临床微生物检查课件 第16章-螺旋体-11检本.ppt

1螺旋体(spirochetes)概念v 是一群细长而柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物v 与细菌相似： 有细胞壁、原始核质. 以二分裂方式繁殖. 抗生素等药物敏感等.分类和命名v 根据大小、螺旋数目、规则程度及螺旋间距等分为8个属：属和代表菌所致疾病传播方式/媒介疏螺旋体属(Borrelia)(包柔体属)伯氏疏螺旋体(B. burgdorferi)莱姆病硬蜱回归热疏螺旋体(B. recurrentis)流行性回归热 体虱杜通疏螺旋体(B. duttonii)地方性回归热 软蜱奋森疏螺旋体(B. vincentii)多种口腔感染 条件致病钩端螺旋体属(Leptospira)问号钩端螺旋体(L.interrogans)钩端螺旋体病 接触疫水密螺旋体属(Treponema)苍白密螺旋体苍白亚种(subsp. pallidum)梅毒性传播苍白密螺旋体地方亚种(subsp. endemicum)地方性梅毒皮肤损伤苍白密螺旋体极细亚种(subsp. pertenue)雅司病皮肤损伤品他密螺旋体(T. carateum)品他病粘摸损伤3 主要学习的致病性螺旋体： 钩端螺旋体属(Leptospira)： 钩端螺旋体 疏螺旋体属(Borrelia)： 回归热螺旋体 伯氏疏螺旋体 密螺旋体属(Treponema)： 梅毒螺旋体4v 疏螺旋体(属)： 有510个稀疏而不规则的螺旋，呈波状。

v 密螺旋体(属)： 814个细密而规则的螺旋，菌体硬直、两端尖v 钩端螺旋体(属)： 螺旋细密、规则，一端或两端弯曲呈钩状伯氏螺旋体(G染色)回归热螺旋体(Giemsa染色)回归热螺旋体(瑞氏染色)6梅毒螺旋体(暗视野)梅毒螺旋体(镀银染色)7钩体(暗视野)钩体(电镜投影)钩体(镀银染色)8钩端螺旋体(Leptospira)一、生物学性状 形态与结构v螺旋细密、规则，形似细小珍珠排列的细链，一端或两端弯曲呈钩状v该属细菌很多，可分为两个种 问号状钩端螺旋体(对人和动物致病)； 双曲钩端螺旋体(对人不致病)钩体(电镜投影)钩体(暗视野)钩体(暗视野)钩体(镀银染色)11 螺旋体的形态、运动特点与其结构有关v 暗视野显微镜：运动活泼，呈翻转、滚动状，沿长轴旋转或扭转伸屈12 染色性vG，但着色较困难vFontana镀银染色法(钩端螺旋体和密螺旋体)呈棕黑(褐)色13培养特性v需氧或微需氧，营养要求高v柯(Korthof)氏液体培养基： 需加10%兔血清或牛血清v适宜生长温度: 2830v最适pH: 7.27.6， pH6.5死亡，最高能耐pH8.414v 生长缓慢v 在液体培养基中: 28, 12周,呈半透明云雾状生长.v 固体培养基： 13周，形成透明、不规则、直径2mm的扁平细小菌落。

v 低琼脂(0.8%1.0%)培养基： 310天形成针尖大小的半圆形菌落15抗原结构v属特异性抗原(genus-specific protein antigen, GP-Ag)钩体特有：血清学诊断v群特异性抗原：菌体脂质多糖复合物 25血清群，我国：19血清群v型特异性抗原: 表面抗原,蛋白多糖复合物 273血清型，我国：161血清型16抵抗力v60, 1min即死亡v4,14天仍生存良好在湿土或水中可存活数月v0.5%来苏、1：2000升汞、1%石炭酸1030min可杀死v对青霉素敏感17二、临床意义：人畜共患病，自然疫源性疾病传染源及储存宿主v带菌动物(我国主要为猪和鼠)传播途径v皮肤粘膜接触传播v也可通过胎盘垂直感染胎儿，导致流产；偶有经哺乳传给婴儿或吸血昆虫传播18致病物质 内毒素样物质： 毒性较细菌LPS低 溶血素： 破坏红细胞，致小羊贫血、肝肿大、坏死、出血 细胞毒性因子： 注入小鼠脑内，1-2小时出现肌肉痉挛、呼吸困难、死亡尿带菌动物污染环境(水、土壤)皮肤或粘膜消化道淋巴系统入血钩体血症中毒症状：乏力、发热、头痛、肌痛、眼结膜充血、淋巴结肿大肾、肝功能损害全身毛细血管内皮细胞损伤并伴有循环障碍。

