实验八姐妹染色单体交换试验.ppt

实验八 姐妹染色单体交换试验 一、实验原理实验原理在分裂的细胞中，每条染色体由两条姐妹染色单体组成，每条染色单体则由一个双链DNA分子构成当细胞在加有5溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）的培养基中进行培养时，BrdU取代胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（TdR）掺入到新复制的DNA核苷酸链中细胞在BrdU中生长，第一个周期（DNA经过一次复制）后，每条染色体的两条姐妹染色单体的DNA双链中各有一股链含有BrdU经过第二周期（经过两次复制）后，两条姐妹染色单体中，一条单体的DNA双链类似第一周期，为单股链含BrdU，另一条单体两股链均含BrdU两股都含有BrdU的染色单体螺旋化程度较低，与某些染色剂的亲和力低，用Giemsa染色时着色较浅，而仅有单股含BrdU的单体着色仍较深，两条姐妹染色单体显出深浅不同的颜色，当姐妹染色单体间发生同源片段交换时，就可以根据每条染色单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分 在正常情况下，第二周期细胞的每条染色体的两条单体一条被深染，另一在正常情况下，第二周期细胞的每条染色体的两条单体一条被深染，另一条为浅染，当发生姐妹染色单体互换时，可在同一条染色单体上看到深浅不条为浅染，当发生姐妹染色单体互换时，可在同一条染色单体上看到深浅不同的颜色。

如果环境中有对染色体或同的颜色如果环境中有对染色体或DNA损伤的物质时，姐妹染色单体可发损伤的物质时，姐妹染色单体可发生部分部分片段互换，有毒物质毒性越高，对生部分部分片段互换，有毒物质毒性越高，对DNA或染色体损伤越严重，则或染色体损伤越严重，则互换的频率越高通过与正常对照组的对比，就可对被测物质的毒性作出安互换的频率越高通过与正常对照组的对比，就可对被测物质的毒性作出安全性评价全性评价 chromatidBrduFirst duplicationSecond duplicationThird duplicationBrduBrduchromasomechromasomechromasome三、实验用品三、实验用品 1、器材：水浴锅、紫外灯、温度计、擦镜纸、培养、器材：水浴锅、紫外灯、温度计、擦镜纸、培养箱、离心机、离心管、培养瓶、显微镜、滴管箱、离心机、离心管、培养瓶、显微镜、滴管 2、试剂：、试剂：RPMI1640培养基、培养基、2×SSC缓冲液、缓冲液、Giemsa染液、染液、BrdU溶液溶液(500μg/ml)、甲醇、冰醋酸、、甲醇、冰醋酸、0.075M KCl、秋水仙素溶液（、秋水仙素溶液（12.5μg/ml）、）、PH6.8 PBS、、 3、材料：人外周血、材料：人外周血四、实验步骤¡（一）外周血培养及染色体标本片制备（一）外周血培养及染色体标本片制备¡按常规方法采血、接种，置按常规方法采血、接种，置37℃℃恒温培养恒温培养24h后，各加入后，各加入BrdU（终浓度为（终浓度为10ug／／ml），），继续避光培养继续避光培养48小时后，按外周血培养及染小时后，按外周血培养及染色体标本片制备常规方法收获、制片。

制好色体标本片制备常规方法收获、制片制好片后，自然老化片后，自然老化1～～7天作业¡完成此次实验报告(包含实验原理、实验药品、实验步骤）。