【临床微生物实验】_白喉棒状杆菌和炭疽芽孢杆菌.ppt

广州医科大学 临床微生物检验,棒状杆菌属(Corynebacterium),,krnbktrm,棒状杆菌属是一群革兰染色阳性杆菌，菌体形态特征是在其一端或两端常呈棒状膨大，故名，归属放线菌目棒状杆菌科棒状杆菌属分类和特点,G+杆菌、一端或两端膨大成棒状 染色不均匀，两端浓染或有异染颗粒 无鞭毛、无芽胞 排列不规则，呈英文文字状 白喉棒状杆菌致病菌 类白喉棒状杆菌条件致病菌,第一节 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae,致病物质 (一)白喉外毒素 抗原性强 由编码外毒素的tox基因-棒状杆菌噬菌体产生,一、临床意义,作用机制： A亚单位可使细胞延伸因子-2（EF-2）灭活，影响蛋白质的合成 作用特点： 毒性强，1分子能杀一个细胞 作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有毒素受体 肿瘤细胞对此毒素敏感,A链促使辅酶上的腺苷 二磷酸核糖与EF2结合,（二）短链分枝菌酸 细菌细胞壁中的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化,所致疾病：白喉--急性呼吸道传染病,传染源：患者及带菌者 传播途径：飞沫或污染物品 临床表现咽痛、吞咽困难、淋巴腺炎、低热、全身不适及头痛 细菌------上呼吸道粘膜， 生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症： 炎性渗出，坏死，纤维蛋白 假膜窒息 毒素血液全身中毒症状 外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困难 声带麻痹---声音嘶哑 软颌麻痹---吞咽困难 心肌---心肌炎,白喉假膜,患儿咽部白膜延伸到悬雍垂,白喉在咽部形成的白膜延伸至喉内导致呼吸道阻塞（患儿表现为呼吸困难）,抗毒素免疫 感染后机体可获得牢固的免疫力 机体还可通过其它方式获得免疫力： 六月以下婴儿---------母亲 成人--------------隐性感染、人工主动免疫 易感者： 15岁儿童 成人---也有可能,免疫性：,防治原则： --人工主动免疫白喉类毒素 DPT混合疫苗：白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素（白百破混合疫苗） --人工被动免疫白喉抗毒素+白喉类毒素 --治疗：抗毒素+抗生素 早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在与细胞结合以前被抗毒素中和,二、生物学特性,白喉棒状杆菌的形态学特征,,细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状，排列不规则，呈栅栏状、V字形或L形。

奈瑟染色,革兰染色,革兰染色,白喉棒状杆菌的形态学特征,,异染颗粒 成分： 核糖核酸 + 多偏磷酸盐 作用： 储存养料，有鉴定价值,Albert染色,奈瑟法,培养特性,*吕氏血清斜面培养物 含凝固的血清，生长迅速，异染颗粒明显 *亚碲酸钾血平板 黑色菌落还原,在亚碲酸钾血琼脂平板上的白喉棒状杆菌菌落（1824 h）,亚碲酸盐,碲（黑色）,根据对亚碲酸钾的还原能力、菌落形态及生化反应可将白喉棒状杆菌分为3种类型：重型（gravis）、轻型（mitis）和中间型（intermedius）重型,轻型,菌落不溶血、不规则、有条纹,菌落溶血、光泽、凸起,轻型菌落,液体培养基： 生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同 重型：表面有菌膜，液体澄清，粗大颗粒沉淀 中间型：微细颗粒状，混浊，沉淀少或无 轻型:均匀混浊，有沉淀,生化反应：,分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、甘露糖产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖，硝酸盐还原（+）、触酶（+）、吲哚 （-）、氧化酶（-）、明胶液化（-）尿素（-） 重型能分解淀粉、糖原、糊精，迟缓分解蔗糖,变异,* 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异 *无毒株 溶原性细菌（产生外毒素）,,-棒状杆菌噬菌体 编码外毒素的tox基因,,抵抗力,* 抗寒冷和干燥 * 对湿热抵抗力弱 * 对青霉素、氯霉素、红霉素敏感 对磺胺不敏感,微生物检验,毒力试验,微生物检验,2 标本采集 3 检验方法 （1）显微镜检查 直接涂二张片，分别作革兰和异染颗粒染色。

如发现革兰阳性棒状杆菌，形态典型，且有明显异染颗粒，可作“直接涂片检出形似白喉棒状杆菌”的初步报告分离培养：,吕氏血清斜面 37、812h 涂片染色镜检 --检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断 亚碲酸钾BAP 37、2448h，黑色菌落 BAP 轻型有溶血环，应注意与溶血性链球菌鉴别,,,鉴定,形态染色、菌落特点、生化反应 糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原 鉴别棒状杆菌属不同的种 白喉：葡萄糖 （+）、麦芽糖 （+） 蔗糖 （-） API棒状杆菌鉴定试剂盒,毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验,,白喉杆菌菌苔,,,沉淀线(阳性),,含白喉抗毒素滤纸片,Elek毒力实验结果,动物试验 用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验,小 结,白喉棒状杆菌为急性呼吸道传染病白喉的病原菌；白喉毒素为其致病物质，所形成的假膜可致患者窒息 形态学检查有诊断价值，常用异染颗粒染色法；在亚碲酸钾血平板菌落呈黑色分离到本菌后应作毒力试验，确定是否为能产毒素的有毒株广州医科大学 临床微生物检验,炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis),发现炭疽芽孢杆菌的德国细菌学家科赫（Heinrich Hermann Robert Koch，18431910）,对于结核病的研究使科赫于1905年获得诺贝尔生理学或医学奖，是细菌学之父。

