S0P_15-7尿培养标准操作程序.doc

S0P_15-7尿培养标准操作程序尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症感染并非是一种单一的疾 病，而是一种临床综合症根据感染可分为上尿路感染(如肾孟肾炎)及下尿路感染，男性 还可出现前列腺感染，不同部位同及时感染也很常见尿路感染是人类最常见的感染之一， 可发生于各个年龄段的人群，好发于女性，男：女之比为1:10典型的临床表现为发热、尿频、 尿急、尿痛、排尿困难和耻骨寻上压痛，表现可因患者的年龄和健康状况不同而异新生儿 尿路感染的症状往往是非特异性的、模糊的，可表现有厌食，呕吐，倦怠，无发热的菌苗血 症等；婴儿期直到2岁，常有高热；2岁以后的尿路感染才会有典型的临床表现；老年患者的 尿路感染常缺乏明显的症状，更易造成菌血症和急性肾功能衰竭，应引起重视诊断尿路感 染最常用的方法是进行尿液标本的细菌学检查，主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所 不同一、 尿液标本采集和运送见本手册《病原微生物标本的釆集运送和处原则》二、 标本验收1•申请单验收：要求尿培养申请单除患者的基本信息以外还应包括标本收集时间、收集方式、 是否己使用抗生素等，验收时应检查申请单是否填写完整2. 标本验收：(1) 检查标本标识是否与中请单相符；(2) 检查标本容器有无溢漏、渗出，是否加盖；(3) 检查送检时间是否超过规定的标本保存时间。

3. 不合格标本处理：仃)对申请单信息不全者应设法与临床医师取得联系；(2) 对标识不符、送检容器不合格，送检时间超过规定时间的标本应注明原因，退回，要求 重新留取标本，并做记录三、 实验室检査1 •涂片检查：尿路感染标本可直接做细菌培养，无需常规进行涂片检查对于临床怀疑淋病 奈瑟菌、假丝酵母菌或结核分枝杆菌感染的标本可用无菌吸管吸取尿液5-10ml 置无菌试管中，3000-4000r/min离心30min,倾去上清液，取沉渣涂片，行革兰 染色或抗酸染色后镜检2. 细菌培养：(1) 普通培养：将收集标本的容器轻轻旋转混匀，用定量接种环分别取尿液lul涂抹接种血平 板和麦康凯平板(或中国蓝平板)，35-37°C培养18・24h,观察结果对导尿、 耻骨上膀胱穿刺和已使用抗生索治疗的患者标本应增加一个10ul接种量2) 特殊培养：对怀疑有苛养菌感染者应采用耻骨上膀胱穿刺或导尿法采集样本，加种一块 巧克力平板，置5%CO2环境中培养48h检查淋病奈瑟菌、结核分枝杆菌感染时 无需做定量培养，可将标本离心后取尿沉渣进行培养，以提高阳性率3) 普通培养18-24h无细菌生长时，应将所有培养基继续培养24h。

表1尿路感染的原因及常见病原菌感染原因主要致病菌感染特点上行感染大肠埃细菌、克雷伯菌、变形杆菌、淋病奈瑟菌主要为肠道菌群或会阴部细菌逆行感染，多 见于女性，多为单一细菌感染，以大肠埃希 菌感染最常见泌尿系统解 剖结构和生 理功能改变 引起的感染大肠埃细菌、克雷伯菌、变形 杆菌、普罗威登菌、沙雷菌、 不动杆菌、假单胞菌、葡萄球 菌、肠球菌多见于留置导尿管、肾盂造痿术、尿路结石、 尿路重建、前列腺肥大、膀胱排空能力受损 的患者，容易发生多种微生物的混合感染， 易被误认为标本污染血行感染葡萄球菌、结核分枝杆菌、沙 门菌发生于菌血症的患者，血液中的细菌通过血 流进入肾脏引起感染，比较少见直接感染大肠埃细菌、葡萄球菌、链球 菌、肠杆菌外伤或肾周围器官发生感染时，细菌直接侵 入肾脏引起感染，非常少见表2不同方法采集的尿标本培养结果评价标本来源菌落数CFU/ml结果评价<5X10°无意义，仅报告菌落数及革兰染色特征，并注明是纯培养或是 混合菌生长清洁(5-10) X104纯培养有意义，报告菌落计数和细菌鉴定、药敏试验结果；混 合菌生长无意义，仅做革兰染色镜检，并报告镜检结果中段尿>105纯培养或混合菌生长，其中某种菌落数210’者有意义，需进行 细菌鉴定和药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，报告标本 污染C导尿>1033种以内细菌生长都有意义，对2种主要生长菌需进行细菌鉴 定和药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，报告标本污染。