20所致疾病v钩端螺旋体病(人兽共患病)：发热头痛一身乏，眼红腿痛淋巴大 v并发症眼：虹膜睫状体炎、脉络膜炎脑：脑底多发性栓塞性动脉炎21三、微生物学检查 1. 标本采集与处理v培养：发病早期(1周内)：血液1周后：尿液和CSFv血清学检查：发病初期和发病第34周采集双份血清测AbCSF(Cerebral Spinal Fluid): 检测抗体222.直接检查：v血液1ml2ml枸橼酸钠盐水1000rpm, 510min取上清,4000rpm, 4560min或10000rpm, 30min取沉淀检查. 暗视野显微镜检查 镀银染色 直接免疫荧光染色 免疫酶染色 DAN杂交或PCR233.分离培养：最适温度2812周观察，可见靠近培养基液面呈半透明，云雾状混浊血(12ml)脑脊液(0.5ml)导尿或中段尿离心取沉渣(加5-氟脲嘧啶，杀灭杂菌)疫水Korthof培养基28血清学鉴定(MAT)24钩体(每视野可见5060条活钩体，约为2108螺旋体/ml)已知Ab2830、2h暗视野显微镜观察蜘蛛样凝集块及菌体溶解 鉴定254.抗体检测： 显微镜凝集试验(microscopic agglutination test, MAT)v标本 发病初期和发病34周双份血清, 观察抗体滴度的动态变化。

CSF检测抗体26抗原(标准菌株47天的培养物，每视野可见5060条活钩体，约为2108螺旋体/ml)不同稀释度的病人血清、CSF2830、2h暗视野显微镜观察蜘蛛样凝集块及菌体溶解v方法：阴性对照阳性反应27v结果判断： 以出现“2”的最高血清稀释度为血清效价 一般血清效价达1:300以上有诊断意义 双份血清：增高4倍或以上，可确诊28间接凝集试验：v 胶乳凝集(测Ab)：(钩体属特异性抗原吸附于胶乳颗粒上，成为致敏颗粒Ag) Ag致敏颗粒病人血清凝集不凝集：有抗体：无抗体 TR/Patoc特异性属抗原玻片凝集试验v测IgM酶联免疫吸附试验(ELISA)：测抗体用于快速诊断vELISA法vIgM-斑点-ELISA法2930v适用于有杂菌污染的标本v常用幼龄豚鼠或金地鼠 动物试验：31检验程序：标本(血、尿、CSF)直接检出显微镜检查DNA探针/PCR分离培养(柯氏培养基)血清学检查动物接种观察发病取心血培养镜检 鉴定：血清学32梅毒螺旋体(T. pallidum, TP) TP属于密螺旋体(Treponema)，对人致病的密螺旋体有:v苍白密螺旋体又分为3个亚种：苍白亚种：梅毒(性病)地方亚种：地方性梅毒极细亚种：雅司病 (不是性病)v品他密螺旋体：人类品他病33一、微生物学特性： 形态、染色：v 814个细密而规则的螺旋，菌体硬直、两端尖。

v Fontana镀银染色：呈棕黑(褐)色v 暗视野显微镜：运动活泼，呈翻转、滚动状，沿长轴旋转或扭转伸屈34梅毒螺旋体(暗视野)梅毒螺旋体(镀银染色)35培养：v活细胞中生长在棉尾兔上皮细胞培养中能有限生长，繁殖慢，约30h才分裂一次，只能维持数代v3%4%氧时生长最宜36抗原结构：v非特异性抗原：牛心肌的心脂质(cardiolipin)抗原与梅毒磷脂抗原属异嗜性抗原，所以牛心类脂抗原与反应素可发生交叉反应用于血清学诊断v特异性抗原：梅毒螺旋体的表面特异性抗原梅毒、雅司、地方性梅毒和品他病等密螺旋体的抗原性相同37抵抗力：极弱v对干燥、冷、热很敏感，v离体在外环境中干燥12h即死亡，v50、5min死亡，v血液中的梅毒螺旋体置4，3天死亡v对常用化学消毒剂敏感，12%石炭酸数分钟死亡v对青霉素、四环素、红霉素或砷剂均敏感38二、临床意义： 致病物质：v 外膜蛋白：与细胞表面发生粘附作用v 透明质酸酶：利于螺旋体扩散到血管周围组织 自然情况下只感染人，人是唯一的传染源v先天性梅毒：从母体通过胎盘传染胎儿v获得性梅毒：性接触传播39获得性梅毒，临床上分三期：v期梅毒：感染后3周，出现无痛性硬下疳。

