SARS-CoV-2抗体动态监测在COVID-19诊断中的价值.docx

SARS-CoV-2抗体动态监测在COVID-19诊断中的价值由严重急性呼吸综合征冠状病毒2感染导致的新型冠状病毒肺炎目前已在全世界范围内流行[1,2,3]SARS-CoV-2核酸阳性是COVID-19诊断的必要指标[4]，但核酸检测会出现漏检现象[5]，因此临床急需一种能弥补核酸检测不足的指标，从而提高诊断准确性免疫系统是人体对抗病原体的重要防线在病原体感染人体后，免疫系统通过一系列的信号传导激活抗病原体反应，产生2种特异性抗体——免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig)M抗体和IgG抗体其中IgM抗体一般在感染初期产生，可以表征初始感染，IgG抗体为病原体刺激效应细胞二次应答后产生的抗体，可以表征感染进入恢复期或反复感染因此，在COVID-19的诊断过程中加入血清SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测及动态监测有助于疾病的诊断和疗效评估[6]本研究拟评估血清SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测在COVID-19诊断中的价值1、材料和方法1.1研究对象选取2020年1月20日—2月28日东莞市第九人民医院确诊为COVID-19的患者80例（COVID-19组），其中男44例、女36例，年龄7～79岁，诊断标准参照《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》[4],SARS-CoV-2核酸检测为阳性。

以同期东莞市第九人民医院排除COVID-19的患者20例作为对照组，其中男12例、女8例，年龄1～67岁本研究符合赫尔辛基宣言的伦理学准则，经东莞市第九人民医院伦理审查委员会审核同意，并批准豁免患者知情同意1.2试剂与仪器SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测试剂盒（胶体金法，货号分别为2002090220、2002080220）均购自珠海丽珠试剂有限公司SARS-CoV-2核酸检测试剂盒（货号20200130C）购自上海伯杰医疗科技有限公司，检测仪器为ABI7500荧光定量PCR仪（美国ABI公司）1.3方法1.3.1样本采集采集所有对象空腹静脉血2mL，其中1mL置于含分离胶的真空采血管中，500×g离心5min，分离血清，保存于4℃；另1mL置于真空抗凝采血管中，保存于4℃，用于全血、血浆同源分析的血浆样本由全血样本分离得到1.3.2血清SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测将血清样本取出平衡至室温，采用胶体金法检测IgM或IgG抗体，严格按试剂盒说明书操作，根据说明书中的判读方法，在15min内进行结果判读1.3.3SARS-CoV-2核酸检测按《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》[4]中的规定，采集所有研究对象的咽拭子样本，采用荧光定量聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）检测SARS-CoV-2核酸。

严格按试剂和仪器说明书操作1.4统计学方法采用SPSS22.0软件进行统计分析计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验以P<0.05为差异有统计学意义2、结果2.1SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测的敏感性、特异性和总符合率分析对照组IgM抗体、IgG抗体或IgM+IgG抗体联用（IgM抗体或IgG抗体有1项阳性即为阳性）的特异性均为100%(20/20）COVID-19组中，IgM抗体的敏感性为76.3%(61/80），总体符合率为81%(81/100);IgG抗体的敏感性为81.3%(65/80），总体符合率为85%(85/100),IgM+IgG抗体联用的敏感性为90%(72/80），总体符合率为92%(92/100）SARS-CoV-2IgM抗体、IgG抗体和IgM+IgG抗体联用诊断COVID-19与临床诊断比较，差异均有统计学意义（χ2值分别为39.103、46.429、64.286,P<0.001）见表1～表3表1SARS-CoV-2IgM抗体检测与临床诊断结果比较表2SARS-CoV-2IgG抗体检测与临床诊断结果比较表3SARS-CoV-2IgM+IgG抗体联用与临床诊断结果比较2.2同源全血样本和血浆样本SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测结果的一致性同时检测30组全血样本和血浆样本，IgM抗体的阳性符合率为100.0%(25/25），阴性符合率为100.0%(5/5），总符合率为100.0%(30/30);IgG抗体的阳性符合率为100.0%(24/24），阴性符合率为83.3%(5/6），总符合率为96.7%(29/30）。

见表4、表5表4同源全血样本和血浆样本SARS-CoV-2IgM抗体检测结果的一致性表5同源全血样本和血浆样本SARS-CoV-2IgG抗体检测结果的一致性2.3COVID-19患者发病后不同时间血清SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体的敏感性分析将COVID-19患者出现发热、咳嗽等症状的时间记为发病第1天，将取样时间与发病时间的间隔作为病程，统计血清SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体的敏感性发病7d内共采集血清样本20份，有13份（65.0%）样本IgM抗体阳性，有14份（70.0%）样本IgG抗体阳性，有14份（70.0%）样本IgM+IgG抗体联用阳性发病8～14d共采集血清样本22份，其中16份（72.7%）样本IgM抗体阳性，有21份（95.5%）样本IgG抗体阳性，有21份（95.5%）样本IgM+IgG抗体联用阳性；发病15d后共采集血清样本38份，其中32份（84.2%）样本IgM抗体阳性，有37份（97.4%）样本IgG抗体阳性，有37份（97.4%）样本IgM+IgG抗体联用阳性2.4SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体动态监测分析收集23例COVID-19患者不同时间点采集的样本，检测血清SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体。

