维生素类药物的分析--讲课文档.ppt

维生素类药物的分析-第一页，共六十六页胆甾醇7-脱氢胆甾醇维生素 D3维生素 D2麦角甾醇第二页，共六十六页结构及性质结构及性质n维生素维生素D2、维生素维生素D3 （ChP收录）收录） 结构特点与分析方法的关系结构特点与分析方法的关系 1开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别2手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别3多烯：可进行紫外检测多烯：可进行紫外检测, 不稳定不稳定. 第三页，共六十六页结构及性质结构及性质n性质：性质：n1.性状性状: 无色针晶或白色结晶状粉末无色针晶或白色结晶状粉末n2.溶解性溶解性: 脂溶性脂溶性n3.不稳定性不稳定性: 易氧化易氧化, 对酸也不稳定对酸也不稳定.n4.旋光性旋光性: 具手性碳具手性碳n5.可发生甾类化合物的显色反应可发生甾类化合物的显色反应n6.紫外吸收紫外吸收:265nm nE1%1cm（VitD2：460-490 ,VitD3：465-495）第四页，共六十六页鉴别试验鉴别试验n （一）显色反应：（一）显色反应：n1.醋酐醋酐-浓硫酸反应：浓硫酸反应：nD2: 黄黄 红红 紫紫 绿。

绿nD3: 黄黄 红红 紫紫 、蓝绿、蓝绿 绿绿n2.三氯化锑反应三氯化锑反应 :橙红色，渐变粉红橙红色，渐变粉红 n3.三氯化铁反应三氯化铁反应 :橙黄色橙黄色第五页，共六十六页鉴别试验鉴别试验n（二）维生素（二）维生素D的比旋度的比旋度n药物药物 溶剂溶剂 浓度浓度 比旋度值比旋度值 n维生素维生素D2 无水乙醇无水乙醇 40mg/ml +102.5+107.5n维生素维生素D3 无水乙醇无水乙醇 5mg/ml +105+112n注意事项注意事项n应应于于容容器器开开启启3030分分钟钟内内取取样样， 在在溶溶液液配配制制后后3030分分钟钟内内测测定定，否否则则会会有有变变旋旋光现象 第六页，共六十六页鉴别试验鉴别试验n（三）其他鉴别方法（三）其他鉴别方法nTLC、HPLC、制备衍生物测熔点、制备衍生物测熔点nUV、IRn （四）（四） VitD2、 VitD3区别反应：区别反应：nKober反应：反应：85%浓硫酸浓硫酸乙醇显色乙醇显色n甾类化合物的显色反应甾类化合物的显色反应nVitD2：红色，红色， max=570nmnVitD3：黄色，黄色， max=495nm第七页，共六十六页。

杂质检查杂质检查n（一）麦角甾醇（一）麦角甾醇nChP规定规定VitD2中必须检查项目中必须检查项目n试剂：洋地黄皂苷溶液试剂：洋地黄皂苷溶液n混合放置混合放置18小时，不得发生浑浊或沉淀小时，不得发生浑浊或沉淀n（二）前（二）前VitD（5，7二烯甾醇）的光照产物二烯甾醇）的光照产物n（三）有关物质：（三）有关物质：NP-HPLC第八页，共六十六页含量测定含量测定n方法种类：方法种类：n化学法化学法n光谱法光谱法n色谱法色谱法n微生物法微生物法n生化法生化法竞争蛋白结合法（特异性最高）竞争蛋白结合法（特异性最高）n中国药典中国药典正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法第九页，共六十六页维生素维生素D的含量测定的高效液相的含量测定的高效液相色谱法（色谱法（ChP方法简介）方法简介）n方法提要：方法提要：nNP-HPLC(VitD2、 VitD3均以本法测定均以本法测定)n硅胶柱硅胶柱n流动相：正己烷流动相：正己烷正戊醇（正戊醇（997:3）n检测波长检测波长:254nmn定量方法：内标法，定量方法：内标法，(测定维生素测定维生素D的总的总量量.)n内标物：邻苯二甲酸二甲酯内标物：邻苯二甲酸二甲酯 第十页，共六十六页。

