丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定(无磷酸）.pdf

Ws /T352-2011 丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度测定 (无 磷酸吡哆醛)参考方法 1 范围 本标准规定 了在临床医学应用中,测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)的 参考方法 本标准主要适用于参考实验室,作为丙氨酸氨基转移酶催化活性浓度(无磷酸吡哆醛)测定的溯源,也 可作为与酶活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源,可供有关认可单位及质量管理部门应用 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注 日期的引用文件,仅所注 日期 的版本适用于本 文件 凡是不注 日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 ISo 15193:09 体外诊断器具 生物源样本中量的测定 参考测定程序的表述 3 术语和缩略语 3.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1.1 原始样本 p r i m a r y s a m p l e 最初从一个系统中取出的一个或几个部分的集合物,旨在提供该系统 的信息或作 为对该系统做 出 决定的基础 注:在某些情况下,所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统,此时取样系统是这些系统的组成部分。

3.1.2 实验室样本 Ia b o r a t o r y s a m p Ie 准备送到实验室或实验室接收的用于测定的原始样本或原始样本的分样本 3.1.3 分析样本 a n a 1y t i c a I s a m p l e 自实验室样本制备的、 可从中取出分析部分 的样本 注:在取出分析部分之前,分析样本可经过各种处理 3.1.4 丿 卜 祠 厅 音 阝 分 a n a l y t i c a l p o r t i o n 从分析样本 中取出的用于实际测定和观察的物质部分 注:如果不需预处理,分析部分直接从原始样本或实验室样本中取出某些情况下,需将分析部分溶解成分析溶液 再上机测定 3.1.5 乡 卜 南 厅 杵 鼻 讯 攴 a n a l y t i c a l s o Iu t i o n 将分析部分溶解在气体、 液体或固体中而制备的溶液,溶解过程中可以有反应发生或无反应发生 1 Ws /T352-2011 3.1.6 (某一物质 系统 的)基 质 m a t r i x (o f a m a t e r i a s y s t e m ) 一个 物质 系统 中除被分析物之外 的所有成分 。

3.1.7 参 考方 法 r e f e r e n c e p r o Ce d u r e 是在校准或表征标准物质 时为提供测定 结果所采用 的测定方法,它适 用 于评 定 由同类 量 的其他测 定 方法获得 的被测 定量值 的测 定正确 度 3.1.8 测定 系统 的灵敏度 s e n s i t i v i t y o f a m e a s u r i n g s y s t e m 简称:灵敏度 s e n s i t i v i t y 测定系统 的示值变化除 以相应 的被测定值 变化所得 的商 注 1:测 定系统的灵敏度可能与被测定的量值有关 注2:所考虑的被测定值的变化必须大于测定系统的分辨力 3.1. 乡 卜 南 厅 牛 宁 乒 苹 饣 土 a n a Iy t i c a s p e c i f i c i t y 测定方法 只测定可测定 的量 的能力 3.1.10 分析干扰 a n a y t i c a I i n t e r f e r e n c e 由一个影 响量 引起 的系统测定误差,该影 响量 自身在测定 系统 中不产 生信号,但它会 引起示值 的增 高或降低 。

3.1.11 影 响 工 i m n u e n c e q u a n t i t y 被测定 以外 的可影 响测定结果 的量 3.1.12 被测工 m e a s u m n d 拟测定 的量 注1:对被测定的说明要求了解量的种类,以及含有该量的现象、 物体或物质状态的描述,包括有关成分及所涉及的 化学实体 注2:在M第二版和IEC6005 300:2001中,被测定定义为受到测定的量 注3:测定包括测定系统和实施测定的条件,它可能会改变研究中的现象、 物体或物质,使被测定的量可能不同于定 义的被测定在这种情况下,适当的修正是必要的 3.1.13 检 出限 d e t e c t i o n m i t ,m i t o f d e t e c t i o n 由给定测定方法获得 的测 得值,其声称 的物 质成分 不存 在 的误 判概率 为 卩,声称物 质成分存 在 的误 判概 率为 注 1:国 际理论和应用化学联合会(IUPAC)推荐和卩的默认值为0.05 注2:有时使用缩写词LOD 注3:不要用术语“灵敏度”表示“检出限” 3.1.14 校准 品 c a 1i b r a t o r 用于校准 的测定标 准 。