临床意义,引起人、畜共患的急性传染病:炭疽 致病因子：荚膜、炭疽毒素复合物,炭疽毒素复合物： 保护性抗原 致死因子 水肿因子 荚膜 上述因素均由质粒编码，是引起炭疽临床症状的原因三种蛋白结合在一起致病，单独无作用,感染途径： 皮肤粘膜接触（皮肤炭疽,最常见） 消化道（肠炭疽） 呼吸道（肺炭疽，危害最大）,皮肤炭疽（丘疹、水泡、水肿、坏死）,皮肤炭疽（特征性黑炭样坏死）,炭疽相关性安全防护,特点： 生物战武器库中主要生物武器之一 皮肤炭疽容易治愈 肺炭疽最危险，按甲类传染病管理 防护： 专用实验室或指定区域；穿戴可处理的手套、工作服及防菌靴，可考虑使用头部装备和防尘面罩；操作台铺含消毒剂湿巾，用后浸泡消毒 污染物焚烧、高压灭菌，不能高压灭菌的应浸入0.5%过氧乙酸10mins以上，也可用4%的高锰酸钾溶液浸泡15mins以上细菌特性形态染色,革兰阳性大杆菌，两端截平或稍凹陷 有氧条件下形成芽胞、无鞭毛、可有荚膜 竹节样链状排列,革兰阳性竹节样排列大杆菌,芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央 有氧条件、温度适宜（25--30），在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖,培养特性：易培养,需氧或兼性厌氧,最适T30-35，营养要求不高 普琼平板：灰白色、扁平、不透明、表面粗糙或毛玻璃样菌落, 菌落卷发状边缘（低倍镜下），在人和动物体内能形成荚膜。

炭疽杆菌粗糙菌落和卷发样边缘,培养特性,BAP：不溶血或24h后轻微溶血（可与其他需氧芽胞杆菌区别）,炭疽杆菌粗糙菌落和卷发样边缘（血平板）,NaHCO3-BAP： --有毒株：5%CO2、3724--48h、产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) --无毒株：粗糙型菌落 肉汤培养基：沉淀生长（絮状沉淀），培养液澄清，无菌膜 明胶培养基：液化明胶，表面呈漏斗状,生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖， 余- 硝酸盐还原试验+ 卵磷脂酶弱+ 触酶+ 明胶液化+,卵磷脂酶试验阳性结果（甘露醇卵黄多粘菌素平板）,抵抗力,繁殖体抵抗力不强，但芽孢抵抗力强，在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年 芽孢耐热、耐干燥 芽孢对氧化剂敏感（1：2500碘 10min、4%高锰酸钾 15min、0.5%过氧乙酸 10min ） 10%30福尔马林（4%12%的甲醛）是最佳消毒剂，也可用10%次氯酸溶液消毒 对青霉素、头孢类、链霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、红霉素等抗生素敏感,微生物学检查,标本的采集： 分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液 严禁宰杀死畜。

标本的处理：液体标本取沉淀分离培养； 固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液等正常无菌性标本可直接肉汤增菌再分离培养检验方法,涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞 分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性培养基生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,荚膜肿胀试验,初步诊断,分离菌株具有典型的菌落形态，灰白色，不溶血或仅弱溶血， 镜下形态：革兰阳性竹节样链状排列大杆菌，有毒株有荚膜62,鉴定试验,串珠试验：接种待检菌于0.050.5U/ml青霉素培养基 37 6h 形成大而均匀的圆球状菌体 （类炭疽-） 青霉素抑制试验（青霉素5-、10+、100+U/ml） 青霉素串珠和抑制联合试验 噬菌体裂解试验（AP631炭疽噬菌体） 毒力试验：小白鼠动物试验 重碳酸盐毒力试验（含0.5%碳酸氢钠和10%马血清平板，5%CO2环境） 有毒株:粘液型菌落，有荚膜 无毒株：粗糙型菌落，无荚膜,,,,,63,炭疽杆菌串珠试验,64,,青霉素串珠和抑制联合试验,复习思考,1.恐怖分子为什么常用炭疽杆菌做生物恐怖事件的生物武器? 2.炭疽杆菌的常用鉴定试验有哪些？ 3.炭疽杆菌的致病物质由什么构成？ 4.简述炭疽杆菌的生物学特性。

66,Thank you for your attention!,,。