实验十三imvic实验.ppt

实验十一 吲哚试验 甲基红试验 伏-普试验,一.实验目的和要求,1.了解IMViC的原理及方法 2.掌握IMVIC在肠道菌群鉴定中的作用,二.基本原理,1、甲基红试验（ M.R试验） 某些细菌（如大肠杆菌、志贺氏菌、产气杆菌等）分解葡萄糖产生多种有机酸，导致培养基PH值下降培养后期，产气肠杆菌可接着利用有机酸，将其降解为非酸性末端产物，如丙酮酸、乙醇等，导致培养基PH值回升 甲基红 中性：红色 酸性：黄色,2、吲哚试验 有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色的玫瑰吲哚 大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌阴性3、乙酰甲基甲醇试验（V-P试验） 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧气氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V.P.（+）反应三.材料仪器,1.活材料：大肠杆菌、产气肠杆菌、土壤分离菌 2.培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基 3.试剂 甲基红试剂、吲哚试剂、V.P.试剂 4.器材 接种环、酒精灯、恒温培养箱,四.实验内容及方法,1. 试管标记 ：M.R.、吲哚、V.P.培养液试管各一支，标记上所要接种的菌种。

2. 接种：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中 3.培养：置37℃恒温箱中培养，在培养48h后观察结果五.实验结果,M.R.试验结果观察 于M.R.培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示吲哚试验结果观察 取吲哚试管，加入40滴乙醚，摇动数次，静置5-10分钟，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入5滴吲哚试剂，等量V.P.试剂，摇匀，以使空气中的氧溶入，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应，，记录为吲哚试验阳性结果（用“＋”表示）； 若无红色环状物出现者记录为吲哚试验阴性结果（用“－”表示）V.P.试验结果观察 取V.P.试管，加入等量（20滴）V.P.试剂（40%的KOH和5%的α-萘酚），摇匀，以使空气中的氧溶入，静置于37℃恒温箱中保温30min后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性结果（用“＋”表示）； 若不呈红色，仍未为黄中带蓝色者记录为V.P.试验阴性结果（用“－”表示）。