耻骨上膀胱穿刺任意数目都有意义，所有细菌均需做细菌鉴定和药敏试验四、结果观察和报告1 •结果观察和评价：（1） 菌落计数：计数平板上的菌落数，采用1山接种量者，将菌落数乘以103；采用10ul接 种量者，将平板菌落数乘以102,即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）如菌落 生长过多无法精确计数时，则报告＞105CFU/ml2） 结果评价：正常情况下从肾脏排泌至膀胱的尿液是无菌的，但膀胱中的尿液经尿道排出 体外时可受到下尿道小正常菌群的污染，而出现细菌因此对不同方法获取的尿液标本 培养结果需正确评价，才能有效指导临床合理治疗一般认为，清洁中段尿标本中单种 细菌菌落数＞105CFU/ml可能为感染；＜5X104CFU/ml可能为污染，在两者之间需要根 据具体情况进行评估2•阴性培养结果报告：培养48h无菌落生长，即为阴性接种lul尿量者，应报告“培养48h,菌落计数V103CFU/ ml”；接种10ul尿量者，应报告“培养48h,菌落计数＜102CFU/ml”3. 阳性培养结果报告：无意义的阳性培养结果报告；纯培养报告“革兰X性X菌生长，菌落计数：XXCFU/ml”； 混合菌生长报告“革兰X性X菌和革兰X性X菌混合生长”。

有意义的阳性培养结果报告：报告菌落计数、细菌种属名称及标准抗菌药物敏感性试验 结果附录1、 关于尿培养标本的接种：由于自然排尿收集的标本很难避免会阴部及下尿道细菌污染，所 以需要定量接种、合理评价才能判断培养的细菌是否与尿路感染有关定量接种的方法有 直接划线法和倾注平板法两种，后者由于操作步骤繁琐，已几乎不被临床实验室使用直 接划线接种法的关键是应保证接种量的准确性，可使用lul或10ul的定量接种环，方法是 将接种环校准后，以垂直方向持拿，使环圈刚好浸人尿液表面(不可使尿液碰到环上方的 环柄)，取尿液进行接种无定量接种环的实验室，可使用无菌的5ul微量移液器吸取尿液 加人平板，再用接种环划线接种，将平板菌落数乘以200,即为每ml尿液中所含有的细菌 数(CFU/ml)2、 关于尿培养检验培养基的选择：没有一种平板可以适合所有尿道病原体的生长，所以应该 根据标本来源及临床对目标菌的要求选择适合的培养基和培养条件普通培养推荐使用血 平板和麦康凯(或中国蓝)平板，不能以血平板代替麦康凯或中国蓝平板3、 关于尿培养结果评价：菌落计数＞105CFU/ml时只是判诊断尿路感染的一般标准对一个 实验室而言，如果仅使用一个标准对实验结果进行解释，那么若标准制定过松，将会造成 抗生素滥用和不必要的资源浪费；制定过严，将有可能导致尿路感染的漏诊。

所以每个实 验室应在与临床医师密切合作的基础上，根据不同的情况制定不同的解释标准尿培养菌 落计数可受多种因素的影响，在一些患者即使菌落数较少，也有明显的临床意义，所以对 菌落数＜5X104CFU/ml,"规范”中认为无意义的阳性结果，不应随意丢弃，必要时应很 据患者的具体情况或与临床医师联系后，决定是否需要做细菌鉴定和药敏试验以下因索可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应予以注意：(1) 使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；(2) 尿液稀释，尿比fi＜ 1.003,营养成分减少，细菌生长迟缓；(3) 尿pH ＜5.0或＞8.5,细菌生长受阻；(4) 尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落数减少；(5) 尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖，菌落数减少；(6) 不同种类的细、生长速度不同、营养要求不同，菌落计数有所不同，有文献推荐：革兰阴 性菌以菌落计数＞105CFU/ml，而革兰阳性菌以菌落计数＞ 104CFU/ml为诊断尿路感染的标准4、尿培养检验中常见的错误：⑴将尿液标本接种于增菌液中；(2) 将中段尿标本离心后取沉渣进行一般细菌培养;(3) 标本保存吋间超时，细菌大量繁殖；(4) 直接用导尿管头划线培养；(5) 使用中段尿标本做厌氧菌培养。