XXX测试方法验证报告.doc

1测试测试方法方法验证报验证报告告2目录1、附录一...........................................................................................................................................22、附件二.........................................................................................................................................12 3、附件三.........................................................................................................................................32 4、附件四.........................................................................................................................................5031、附录一XXX 测试方法验证报告准备人： 时间：复核人： 时间：批准人： 时间：4目录1、背景介绍2、验证结果与结论3、被验证的含量测试方法3.1 色谱条件3.2 标准品、样品及系统适应性溶液准备3.3 系统适应性测试与标准3.4 样品测试过程3.5 计算3.6 附录4、验证方案4.1 需验证的色谱条件4.2 验证所使用的仪器和溶剂4.3 系统适应性与标准4.4 方法专属性测定规程与预期标准4.5 系统精密度测定规程与预期标准4.6 最小检测限测定规程与预期标准4.7 方法定量先测定规程与预期标准4.8 预期的验证范围4.9 验证范围内的方法精密度测定规程与预期标准54.10 验证范围内的线性测定规程与预期标准4.11 验证范围的方法准确度测定规程与预期标准4.12 方法中间精密度测定规程与预期标准4.13 方法耐用性测定规程与预期标准5、验证的过程及数据5.1 验证所使用的仪器5.2 验证所使用的溶剂5.3 系统适应性测试过程及结果5.4 方法专属性测试过程及结果5.5 系统精密度测试过程及结果5.6 最小检测限测试过程及结果5.7 方法定量限测试过程及结果5.8 方法精密度测试过程及结果5.9 线性测试过程及结果5.10 方法准确度测试过程及结果5.11 方法中间精密度与预期标准5.12 方法耐用性与预期标准6、附图61、背景介绍（介绍验证的目的，含量方法的来源，计划的验证内容以及其他相关情况）2、验证的结果与结论经过对 XXX 的含量及杂质方法的验证，可知：项目预期指标结果结论分离度拖尾因子柱效系统适应性RSD%专属性系统精密度LODLOQ方法精密度线性准确度中间精密度方法耐用性7结论在验证的范围##mg/ml-##mg/ml（相当于##%-##%）内，该方法是使用的，可靠的。

可以用于 XXX 的XX 项目测试3、被验证的 XXX 测试方法（以用 HPLC 测定药物的含量（外标法）及杂质（面积归一化法）为例，介绍如何详细描述一个色谱方法）3.1 色谱条件色谱柱：Zorbax C184.6×150mm 5u 或相当色谱柱（需耐用性验证）柱温:25℃柱流速：1.0ml/min进样量：20μl检测波长：254nm样品稀释剂：流动相流动相： 水：甲醇=50:50*流动相可以在室温中保存一个月（需耐用性验证）3.2 标准品与样品准备3.2.1 标准品溶液精密称取 80mgXXX 的内控参考标准于 100ml 棕色容量瓶中，加入 50ml 稀释液，超声溶解放冷后用稀释液稀释到刻度混合均匀样品浓度为 0.8mg/ml标准品溶液在常温下可以放置 12 小时 （需溶液稳定性验证）83.2.2 样品溶液精密称取 80mgXXX 的样品标准于 100ml 棕色容量瓶中，加入 50ml 稀释剂，超声溶解放冷后用稀释剂稀释到刻度混合均匀样品的浓度为 0.8mg/ml样品溶液在常温下可以放置 12 小时3.2.3 系统适应性溶液精密称取 80mgXXX 的内控参考标注几 50mgXX 参考标准于 100ml 容色容量瓶中，加入 50ml 稀释剂，超声溶解。

放冷后用稀释剂定容混合均匀移取 5ml 该溶液于 50ml 中，用稀释剂稀释到刻度，混合均匀系统适应性溶液在 2-8℃下可以保存 10 天 （需溶液稳定性验证）3.3 系统适应性测试与标准*（流动相可以适当调整使其系统适应性符合要求 （需耐用性验证））*测试系统适应性溶液，在 XXX 相对保留时间为 1.0 时，XX 的相对保留时间为 0.6.两者之间的分离度大于 3.0.*标准溶液连续进样至少 5 针，XXX 主峰面积的其 RSD%不超过 2.0%XXX 主峰的拖尾因子应不超过 2.0以 XXX 主峰计算，其理论塔板数不小于 2000测试第二标准品溶液至少 3 针，其含量应在 99.0%-101%之间93.4 样品测试过程当色谱系统稳定后，使用如上色谱条件，按如下程序对样品的含量进行测试第一标准品测试 5 次，第二标准品测试 3次，第一个批号样品第一次称样测试 2 次，第一个批号样品第二次称样测试 2 次，第二个批号第一次称样测试 2 次第二个批号第二次称样测试 2 次，……第一个标准品测试 3 次，第 n 个批号样品第一次称样测试 2 次，第 n 个批号样品第二次称样测试 2 次，……第一标准品测试 3 次。

3.5 计算3.5.1 含量计算含量计算为外标法，计算公式如下计算每个样品 4 次测量的平均值为其含量结果含量%= AR × CS ×100%AS CRAR：样品溶液中 XXX 的峰面积AS：标准品溶液中 XXX 的峰面积CR：样品溶液中 XXX 的浓度CS：标准品溶液中 XXX 的浓度3.5.2 杂质计算杂质计算为面积归一化法，计算公式如下计算每个样品 4次测量的平均值为其杂质结果10单一杂质%= 单一杂质峰面积 ×100全部峰面积全部杂质=∑所有单独杂质%3.6 附录测试时的积分条件为：斜率：0.5峰宽：1.0最小峰面积：500最小峰高：10阈值：04、方法验证方案5、方法验证测试过程及数据112、附件二含量测试方法验证方案1、需验证的测试方法色谱柱柱温柱流速进样量检测波长样品稀释剂流动相标准品、样品、系统适应性溶液的配制过程2、验证所使用的仪器条件名称型号序列号供应商进样器泵柱温箱（如有）检测器高效液相色谱色谱工作站12色谱柱3、验证使用的试剂与标准品名称规格批号供应商4、系统适应性测试与标准 目的：确认用该仪器系统运行含量测试方法的验证是否符合要求。

