原花青素对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织nNOS的影响.doc

原花青素对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织nNOS的影响　　【摘要】目的讨论原花青素〔pryanidin,p〕对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织中神经元型一氧化氮合酶〔nns〕表达的影响方法将66只大鼠随机分为假手术组、2型糖尿病单纯脑缺血组及p组〔100g/kg〕，分别于术后3、6、12、24、48h应用免疫组织化学方法行nns半定量分析结果脑缺血后海马区有大量nns免疫反响阳性细胞表达，缺血后3h开场表达，6h达顶峰，12h后逐渐降低；在一样的时间点，模型组较假手术组明显升高(p0.01)，p组较模型组明显降低(p0.01)，与假手术组无明显差异(p0.05)结论p具有降低2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑缺血海马组织nns活性的作用　　【关键词】糖尿病脑缺血原花青素神经元型一氧化氮合酶　　糖尿病是脑血管病的一个重要危险因素，高血糖可以引起或加重缺血性脑损害目前虽已有多种药物用于临床，但疗效均不理想缺血性脑损伤是由多种致病因素共同参与，共同促进的结果，其中氧自由基损伤是其最重要的且肯定的因素原花青素〔pryanidin,p〕是一种很好的氧自由基去除剂和脂质过氧化抑制剂[1]，对大鼠血清和脑组织的脂质过氧化物的形成有明显的抑制作用。

我们拟从神经元型一氧化氮合酶〔nns〕的角度来讨论p对2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血的神经保护机制，为其临床应用提供理论根据　　1材料与方法　　1.1实验动物选用安康雄性sd大鼠66只，体重180～240g(辽宁医学院实验动物中心提供)，答应证号：sxk〔辽〕实验动物级别：普通级　　1.2实验分组66只大鼠随机分为假手术组〔6只〕、模型组〔30只〕、原花青素组〔p组，30只〕，p组在建立2型糖尿病模型后给予灌胃，1次/24小时，连续1，于大脑中动脉闭塞〔a〕术前1h再灌胃1次p组以p粉剂100g/kg，每次蒸馏水配制成悬浮液灌胃，其他各组组以一样的给药方法给予生理盐水(ns)1l·kg-1　　1.32型糖尿病大鼠局灶性脑缺血模型的制备每笼5只，常规饲料适应性饲养1，然后喂饲高脂高糖饲料〔10%猪油，2.5%胆固醇，1.0%猪胆酸盐，20.0%蔗糖，66.5%常规饲料[2]〕4后，诱导出高胰岛素血症和胰岛素抵抗，按25g/kg体重的剂量1次性尾静脉注射stz溶液〔临用前以0.1l·l-1ph值4.2的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液配制成0.5%的溶液[3]〕72h后取尾血测血糖，超过16.7l·l-1为2型糖尿病大鼠[4]。

2型糖尿病大鼠造模成功后2后按照文献[5]进展大鼠局灶性脑缺血模型〔iddleerebralarterylusin，a〕的制作栓线鼠即刻出现左侧hrner征或麻醉清醒时出现右侧前肢内收屈曲或爬行时向右侧划圈或倾倒为造模成功，有代表性标本观察结果并记录)　　1.4免疫组化法检测缺血侧大脑海马a1区nns的表达造模后24h，大鼠以10%水合氯醛3l·kg-1腹腔注射麻醉后固定，颈正中偏右切口，暴露右颈总动脉，用ns约50l灌注，然后用4℃4％多聚甲醛液约50l灌注固定，分别于各时间点断头取脑，取双侧大脑冠状位距嗅球尖端6～11的脑组织块，放入4%多聚甲醛固定液中继续固定24h，常规梯度脱水、透明、石蜡包埋从冠状面中1/3层面开场留取切片，厚度5，连续切片，切片贴附于经apes处理的载玻片上，备用用免疫组化法测定严格按试剂盒说明书进展操作观察大鼠海马a1区，每张取4个视野数用图像用分析仪计算nns阳性细胞数，取其平均值　　1.5统计学处理实验数据用均数±标准差〔x±s〕表示，采用spss16.0统计软件进展单因素方差分析和q检验　　2结果　　原花青素对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠海马组织a1区nns表达的影响　　在脑缺血后海马区可见大量nns免疫阳性细胞表达，在脑缺血后的一样时间点，3h时出现表达，到6h时达顶峰，12h开场降低。