n该法分为三个方法该法分为三个方法 : :n第第一一法法：用用于于无无维维生生素素A A醇醇及及其其它它杂杂质质的的干干扰扰的的情情况况，直接进样测定：直接进样测定：n1 1系统适用性试验：测定重复性和分离度系统适用性试验：测定重复性和分离度 维生素维生素D D3 3 、前维生素、前维生素D D3 3 、反式维生素、反式维生素D D3 3 、速甾、速甾醇醇D D3 3 （R1.0)R1.0) 2 2测定测定前维生素前维生素D折算维生素折算维生素D的的校正因子：校正因子：f 2=（ASmr-f1mSAr1）/（Ar1mS）3 3含量测定：用含量测定：用维生素维生素D及前维生素及前维生素D折算维生素折算维生素D的总量的总量.mi=（f1 Ai1+ f 2 Ai2）mS /AS 第十一页，共六十六页n第第二二法法：用用于于有有杂杂质质的的干干扰扰的的情情况况，需需要预处理：要预处理：n1皂皂化化处处理理：皂皂化化、乙乙醚醚提提取取、洗洗涤涤提提取液、蒸除乙醚、制备供试液取液、蒸除乙醚、制备供试液An2净净化化：供供试试液液A经经液液相相色色谱谱分分离离，准准确确收收集集含含有有维维生生素素D及及前前维维生生素素D混混合合物物的全部流出液，制备成供试液的全部流出液，制备成供试液B。

n3含量测定：取供试液含量测定：取供试液B按第一法测定按第一法测定 第十二页，共六十六页n第第三三法法：用用于于经经第第二二法法处处理理后后仍仍有有杂杂质质的干扰的情况，预处理后还要处理：的干扰的情况，预处理后还要处理：n1预预处处理理后后在在经经提提取取分分离离制制备备供供试试液液C供试液C用于用于进样测定：进样测定：n2含量测定：在第一法的色谱条件下，含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样对照液和供试液交替精密进样对照液和供试液C，按外，按外标法定量标法定量 第十三页，共六十六页维生素维生素E的分析的分析主要生理功能：主要生理功能： 1. 抗氧化作用：清抗氧化作用：清除自由基保护膜除自由基保护膜结构 2. 促进血红素的合成：促进血红素的合成：能提高血红素合成能提高血红素合成过程中的关键酶过程中的关键酶ALA合成酶和合成酶和ALA脱水酶的活性脱水酶的活性OCH3COOR2R1R3生物效价生物效价右旋体右旋体 ： 消旋体消旋体 = 1.4 :10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）第十四页，共六十六页一、结构及性质一、结构及性质 结构特点结构特点:1芳环芳环：具弱紫外吸收，可用于鉴别。

具弱紫外吸收，可用于鉴别2乙酰化的酚羟基乙酰化的酚羟基：水解后生成生育酚，可发生三氯化铁反应：水解后生成生育酚，可发生三氯化铁反应和氧化还原反应，用于鉴别和氧化还原反应，用于鉴别3.分子中无亲水基，不溶于水分子中无亲水基，不溶于水4.酯键易水解酯键易水解 维生素维生素E E为苯丙二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化为苯丙二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，又称生育酚的酚羟基，又称生育酚异构体活性最强异构体活性最强第十五页，共六十六页一、结构及性质理化性质理化性质:1. 溶解性溶解性 微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶于乙醇、微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水2. 水解性：在酸性或碱性溶液中，加热可水解生成水解性：在酸性或碱性溶液中，加热可水解生成游离生育酚游离生育酚3. 易氧化性：维生素易氧化性：维生素E水解后的产物，在有氧或其他水解后的产物，在有氧或其他氧化剂存在时，则进氧化剂存在时，则进被氧化生成醌，碱性条件下被氧化生成醌，碱性条件下加热则更易反应，应避光、避氧保存加热则更易反应，应避光、避氧保存第十六页，共六十六页。