 操作要求按照系统适应性测试方法的要求配制被测物的标准溶液进样，计算峰面积的 RSD%，拖尾因子及柱效配制系统适应性测试溶液进样，计算相应组分的分离度 标准：（方法规定的系统适应性标准）RSD%拖尾因子柱效分离度 报告要求：记录被测物峰面积计算 RSD%并报告结果 （如下表）13计算分离度，拖尾因子与柱效如工作站可以直接打印相应的报告，则应附含有该报告的图谱如需手工计算并报告图例，测量的数据，计算公式及相应的计算结果表一、系统适应性测试结果进样次样保留时间峰面积12345RSD%≤2.0%--5、方法专属性测定规程与预期标准 目的：确定该方法可以完全分离所有的已知杂质与潜在杂质，且被测物主峰中不含主要干扰杂质 操作要求：a）单独进样样品稀释剂溶液，证明该溶液对样品测试无干扰b）配制被测物溶液进样，确定保留时间并进行纯度检测证明该是否条件可以真正分离并测试被测物c）单独配制可以获得的原料，中间体，副反应产物，及已知杂质标准品单独进样确认保留时间14d）配制含被测物，原料，中间体，副反应产物标注品的混合溶液进样并计算分离度以确认所有已知杂质对被测物的测试无干扰e）运行酸、碱、热，光及氧化降解反应，测试反应液。

确认所有降解物质对被测物测试无干扰并对每个样品中的被测物主峰进行纯度测定，确认被测物主峰中无潜在的降解物质干扰 （该项目在验证中可以不必运行，仅需使用降解实验的数据，在验证报告中报告降解实验结果并附相应的降解实验图谱） 预期标准：a）稀释剂空白对样品测试无干扰b）所有原料，中间体与副反应产物不干扰被测物测定，其相临组分分离度均大于 1.5c）所有降解产物不干扰被测物的测定其与被测物分离度均大于 1.5d)降解前后被测物主峰纯度符合要求 （需自定） 报告要求：记录相应的保留时间，计算并报告分离度结果 （如下表）表 2、方法专属性-原料，中间体与副反应结果名称保留时间分离度≥1.515表 3、方法专属性-降解结果降解主要降解杂质保留时间被测物保留时间与主峰最近的主要降解杂质与主峰分离度≥1.5主峰纯度正常酸碱氧化加热光照6、系统精密度测定规程与预期标准 目的：测定在稳定的液相色谱条件下，被测物溶液多次测量结果之间的接近程度即色谱系统的稳定程度 操作要求：（可同系统适应性一同完成或与方法精密度一同验证）按照测试方法配制被测物标准溶液，连续进样 6 次计算被测物主峰保留时间及峰面积的 RSD%。

 预期标准16被测物主峰保留时间及峰面积的相对标准偏差（RSD%）不超过##% 报告要求：记录被测物峰面积及保留时间，计算 RSD%并报告结果 （如下表）表 4 系统精密度测试结果进样次数保留时间（min）峰面积123456RSD%7、预期的验证范围根据含量测试的具体要求及情况，确定其预期的验证范围应为：##mg/ml-##mg/ml（及相当于 80%-120%）8、验证范围内的方法精密度测定规程与预期标准（有两种验证方法可以任选一运行） 目的确定该色谱方法在 100%测试点以及预期范围（80%与 120%）内测定结果的重现程度17验证方法一 操作要求：（可同方法准确度，线性验证同时运行）a）配制被测物标准品溶液，进样确认 RSD%结果 （如和系统适应性同天测试可以使用系统适应性结果 ）b）用被测物标准品定量称样并配制成相对含量为 80%，100%与120%三种测试溶液每个溶液配制 3 份 （每个浓度点，每份溶液均应单独称取配制 ）c）每个样品最少测定 2 次计算每个样品峰面积的平均值如连续进样 3 针，可以计算 RSD%，并验证系统精密度 ）d）计算每个浓度点的 3 份溶液的含量及相应的 RSD%。

e）计算每个浓度点的平均含量及 3 个点间的 RSD% 预期标准：每个浓度点含量结果的 RSD%及 3 个浓度点间含量结果的RSD%均不大于##% 报告要求：a）记录标准溶液中被测物峰面积，计算平均值与 RSD%b）计算在每个溶液的含量及每个浓度点的平均含量，计算相应的 RSD%表 5、方法精密度测试结果相对浓度80%100%120%称样峰测试 118测试 2测试 3平均值面积RSD%含量RSD%平均含量RSD%验证方法二 操作要求：a）配制被测物标准品浓度，进样确认 RSD%结果 （如和系统适应性同天测试可以使用系统适应性结果 ）b）用被测物标准品定量称样并配制成相对含量为 100%的测试溶液，共 6 份每份溶液均应单独称样配制c）每个样品最少测定 2 次计算每个样品峰面积的平均值d）计算 6 份溶液的含量及相应的 RSD% 预期标准：6 份溶液含量及相应的 RSD%均不大于##% 报告要求：a）记录标准溶液中被测物峰面积，计算平均值与 RSD%b）计算在每份溶液中含量及相应的 RSD%。