紫外-分光光度法及UV759S紫外-可见分光光度计操作规程.doc

紫外-分光光度法及UV759S紫外-可见分光光度计操作规程 *****公司GMP文件 一、紫外—可见分光光度法 仪器的校正和检定 1 波长 由于环境因素对机械局部的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所有的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长常用汞灯中的较强谱线237.83nm,253.65nm, 275.28nm, 296.73nm, 313.16nm, 334.15nm, 365.02nm, 404.66nm, 435.83nm,546.07nm与576.9nm；或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在波长279.4nm, 287.5nm,333.7nm, 360.9nm,418.5nm, 460.0nm,484.5nm, 536.2nm与637.5nm处有锋利吸收锋，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10％的高氯酸为溶剂，配制含4％氧化钬〔Ho2O3〕的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm， 485.29nm，536.64nm 和640.52nm。

仪器波长的允许误差为：紫外区±1nm，500nm 处±2nm，700nm 处±4.8nm 2 吸光度的准确度 可用重铬酸钾的硫酸溶液检定取在120℃枯燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比拟，应符合表中的规定 3 杂散光的检查 可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定 对溶剂的要求 含有杂原子的有机溶剂，通常均有很强的末端吸收因此，当作溶剂使用时， 它们的使用范围均不能小于截止使用波长例如甲醇、乙醇截止使用波长为205nm另 外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白〔即空白光路中不置任何物质〕测定其吸光度溶剂和吸收池的吸光度，在220- 240nm范围内不得超过0.40，在241-250nm范围内不得超过0.20, 在251-300nm范围内不得超过0.10，在30nm0以上时不得超过0.05。

测定法 测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收锋波长±2nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确除另有规定外, 吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3-0. 7之间的误差较小仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带和半宽度的十分之一，否那么测得的吸光度不再增大为准由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量当溶液的PH值对测定结果有影响时，应将供试品溶液和对照品溶液的PH值调成一致 1．鉴别和检查 分别按各品种项下的方法进行 2．含量测定 一般有以下几种 〔1〕对照品比拟法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度： cX = (Ax / AR ) c R 式中 cX为供试品溶液的浓度； Ax为供试品的溶液的吸光度； cR为对照品溶液的浓度； AR为对照品溶液的吸光度。

〔2〕吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定 〔3〕计算分光光度法 计算分光光度法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行当吸光度处在吸收曲线的陡然上长或下降的部位测定时，波长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对照品和供试品的测试条件应尽可能一致计算分分光度法一般不宜作含量测定 〔4〕比色法 供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了防止干扰或提高灵敏度，可参加适当的显色剂显色后测定，这种方法为比色法 用比色法测定时，由于显色时影响显色深浅的因素较多，应取供试品与对照品或标准品同时操作除另有规定外，比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品溶液，然后依次参加等量的相应试剂，并用同样方法处理在规定的波 当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准 曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。

二、UV759S紫外-可见分光光度计操作规程 1.光度测量 1.1波长显示 按[GOTO WL] 键设置波长：用数字键输入所需测定波长值，如输入有误，按CE键，可继续消除修改，再按ENTER键确认如输入波长超出可选范围〔190-1100〕时，只要输入正确波长即可 1.2 透过率显示 1.2.1 按[AUTO ZERO]键，仪器自动调零调温度，〔调零时，光路处于Cell=R〕 1.2.2 按[F1]键，可进行T/A转换F1：〔透射比〕与Abs〔吸光度〕转换键 1.3比色架移位 1.3.1按[F3]键，进入比色架孔位移动选择屏幕显示：屏幕说明：1-R 2-S1 3-S2 4-S3 5-S4 6S-5 7-S6 8-S7：比色架孔的代码1-R一般为参比样品，其余7个为待测样品，放入比色架，分别进入相应位置进行测定，此时便可知待测样品的数据按MODE键退出 1.4 PRT：允许打印 按[PRINT]键，将屏幕的图文拷贝在绘图仪中连接并翻开使用打印机后，即可 2.光谱测量 光谱扫描的测量菜单共分上下两屏，可按 ↑ 或 ↓ 键选择。

Cell=R：当前处于光路中比色架孔为R 2.1方式：测量方式的设定 连续按[1]键，分别出现带光亮条的“ABS〞，“EN〞，“T%〞字样，可设定你所需，然后按[ENTER]键确认设定 2.2波长：扫描范围的设定 按[2]键，在起始波长数值处出现光亮条，可输入设定数值，然后按[ENTER]键确认这时光亮条出现在终止测试数值处，可输入设定数值，再按[ENTER]键确认2.3范围：测试范围的设定 按[3]键，在起始波长数值处出现光亮条，可输入设定数值，然后按[ENTER]键确认这时光亮条出现在终止测试数值处，可输入设定数值，再按[ENTER]键确认 2.4速度：扫描速度设定 按 ↓ 键，进入下一屏面，连续按[4]键，分别出现带光亮条的“中〞，“慢〞，“快〞字样，可设定所需扫描速度，再按[ENTER]键确认设定 连续按[5]键，分别出现带光亮条的“1nm 〞，“2nm〞，“5nm〞，“0.1nm〞，“0.5nm〞字样，可设定你所需的扫描波度间隔，然后按[ENTER ]键确认设定 2.6校基线：光谱扫描基线校准把参比样品，待测样品分别放入比色架后，按 [F1]键进行校基线校正。

2.7START：光谱扫描启动 基线扫描结束，按[F3]键使比色皿架移至S1，再按[START/STOP]键，仪器开始扫描，屏幕显示扫描图谱 2.8移标：扫描曲线轨迹跟踪移动标记 连续按[←]或者[→]键，移动标记会自左往右或者自右往左在象限内出现，移标所到之处，能分别检出扫描曲线相应的x与y数值(x轴为波长y轴为范围) 2.9PRT：允许打印 按[PRINT]键，将屏幕的图文拷贝在绘图仪中 2.10光谱图谱处理 按[F1]键进入图谱的缩放，峰谷检测以及存储屏幕显示： 按键分别进入 2.11曲线载入：光谱扫描图谱调出 按[F2]键，可调出已有的光谱扫描图谱供参照 3考前须知： 3.1初始化过程不能翻开样品室门 3.2仪器每条曲线最大存储扫描不大于2000点 3.3样品放入比色架时需将比色皿外端擦干，也不要让溶液溅入样品室内以防腐蚀，具挥发性样品需盖上比色皿盖 3.4仪器中所有镜面不能用手或软硬物去接触 3.5仪器长久不用回降低其寿命，长时间不用应每周开机1-2次，每次30分钟 3.6波长准确度检查为一年一至两次。