3.2 缩略语 下列 缩 略语适用于本文件 2 Ws /T352-2011 ALT:丙氨酸氨基转移酶(a l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e ) LD:乳酸脱氢酶(l a c t a t e d e h y d r o g e n a s e ) NAD:氧化型 阡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(-n i c o t i n a m i d e a d e n i n e d i n u c l e o t i d e ,o x i d i z e d f o r m ) NADH:还原型 阡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( n i c o t “a m i d e a d e “n e -d i n u c l e o t i d e ,r e d u c e d f o r m ) P-5-P:5-磷酸卩比 哆醛(p y r i d o x a 5-p h o s p h o r i c a c i d ) IFCC:国际 临 床 化 学 与 检 验 医 学 联 合 会 (i n t e r n a t i o n a l f e d e r a t i o n o f d i n i c a l c h e m i s t r y a n d l a b o r a t o r y m e d i c i n e ) So P:标准操作方法(s t a n d a r d o p e r a t i o n p r o c e d u r e ) 4 参考方法描述 4.1 测定原理和方法 本法采用偶联反应,丙氨酸和酮戊二酸在ALT催化下,生成丙酮酸和L谷氨酸,丙酮酸在LD 催化下生成乳酸,同时NADH被氧化成NAD+,反应式如下: 丙氨酸+2-酮戊二酸型工丙酮酸+谷氨酸 丙酮酸+NADH+H 挣1酸+NAD+ 在339n m 下,监测NADH的氧化速率,摩尔消光系数的下降速率与ALT催化活性浓度呈正 比。

4.2 裣查列表 4.2.1 试剂列表 将所用试剂按表1列出 表1 试剂列表 分 类 系统名称 通用名称 、 缩略语 试 剂 三羟 甲基氨基 甲烷 Tr i s L(+)-丙氨酸丙氨酸 酮戊 二酸 ,二钠盐,二水合物 酮戊二酸 肛烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,还原型,二钠盐还原辅酶I,NADH 无乳酸脱氢酶,LD 叠氮钠 无 盐 酸 无 氢氧化钠无 氨化钠无 牛血清 白蛋 白,Fr a c o o n V 牛 白蛋 自 丙酮酸一钠盐 无 溶 剂 质量 与双蒸水类似的高纯度水(电导率(2u s c m -!, p H6 7硅酸盐0.1m g L】) 无 参考物质JCTLM和 (或)国家批准的参考物质无 质控物质常规系统校准 品 无 指示剂无无 Ws /T352-2011 4.2,2 分光光度计和辅助仪器列表 参考实验室应在表2登记主要测定仪器(分光光度计)和主要辅助仪器(点式温度计 、 天平 、p H计、 恒温水浴箱 、 稀释配液仪 、 移液器等) 表2 分光光度计和辅助仪器 4.3 试剂 4.3.1 试剂原料信息 按表3详细填写试剂原料详细信息 表3 试剂原料详细信息 试剂系统名 通用名 ALT测定所用每个试剂原料详细信息见附录B。