v期梅毒(梅毒疹期)：全身皮肤、粘膜出现皮疹血清中反应素100%()期称早期梅毒，传染性强，但破坏性小v期梅毒：病变可波及全身组织和器官404142先天性梅毒(胎传梅毒)：v经胎盘进入胎儿血流，并扩散至肝、脾、肾上腺等大量繁殖，引起胎儿全身感染，导致流产、早产或死胎；v出生梅毒儿，呈现马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎、先天性耳聋等特殊体征43三、微生物学检查： 标本采集；v下疳分泌物、皮疹渗出液、穿刺液、组织块等v血清、血浆v不能立即检查，应保存与70(用10%二甲亚砜或15%甘油保护)44检验方法：v直接检查：适用于和期梅毒暗视野显微镜：有动力的密螺旋体镀银染色：棕褐色直接荧光检测法：发荧光的螺旋体v分离培养：在无生命培养基上不生长vPCR：45v血清学试验：主要用两种类型抗原的试验 非密螺旋体抗原试验：VDRL(Venereal Disease Resarch Laboratory)试验(以胆固醇为载体包被上心脂质抗原构成VDRL抗原)USR(unheated serum reagin test)TRUST(toluidine red unheated-serum test)RPR(rapid plasma regain circle card) (以活性炭为载体吸附VDRL抗原)46v密螺旋体抗原试验：用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性抗体，用于梅毒确认。

FTA-ABS (fluorescent treponema antibody-abaorption)荧光密螺旋体抗体吸收试验FTA-ABS-DS (FTA-ABS double staining)梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验MHA-TP (microhemagglutination assay for antibodies to T. pallidum)抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝实验TPI(Treponema pallidum immobilizing test)梅毒螺旋体制动试验47其他密螺旋体苍白密螺旋体地方亚种：地方性梅毒(非性病性梅毒)人与人之间的传播是通过污染的食具临床表现与梅毒很相似 苍白密螺旋体极细亚种：雅司 传播方式主要通过与感染皮肤病损的直接接触 临床表现类似梅毒48Yaws lesion in Dominican,West Indies49 品他密螺旋体：品他病 传播也是与病损皮肤的直接接触所致 大多发生于经济较落后地区的儿童 可取皮肤标本在暗视野显微镜下观察有无密螺旋体存在，梅毒血清学试验检测血清中有无相应抗体存在 由于与梅毒螺旋体在形态、抗原结构，甚至DNA同源性方面基本相同，无法将它们各个区别。

50伯氏疏螺旋体(B. burgdorferi) 分类：v伯氏疏螺旋体(B. burgdorferi)：美国、欧洲v伽氏疏螺旋体(B. garinii)：欧洲、日本v埃氏疏螺旋体(B. afelii)：欧洲、日本 一般以伯氏疏螺旋体作为莱姆病的病原体51临床意义：v莱姆病的病原体，自然疫源性传染病，致病机制不肯定v储存宿主：主要是野生和驯养的哺乳动物，啮齿类中的白足鼠，畜类中的鹿更为重要v主要传播媒介：硬蜱52Lyme borreliosis3 week erythema migrans(游走性红斑)Lyme borreliosiserythema migrans annular 2 months old53Lyme borreliosisacrodermatitis chronica54Nymph(infected)InfectsInfectsYear 1EggsField Mice (infected)Adult FALLWINTERSPRINGSUMMERNymphAdultAttach to deerDeerLarvaOngroundLyme diseaseFall off mousefeed on miceInfected larvaLyme Bor。