实验四血乳酸.doc

实验四 血乳酸的定量测定（对羟基联苯法或杨氏改良法）储存在肌肉中的糖原和葡萄糖，在无氧的条件下分解，终产物是乳酸乳酸经扩散进入血液，称为血乳酸糖酵解释放能量不多，在生命活动过程中，其意义不大，然而在剧烈活动时，例如速度耐力训练或比赛时，由于机体明显缺氧，有氧供能系统提供的能量不能满足活动时的需要，故糖酵解供能系统就成为供能的主要途径导致大量乳酸生成，血乳酸的浓度随之增加 据研究证明，血液乳酸的含量与运动强度关系密切，血乳酸可作为评定运动强度的生化指标，而且高乳酸的训练有利于提高运动员的速度耐力素质，增强运动员的耐酸能力因此，血乳酸含量的测定，对于从事体育工作的人来说是很重要的安静时血乳酸的正常值为小于2mmol/L一、 实验目的1、学会测定血乳酸的操作方法及理解其作用原理2、进一步巩固移液管、试管实验、分光光度剂及离心机的操作技术二、实验原理用三氯醋酸沉淀血液中的蛋白质，离心制取无蛋白清液，在无蛋白清液的乳酸能被浓硫酸（H2SO4）分解成乙醛（CH3—CHO）,在铜离子（Cu2+）存在时,乙醛与显色剂—对羟基联苯（P—hydroxydiphenyl）反应，生成紫红色复合物其显色的深浅程度与乙醛的量成正比。

再与经同样处理的标准液比色，即可求出血乳酸的含量三、实验试剂及仪器（一）、实验试剂1、1%氟化钠（NaF）溶液2、10%三氯醋酸(CL,C—COOH)溶液3、 浓硫酸（H2SO4用G.P或A.R）4、4%硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶液：取硫酸铜4克，加蒸馏水50ml，可加热助溶后冷却，加蒸馏水稀释至100ml均匀即是5、乳酸标准储备液（0.05mg/ml）:取无水乳酸锂106.5mg,溶于10ml蒸馏水中，加浓硫酸2滴，移至100ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，均匀此液含乳酸1mg/ml）,置于冰箱中可长期保存6、乳酸标准应用液(0.05mg/ml):临时称取标准储备液5ml, 移至100ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度7、1.5%对羟基联苯: 称取对羟基联苯1.5g, 溶于10ml5%的氢氧化钠溶液中，加热约80℃助溶后冷却，加蒸馏水稀释至100ml，储存于棕色瓶中二）、实验仪器水浴箱、离心机、分光光度计、采血针、吸血管、消毒棉球及干棉球、移液管、试管和洗耳球四、实验操作步骤测定管（离心管）0.48ml1%氟化钠 F1新鲜血液0.02ml加1.5ml10%三氯醋酸,混匀后离心10分钟 F2取0.5ml上清液于带塞刻度试管 F3加0.03ml4%硫酸铜溶液 加浓硫酸3ml(在冰水中边加边摇) 沸水浴5分钟,然后冰水浴中冷却至15°C以下加0.05ml对羟基联苯,摇匀 37°C水浴保温15分钟,每5分钟摇一次沸水浴90秒,冷却至室温560nm比色,空白管调零读取胜测定管光密度值(OD测)五、计算血乳酸的百分含量血乳酸（mg%）= OD测/OD标χ25单位转换：mg%/9=mmol/L其中OD标值预先测得为0.165六、注意事项1、运动后血乳酸浓度高时可减少血量，若取血0.01ml，则计算结果再乘以2即可。

2、必须严格控制不同水浴的保温温度与保温时间，否则结果会有较大的偏差3、本法又叫对羟基联苯法，试剂中的浓硫酸有强的氧化性和腐蚀性，使用时要小心。