如怀疑一种化学药品含有不纯的物质影响了分 析物的催化活性,应进行进一步的研究,例如,比较不同厂家和不同批号的产品宜使用在对 比试验中 已经鉴定或认可的试剂以下三种试剂需要注意安全: 盐酸健康危害:接触其蒸气或烟雾,可引起急性中毒,出现眼结膜炎,鼻及 口腔黏膜有烧灼感,鼻衄、 齿龈出血,气管炎等误服可引起消化道灼伤、 溃疡形成,有可能引起胃穿孔 、 腹膜炎等眼和皮肤接触 可致灼伤慢性影响:长期接触,引起慢性鼻炎、 慢性支气管炎、 牙齿酸蚀症及皮肤损害操作人员必须 经过专门培训,严格遵守操作规程 操作人员宜佩戴 自吸过滤式防毒面具(全面罩),穿橡胶耐酸碱服, 戴橡胶耐酸碱手套远离易燃 、 可燃物 4 仪器名称生产厂家型 号 分光光度计 点式温度计 天 平 p H计 恒温水浴箱 稀释配液仪 移液器 信 息 指 标 内容 CAS,CARN注册号 生产厂家 货号/批号 分子式 相对分子质量 纯 度 特定合格要求(如有) 危险度 贮存要求 失效期 、 Vs /T 352- 2011 氢氧化钠有强烈刺激和腐蚀性 粉尘或烟雾会刺激 眼和呼吸道,腐蚀鼻 中隔;皮肤和眼与Na OH 直接接触会引起灼伤;误服可造成消化道灼伤,黏膜糜烂 、 出血和休克。

本品不会燃烧,遇水和水蒸气大 量放热,形成腐蚀性溶液 与酸发生中和反应并放热 具有强腐蚀性 燃烧(分解)产物:可能产生有害 的毒性烟雾 呼吸系统防护:必要时佩带 防毒口罩 眼睛防护:戴化学安全 防护眼镜 防护服:穿 工作 服(防腐材料制作)手防护:戴橡皮手套 叠氮钠:本品和氰化物相似,对细胞色素氧化酶和其他酶有抑制作用,并能使体 内氧合血红蛋 白形 成受阻,有显著的降压作用 对眼和皮肤有刺激性 如吸入 、 口服或经皮肤吸收,可引起 中毒死亡 高 血压病人口服本品有显著降压作用 本品在有机合成中可有叠氮酸气体逸出,吸人 中毒后出现眩晕 、 虚 弱无力 、 视觉模糊 、 呼吸困难 、 昏厥感 、 血压降低 、 心动过缓等 呼吸系统 防护:可能接触其粉尘时,应佩 戴头罩型电动送风过滤式防尘呼吸器 紧急事态抢救或撤离时,宜佩戴 自给式呼吸器 眼睛防护:呼吸 系统防护中已作防护 身体防护:穿连衣式胶布防毒衣 手防护:戴橡胶手套 其他:工作现场禁止吸 烟 、 进食和饮水 工作毕,淋浴更衣 单独存放被毒物污染 的衣服,洗后备用 保持 良好 的卫生习惯 皮肤接触:脱去被污染的衣着,用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤 。

眼睛接触:提起眼睑,用流动清水或生理 盐水冲洗,就医吸人:迅速脱离现场至空气新鲜处 保持呼吸道通畅如呼吸困难,给输氧 如呼吸 停止,立即进行人工呼吸若误食:饮足量温水,催吐,就医 4.3,2 试剂溶液 4,3,2.1 一般要求 制备溶液时各成分给出的质量是指100%含量 如果化学物质的含量低于100%E例如y (%),则 应用因子:Rn n t =100/丿,计算 出与给出质量相当的某化学物质的质量 溶液的制 备 应 使 用 质 量 与 双 蒸 水 类 似 的高 纯 度 水 (电 导 率(2u S c m l ,p H6 7,硅酸 盐 (0.1m g Ll ) 每次称重的扩展(屁=2)不确定度(包括物质纯度的不确定度正态分布),应1.5%2 溶液1 称量1.47g To s 、5.61g 丙氨酸(游离酸)及0.052g 叠氮钠,将上述物质按 以下步骤处理 : 溶在约80m L水 中; 用 1m o l Ll 盐酸调节p H值(37)至7,15; 转移至100m L容 量瓶中; 将容量瓶和水平衡至 20 ; 加水(20 )至容量瓶的刻度。