氨基酸的纸上层析菏泽医学专科学校.doc

荷泽医学专科学校教案课程名称生物化学课题氨基酸的纸上层析课时2学时 课型实验教学 目的1. 了解氨基酸纸上层析的原理2. 熟练掌握氨基酸纸上层析的基本操作技术教学重点1氛基酸纸上层析的原理2氨基酸纸上层析的基本操作技术授课内容【原理】用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法纸层析所用展层溶剂大多由水和 有机溶剂组成滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固 定相，有机溶剂是流动相溶剂由卜向上移动的，称为上行法；由上向卜.移动的，称卜行法 将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进 行分配由于它们的分配系数不同，不同新基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些 氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点溶质在滤纸上的移动速率用Rf值来表示：展层斑点中心与原点之间的距离R户溶剂前沿与原点之间的距离只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性依据 氨基酸无色，利用茄三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用试剂器材】1. 试剂标准氨基酸溶液（Img/mL）及氨基酸混合液展层剂：正丁醇：80%甲酸：水=15 ： 3 ： 2显色贮备液：0.4 mol/L 三酮：异丙醇:甲酸:水=20 ： 1 ： 5 （V/V）2. 器材层析缸、毛细管、培养皿、层析滤纸、电吹风、针、线、尺、铅笔【操作】1、 滤纸准备：选用新华1号滤纸，裁成10X8. 5cm方形，在距纸一端2cm处划一基线， 上每隔2cm,画一小点作点样的原点，见图。

2、 点样：氛基酸点样量以每种氛基酸含5-2 0口1为宜，用毛细吸管，吸取氛基酸样品点 于原点（分批点完，点3-4次），点子直径不能超过0.5cm,边点边用电吹风吹干3、 展层和显色：将点好样的滤纸卷制成圆筒，注意滤纸两边不能接触，以免由于毛细管现 象使溶剂沿两边移动太快而造成溶剂前沿不齐把展层剂倒入烧杯内，高度1cm.将圆筒状 滤纸放入烧杯中，注意滤纸勿与杯壁接触进行展层，当溶剂展层至距滤纸上沿1-2 cm 时，取出滤纸，作好前沿位置标记后吹干，向滤纸上喷显色液至显色，烘干用铅笔轻轻描 出各显色斑点的形状，用直尺量出各斑点中心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求 出各氨基酸的Rf值，将各显色斑点的Rt•值与一标准氨基酸的脂值比较，可得知该斑点的准确成分图1氨基酸的单向上行层析 o O——亮 混 谷氨酸1、血浆中的蛋白质是否只是纸电泳表现出的这几种？还有什么方课后 法可以更加精确的鉴定？思考 2、简介蛋白质的分离纯化方法并举例说明荷泽医学专科学校教务处。