)SDˊX 40 000 X 1000（四）维生素 D 在果蔬汁饮料中的生产工艺浓缩果汁→稀释白砂糖 →处理柠檬酸/盐→溶解香 精 →溶解维生素 D→溶解（五）维生素 D 在饮料中的检测方法饮料中的维生素 D 的检测根据 GB/T5413.9—1997 婴幼儿配方食品和乳粉 维生素 A、D、E 的测定进行。

定容 预热 脱气杀菌均质‘冷却灌装。