在缺血后一样时间点，模型组组均较假手术组表达明显升高〔p0.01〕；在缺血后一样时间点，p组较对照组表达均明显降低〔p0.01〕，与假手术组相比无明显差异〔p0.05,见表1〕表1p对2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠大脑海马注：与假手术组相比拟，▲▲p0.01；与模型组比拟，★★p0.01　　3讨论　　糖尿病是脑梗死的的独立危险因素，血糖升高不但作为重要的危险因素参与脑梗死的发病过程，导致疾病的发病率增高，而且对脑梗死发生后病理过程又促进作用，加重脑组织缺血性损伤和病情，影响预后[3]16-17高血糖加重脑缺血性损伤的机制有许多种，其中之一就是一氧化氮〔n〕的毒性机制ste-arie等[6]研究发现，高血糖可以引起兴奋性递质谷氨酸增多，导致a2+增高有关，一氧化氮合酶〔ns〕表达增高导致n的合成增多，使n产生增多，并能进步n的生物利用度过量的n产生和释放，可以通过自由基或其他途径产生神经毒性，加重神经元损害　　一氧化氮合酶是一氧化氮合成的限速酶在脑缺血早期，ens介导生成的n通过扩张血管改善缺血区的血液供给,具有短时保护性作用，但随着n的大量产生，在缺血区nns那么介导神经毒性效应并很快占据优势，使脑缺血损伤进展；至晚期，脑缺血脑组织损伤、炎症反响刺激巨噬细胞、神经小胶质细胞、神经元等可大量产生ins，它可缓慢而持久大量地产生n，造成神经元的损伤，由ins介导使缺血生成的n分别在脑缺血进展期和晚期介导神经毒性作用[7]。

高血糖可以加重脑组织损伤，炎症反响，从而刺激产生更多的神经毒性的n[8]，因此降低ins的表达可明显减少n的释放，从而降低n的细胞毒性作用，起到保护脑细胞的作用　　p具有抗氧化、降低毛细血管通透性和对心血管具有多种药理作用[9,10]其含有大量活性酚羟基使其具有很强的抗氧化及去除各种活性氧自由基的才能，目前的研究已证实其可通过去除缺血部分血管内皮细胞的氧自由基，而应用于治疗和预防心肌缺血-再灌注损伤[11]p抗氧化活性使其可抑制诸如组织胺、5轻色胺、前列腺素及白三烯等炎症因子的合成和释放[1]116-120在本实验中p组可以明显减少各时间点2型糖尿病局灶性脑缺血大鼠脑组织的nns平均阳性细胞表达数(p0.01)，推测p神经保护作用的机制可能是通过抗氧自由基作用抑制炎症反响，降低nns含量，减少神经毒性n的产生，进一步发挥抗自由基作用，从而起到神经保护作用　　国内外关于p的神经保护作用研究较少，尚未发现有p对2型糖尿病局灶性脑缺血后海马组织nns表达影响的相关报道本研究从此角度研究p的保护作用，从而对临床应用p提供了证据　　【参考文献】　　［1］张小郁,高明堂,李文广,等.葡萄籽提取物体外抗脂质过氧化作用的研究[j].自由基生命科学进展，1999，7(4):116-120.　　［2］pias,kijb,hanpl,etal.adinistratinfthep38apkinhibitrsb203580affrdsbrainprtetinithaidetherapeutiindagainstfalisheiinsult[j].jneursisrev,2022,73(4):537-544.　　［3］陈佳俊,石岩殊,韩雪梅,等.线拴法大鼠局灶性脑缺血模型(pa)的实验研究[j].吉林医学,2022,25(10):16-17.　　［4］李妮,林中昌.高血糖的危害性与致病机制研究进展[j].中国慢性病预防与控制，2022，12(3):143-144.　　［5］司晓晨,尚文斌,卞慧敏,等.链脲佐菌素加高脂膳食诱导2型糖尿病大鼠模型[j].安徽中医临床杂志，2022，15(5):383-385.　　［6］ste-ariel,hazellas,beeur,etal.iunhistheialdetetinfinduiblenitrixidesynthase,nitrtyrsineandanganesesuperxidedisutasefllinghyperglyeifalerebralisheia[j].brainres,2001,918(1-2):10-19.　　［7］antil,pulaini,pelletier.nitrixidedulatesperistaltiusleativityassiatedithfluidirulatinintheareapansyrenillakellikeri[j].jexpbil,2022,208(10):2022.　　［8］graierf,ashert,lakenerl,etal.expsuretelevatedd-glusenentratinsdulatesvasularendthelialellvasdilatryrespnse[j].diabetes,1993,42(69):1497-1505.　　［9］yaaguhif,yshiuray,nakazaah,etal.freeradialsavengingativityfgrapeseedextratandantixidantsbyeletrnspinresnanespetretryinanh22/nah/dssyste[j].jagrifdhe,1999,47(7):2544-2548.　　［10］sinatrast,dearj.freeradials,xidativestress,xidizedldensitylipprtein(ldl),andtheheart:antixidantsandstrategiestliitardivasulardaage[j].nned,1995,59(10):579-588.　　［11］fainr,arini,aldinig,etal.dietenrihedithpryanidinsenhanesantixidantsativityandreduesyardialpst-ishaeidaageinrats[j].lifesi,1999,64(8):627-642.。