将取样时间与发病时间的间隔天数为≤5d定义为发病初期，间隔天数为6～17d定义为发病中期，间隔天数≥18d定义为发病后期结果显示，IgM抗体在发病初期的阳性率为56%(10/18），发病中期的阳性率为100%(23/23），发病后期的阳性率为63%(12/19），在间隔时间为5～7d时IgM抗体出现转阳趋势，在发病18d后可呈转阴趋势IgG抗体在发病初期的阳性率为22%(4/18），发病中期的阳性率为100%(23/23），发病后期的阳性率为100%(19/19），在间隔时间为5～13d时出现转阳趋势，所有患者均无转阴的情况发生表6SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体动态监测分析3、讨论根据我国国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》的规定，COVID-19诊断主要依赖于临床相关检查和SARS-CoV-2核酸检测结果[4]但近期出现了许多无症状感染者和连续核酸检测阴性感染者[5]，对于这些SARS-CoV-2感染者，常规方法会造成误诊和漏检，不利于疾病的防控和治疗因此临床亟需一种简便、准确的检测方法来弥补核酸检测的不足当SARS-CoV-2感染人体时，人体的免疫系统会被激活，通过抗原递呈细胞对病毒进行捕获和识别，然后将相关的病毒信息传递给效应细胞（T细胞和B细胞），效应细胞在接受外来抗原的刺激后会产生相应的抗体来中和、清除病毒。

因此，检测COVID-19患者体内SARS-CoV-2的特异性抗体水平可用于辅助诊断COVID-19本研究使用的胶体金法SARS-CoV-2抗体检测试剂盒的基本原理为：在结合区包被胶体金标记的抗人源IgM/IgG抗体，在醋酸纤维膜检测区包被SARS-CoV-2抗原，当样本中含有SARS-CoV-2抗体时，在结合区会形成抗原抗体复合物，该复合物经层析作用迁移至检测区，与SARS-CoV-2抗原结合，形成肉眼可见的检测线本研究结果显示，胶体金法检测SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体的特异性均为100%,IgM抗体、IgG抗体和IgM+IgG抗体联用的敏感性分别为76.3%、81.3%和90.0%，表明SARS-CoV-2抗体的特异性极高，可减少临床误诊的概率，敏感性也较高，可用于COVID-19的辅助诊断[4]造成敏感性差异的原因主要与患者的个体差异及免疫系统状况有关本研究结果显示，在发病7d内、发病8～14d和发病15d后，IgM+IgG抗体联用的敏感性分别为70.0%、95.5%、97.4%由此可见，相对于临床症状和SARS-CoV-2核酸检测，SARS-CoV-2抗体检测在发病早期存在一定的局限性，这与抗体产生的机制有关，因此SARS-CoV-2抗体可作为COVID-19的辅助诊断指标，弥补SARS-CoV-2核酸检测的不足。

本研究对同一患者的血浆样本和全血样本分别进行SARS-CoV-2抗体检测，结果显示血浆样本与全血样本IgM抗体的总符合率为100%,IgG抗体的总符合率为96.7%这表明血浆样本与全血样本有较好的一致性，必要时可使用同一患者的不同样本来进行SARS-CoV-2抗体检测，以提高检出率本研究还收集了23例COVID-19患者不同时间点采集的样本，并进行SARS-CoV-2抗体检测结果显示，IgG抗体在发病初期的阳性率较低（22%),IgM抗体的阳性率（56%）一般COVID-19发病早期SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体阳性率较低的主要原因可能为人体的免疫系统对SARS-CoV-2需要有一个适应与反应的过程在发病中期，IgM抗体和IgG抗体的阳性率均为100%在发病后期，IgM抗体由于其本身的特性（会被人体代谢掉）导致阳性率下降（阳性率为63%），而IgG抗体会持续存在，因此依然可在血清中被检测到（阳性率为100%）综上所述，胶体金法检测SARS-CoV-2抗体简便、快速、准确，不需要特殊仪器，一般医护人员均能操作，不需要进行特别培训SARS-CoV-2IgM抗体和IgG抗体检测和动态监测有助于COVID-19的辅助诊断和对患者病程的追踪，可在临床上广泛应用。

参考文献：[2]国家卫生健康委.国家卫生健康委关于新型冠状病毒肺炎暂命名事宜的通知[EB/OL].(2020-02-07)[2020-03-01].[4]国家卫生健康委办公厅.新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)[EB/OL].(2020-03-03)[2020-03-04].[5]里进,叶光明,陈良君,等.新型冠状病毒核酸检测假阴性结果原因分析及对策[J].中华检验医学杂志,2020,43(3):221-225.黄绍坤,钟庆杨,朱海鹏,罗润弟,张见明.SARS-CoV-2抗体动态监测在COVID-19诊断中的价值[J].检验医学,2020,35(09):895-899.。