n4.弱紫外吸收弱紫外吸收:本品的无水乙醇溶液在本品的无水乙醇溶液在284nm波长处测定吸收度时，其吸收波长处测定吸收度时，其吸收系数系数E1%1cm为为41.045.00.1mgmL溶液测定溶液测定)（此性质可用于鉴别，但不能用于含量（此性质可用于鉴别，但不能用于含量测定！）测定！）第十七页，共六十六页二、鉴别试验n 1.硝酸反应硝酸反应 ChP，JPn原理原理:维生素维生素E在硝酸酸性溶液中，加热可水解在硝酸酸性溶液中，加热可水解生成生育酚，生育酚继续被氧化成为邻醌结构的生育生成生育酚，生育酚继续被氧化成为邻醌结构的生育红橙红色橙红色）强氧化剂强氧化剂生育酚生育酚HNO3（橙红色）（橙红色）生育红生育红第十八页，共六十六页n方法方法：取本品约：取本品约30mg，加无水乙醇加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在摇匀，在75加热约加热约15min，溶液应显鲜红色溶液应显鲜红色，逐步转为橙红色逐步转为橙红色n特点特点：n简便、快速、呈色明显简便、快速、呈色明显第十九页，共六十六页n 2. 三氯化铁反应三氯化铁反应:n原理原理: 维生素维生素E在碱性溶液中加热水解在碱性溶液中加热水解生成游离生育酚生成游离生育酚，并被三氯化铁氧化为对并被三氯化铁氧化为对生育醌生育醌，同时生成亚铁离子。

后者与联吡同时生成亚铁离子后者与联吡啶生成血红色的配离子啶生成血红色的配离子生育酚生育酚O对对-生育醌生育醌第二十页，共六十六页弱氧化剂弱氧化剂血红色血红色第二十一页，共六十六页n方法方法： 取本品约取本品约10ml，加醇制氢氧，加醇制氢氧化钾试液化钾试液2ml，煮沸煮沸5min，放冷，加水放冷，加水4ml与乙醚与乙醚10ml，振摇、静置使分层，振摇、静置使分层，取乙醚液取乙醚液2m1，加加2，2联吡啶的乙醇联吡啶的乙醇溶液溶液 (0.5100)数滴和三氯化铁的乙醇数滴和三氯化铁的乙醇溶液溶液(0.2 100)数滴，应显血红色数滴，应显血红色第二十二页，共六十六页n讨论讨论:n1.)测定前必须水解维生素测定前必须水解维生素E,操作繁琐操作繁琐n2.)专属性不高专属性不高n3. 紫外光谱法紫外光谱法 n本品的本品的0.01(W/V)无水乙醇溶液无水乙醇溶液max = 284nmmin = 254nm = 41.045.5可用于鉴别可用于鉴别第二十三页，共六十六页n4.薄层色谱法薄层色谱法硅胶硅胶G板板溶剂：氯仿溶剂：氯仿展开剂：环己烷展开剂：环己烷乙醚（乙醚（4:1）浓硫酸显色，根据浓硫酸显色，根据R f 值定性值定性 5.气相色谱法气相色谱法:USP(24) ChP(2000)以保留时间定性以保留时间定性6.红外光谱法红外光谱法: JP(14) BP(2000)VitE Rf = 0.7第二十四页，共六十六页。

三、杂质检查三、杂质检查n1.酸度检查酸度检查n目的目的: 检查维生素检查维生素E制备过程中引入的游离醋酸制备过程中引入的游离醋酸.n方法方法: ChP酸度检查法酸度检查法.(教材教材P275)n 2.特殊杂质特殊杂质游离生育酚的检查游离生育酚的检查nChP(2000)ChP(2000)方法方法: : 硫酸铈滴定法硫酸铈滴定法. .n原理原理: 游离生育酚有还原性游离生育酚有还原性, 可被硫酸铈定量可被硫酸铈定量氧化氧化. 可以用硫酸铈滴定法来控制游离生育酚的可以用硫酸铈滴定法来控制游离生育酚的限量限量.第二十五页，共六十六页检查方法检查方法 取本品取本品0.10g0.10g，加无水乙醇加无水乙醇5 5mlml溶解后，加二溶解后，加二苯胺试液苯胺试液1 1滴，用硫酸铈滴定液滴，用硫酸铈滴定液(0.01(0.01molmol/ /L)L)滴定，滴定，消耗硫酸铈滴定液不得超过消耗硫酸铈滴定液不得超过1.01.0m1m1若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，则应重新则应重新计算硫酸铈的消耗量！计算硫酸铈的消耗量！第二十六页，共六十六页第二十七页，共六十六页n讨论讨论n1.1. 酸性环境中进行酸性环境中进行, ,否则硫酸铈滴定液会生成碱式盐而否则硫酸铈滴定液会生成碱式盐而影响测定。

影响测定n2.2.二苯胺的作用是作为指示剂二苯胺的作用是作为指示剂, , 终点时溶液由亮黄色转变终点时溶液由亮黄色转变为灰紫色为灰紫色. .n3. 13. 1molmol的硫酸铈相当于的硫酸铈相。