最终版-实验四十四 荧光法测定硫酸奎尼丁.doc

实验四十四实验四十四 荧光法测定硫酸奎尼丁荧光法测定硫酸奎尼丁一、目的要求一、目的要求1. 掌握用校正曲线法进行荧光定量分析2. 熟悉荧光分光光度计的使用方法二、实验原理二、实验原理硫酸奎尼丁属生物碱类抗心律失常药，分子结构如图所示由于其分子结构中具有喹啉环结构（奎尼丁为奎宁的右旋体） ，故能产生较强的荧光，可用直接荧光法测定其荧光强度，由校正曲线法或回归方程求出试样中奎尼丁的含量三、主要仪器与试剂三、主要仪器与试剂仪器 岛津 RF-1501 型荧光分光光度计，移液管（1ml，5ml） ，刻度吸量管（5ml） ，量瓶（50ml）试剂 H2SO4溶液（0.05mol/L） ，硫酸奎尼丁（原料药） ，硫酸奎尼丁对照品四、操作步骤四、操作步骤1.硫酸奎尼丁标准储备液的制备 精密称取硫酸奎尼丁对照品约 50mg，置 50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取 5ml，置 50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得硫酸奎尼丁标准贮备液2.标准系列溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁标准贮备液 1、2、3、4 及 5ml，分别置50ml 量瓶中，用硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，制得对照品标准系列溶液。

3.试样溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁试样约 10mg，置 50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取 1ml，置 50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得待测样品溶液4.测定（1）开机：先开主机电源，再开氙灯（Xe lamp） 2）确定最大激发波长和最大发射波长3）校正曲线测定：将空白硫酸溶液放入吸收池，点击自动调零按钮“Autozero” ，仪器自动进行空白校正（自动扣除空白） 输入浓度值，按顺序放入标准溶液，点击NNHHH3COHOCH2●H2SO4●2H2OH2*“Start”进行测定标准系列溶液测定完毕后，绘制标准曲线，仪器窗口将显示标准曲线回归方程（FI=K*C+B）和相关系数(r)5）试样测定：按弹出对话框的提示进行试样测定的数据（荧光强度和浓度）将显示在数据表格里根据浓度计算试样中硫酸奎尼丁的百分含量5.关机：先关氙灯，待仪器降至室温后，再关总机电源五、注意事项五、注意事项1. 在溶液的配制过程中要注意容量仪器的规范操作和使用2. 测量顺序为低浓度到高浓度，以减少测量误差3. 进行校正曲线测定和试样测定时，应保证仪器参数设置一致六、思考题六、思考题1. 测定试样溶液、标准溶液时，为什么要同时测定硫酸的空白溶液？2. 如何选择激发光波长（λex）和发射光波长（λem）？采用不同的 λex 或对λem 测定结果有何影响？1. 答：消除硫酸溶液中荧光物质对于测定的影响。

2. 答：（1）① 固定发射波长，测定激发光谱；再固定激发波长，测定发射光谱通常选择在最大激发波长和最大发射波长进行物质测定② 查阅相关文献2）可能造成定量的灵敏度降低。