玉米小斑病抗性鉴定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,*,实验十,,玉米小斑病抗性鉴定,,,,一、实验目的,学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术1、玉米小斑病的主要症状特征观察2、玉米小斑病的接种方法3、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定玉米小斑病（,Helminthosporium maydis,）,是温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害，也是我国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成严重损失选育抗病自交系和杂交种，是防治小斑病最经济有效的措施玉米从幼苗到成株均可发病，通常从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，后扩大成,2~3mm,的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常常成不规则形发病适温为,25~30,℃,,二、内容说明,,,内容说明(续),,根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌划分为,O,小种和,T,小种两个生理小种T,小种对,T,型细胞质有专化毒性，故育种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型玉米对小斑病抗性表现亦有两种，一是多基因控制，表现为病斑数量少，在保湿条件下，病斑形成的孢子少，孢子形成时间较长二是由隐性单基因,rhm,控制，表现为小的褪绿病斑。

鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，大田诱发鉴定和人工接种鉴定但以人工接种鉴定较为可靠一）所需用品,,1、,材料：供试玉米材料、玉米抗病和感病对照材料玉米小斑病菌种，,T,小种的培养物；上一季感染,O,小种小斑病的玉米植株病叶2、,仪器用具：高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等3、,药品试剂：,75%,酒精、,0.1%,升汞溶液、葡萄糖、琼脂、马铃薯等三、所需用品和操作方法,,,用具,,（二）操作方法,,1.,苗期接种鉴定,,（,1,）菌种的培养,,①病原菌的分离,,选取新鲜病叶作为分离材料，在灭菌室内进行操作先将病斑剪成,4~5mm,2,大小，约,30~40,块，然后分别将病组织小块置于,0.1%,升汞溶液中消毒,1min,，立即取出，按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次，每次,2~3min,最后以无菌操作方法，将病斑组织按正方形四点排列，栽种在,PDA,平板培养基（去皮马铃薯,20g,，葡萄糖,10~20g,，琼脂,17~20g,，水,100ml,）上，置,25~30,℃,,温箱中培养约,7,天②　菌种的纯化,,,选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植到斜面培养基上（每个典型菌落移,3,管），然后再放在,25,℃,,恒温下培养。

待产生孢子后，选取菌落较一致的斜面,1~2,管，挑取一点，观察孢子的形状、分隔数、脐点特点然后计测孢子大小确认纯种后，再用斜面培养基扩大培养，让其产生大量孢子后，置冰箱中保存待用菌丝形态,,（2）孢子悬浮液的制备,,用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中，猛力摇动冲洗孢子也可辅以接种环表层刮除最后将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中用纱布滤去菌丝及培养基，滤液用蒸馏水稀释，调至在,100,倍显微镜下每个视野有,5,个孢子浓度的悬浮液待用3,）接种病菌,,接种小斑病的适宜时期是在玉米,6,个叶片左右接种前在配制好的孢子液中加入,2%,蔗糖，以促进病菌孢子萌发接种菌液量是每株,1~2ml,用微型喷雾器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置,25,℃左右温度下保湿,24,小时4,）病情鉴定和分级标准,,接种后,7~10,天即可进行病情鉴定鉴定应在同一天内完成鉴定项目和标准如下：,,①　发病程度,,以叶片为单位进行鉴定根据病斑占叶片面积的百分率，记载每片叶的感病程度发病程度分为,9,级（,表,1,）鉴定接种部位的叶片，每株,4,片叶，每个供试材料,10,株共,40,片以整株为单位，根据整株的发病情况，分为,7,个等级（,表2,）。

而后，以叶片为单位，,计算病叶率和病情指数,病情,计算公式,,,,,表1 玉米小斑病叶片发病程度分级标准,,等,,级,病斑占叶片面积（,%,）,0,,1,,2,,3,,4,,5,,6,,7,,8,0,,1,,2—,5,,6—,10,,11—,20,,21—,30,,31—,50,,51—,70,,>70,0级,1级,2级,3级,4级,5级,6级,7级,8级,,表2 玉米小斑病整株发病程度分级标准,,级别,全株叶片病斑占总叶面积（,%,）,,0,全株叶片无病,0.5,植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积,10%,以下）,1,植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积,11%~25%,）,2,植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积,26%~50%,）,3,植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积,51%,以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积,26%~50%,），上部叶片有少量病斑（占叶面积,10~25%,）,4,植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积,50%,以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积,26~50%,）5,全株基本枯死0.5级,1级,2级,3级,4级,5级,0级,,病情鉴定和分级标准,（续）,②　病斑长度,,随机测量,40,个独立的病斑，每株,4,个，以,mm,为单位。

③　抗病性的反应型,,病斑反应型分为三级，分级标准见,表3,表3 玉米小斑病抗性反应型分级标准,,病斑型,病斑症状,坏死型,,病斑中央的坏死部分为黄褐色，周围有深色的边缘，病斑周围和两端没有暗绿色的浸润区萎蔫型,病斑中央的坏死部分为灰褐色至近似灰白色，没有深色边缘，在坏死斑周围或两端有绿色的浸润区，在高温、潮湿、光照弱的条件下浸润区扩展快，并且叶片迅速呈暗绿色，萎蔫死亡褪绿病斑型,病斑小，病斑中央为白色坏死，没有绿色边缘，病斑周围有褪绿晕圈坏死型,萎蔫型,褪绿病斑型,,2.　成株期接种鉴定,,①,接种,：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入心叶喇叭口，接种应在下午或傍晚湿度较大时进行天气干燥时，接种后可在每株心叶喷水②,病情鉴定和分级标准,：抽丝后,15,天左右进行病情鉴定，鉴定应在同一天内完成发病程度以整株为单位，分,7,个等级分级标准见,表,2,一般用于苗期和成株期抗病性鉴定整株调查中，植株上、中、下叶片的划分，以第一果穗上下两片叶为中部叶，其下为下部叶，其上为上部叶表2 玉米小斑病整株发病程度分级标准,,级别,全株叶片病斑占总叶面积（,%,）,,0,全株叶片无病,0.5,植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积,10%,以下）,1,植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积,11%~25%,）,2,植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积,26%~50%,）,3,植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积,51%,以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积,26%~50%,），上部叶片有少量病斑（占叶面积,10~25%,）,4,植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积,50%,以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积,26~50%,）。

5,全株基本枯死0.5级,1级,2级,3级,4级,5级,0级,,③　病株率和病情指数计算,,病株率和病情指数计算方法是以整株为单位进行1,、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？,,2,、玉米小斑病的典型特征为何？,,3,、玉米小斑病鉴定的基本环节有哪些？,,4,、玉米小斑病接种的要点是什么？,,5,、玉米品种对小斑病抗性表现分几级？各级表现如何？,四、作业,,[1] 玉米遗传育种学编写组，1979，玉米遗传育种学，230—260，科学出版社[2] 方中达，1998，植病研究方法，p373—376，中国农业出版社参考文献,,。