【最新word论文】cMET和COX2在肝细胞癌中表达的意义及其相关性【临床医学专业论文】.doc

1cMET 和 COX2 在肝细胞癌中表达的意义及其相关性【摘要】 目的探讨 cMET 和 COX2 在肝细胞癌组织中表达的意义及其相关性方法将 2006 年 1 月至 2006 年 12 月手术后经病理证实为肝细胞癌患者 28例分为肝硬化组和非肝硬化组，再根据癌肿的大小分为大于 5 cm 组和小于 5 cm组采用免疫组织化学法对 28 例肝细胞癌患者肝组织进行染色，利用美国SimplePCI6 专业图像分析系统截取显微镜下的 10～15 个视野，测算 cMET 和COX2 的平均光密度值结果肝硬化组的 cMET 和 COX2 平均光密度值均比非肝硬化组高；大于 5 cm 组的 cMET 和 COX2 平均光密度值均比小于 5 cm 组高； cMET 和 COX2 呈正相关结论 HGFcMETCOX2VEGF 通路可能是促进肝细胞癌血管生成的一个潜在通路，为肝细胞癌抗血管生成治疗策略提供新的靶点 【关键词】 环氧水合酶类 cMET 肝肿瘤Relationship between cMET and COX2 expressed in hepatocellular carcinoma and its significanceAbstract: Objective To study the relationship between cMET and COX2 expressed in hepatocelluar carcinoma as well as its significance. Methods Twenty eight cases hepatocelluar carcinoma were identified by pathology from January to December in 2006, Mean optical density of hepatocelluar carcinoma tissue slides stained by immunohistochmemical method was detected with professional photo analysis system (named SimplePCI6, made in USA). Results Mean optical density of cMET and COX2 in hepatocellular carcinaoma with hepatic cirrhosis is higher than without liver cirrhosis, and in hepatocellular carcinoma more than 5 cm higher than the ones of less than 5 cm.; cMET and COX2 was positively correlated. Conclusion cMET and COX2 may highly correlated in hepatocellular carcinoma, especially in angiogenesis of hepatocellular carcinoma. It is concluded that COX2 may be downstream factor of cMET. HGFcMETCOX2VEGF may be a potential pathway, which plays a great role in angiogenesis in hepatocellular carcinaoma.Keywords: cyclooxygenase; cMET; hepatocellular carcinomacMET 是由原癌基因 cMET 编码的一个蛋白，是肝细胞生长因子唯一受体蛋白。

环氧合酶－2（cyclooxygenase2 ，COX2 ）是前列腺素合成限速酶，是炎症过程中的一个重要的诱导酶，已经有许多研究表明，COX2 在肿瘤的血管生成中起重要作用，与肿瘤的复发和转移有关，在正常的肝组织中不表达2COX2 研究表明，cMET 和 COX2 分别与 VEGF 有密切关系［12 ］ ，cMET和 COX2 可能通过促进肿瘤的血管生成，影响肿瘤的复发和转移近年来，以抑制肿瘤血管生成的策略来治疗肿瘤的研究成为一个崭新的热点，但是目前国内外文献均无肝细胞癌中 cMET 和 COX2 相互作用关系的研究，因此本研究拟探讨肝细胞癌中 cMET 和 COX2 表达的意义及其相关性1 材料与方法1.1 材料2006 年 1 月至 2006 年 12 月经肝胆外科研究所手术切除病理证实为肝细胞癌患者的肿瘤组织标本 28 例，所选取的标本均为乙肝病毒携带、肿瘤大于 2 cm且无肝外转移者，年龄 28～75 岁，平均 47.8 岁，男性 26 例，女性 2 例其中肝硬化 13 例，无肝硬化 15 例肿瘤大于 5 cm 11 例，小于 5 cm 17 例所用COX2 和 cMET 兔抗人多克隆抗体，PV9000 二步法免疫组化检测试剂和浓缩型 DAB 试剂盒均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。

SimplePCI 6 专业图像分析系统来自 Cimpix 公司1.2 方法1.2.1 取材手术切除肝细胞癌病灶，于切除的肿瘤组织内取标本一小块，经 40 g/L 的多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm 厚度连续切片，分别做常规HE 染色和免疫组化染色1.2.2CMET 和 COX2 检测采用 PV9000 二步法免疫组化检测系统进行检测简述如下：脱蜡、水化组织切片，3％H2O2 去离子水孵育 10 min，以阻断内源性过氧化酶，以微波枸橼酸盐进行抗原修复，滴加一抗，4 ℃过夜后 PBS 冲洗，滴加试剂 1（Plymer helper）37 ℃孵育 20 min，PBS 冲洗后滴加试剂2（Polyperoxidaseantimouse/rabbit IgG） ，以 DAB 溶液显色，自来水冲洗、复染、脱水、透明、密封用 PBS 代替一抗作为染色的阴性对照，用已知的COX2 和 CMET 染色阳性的乳腺癌组织切片标本作为二者的阳性对照1.2.3 结果判断于 400 倍显微镜下全面观察每张切片，染色阳性细胞为单纯细胞浆着色而核无着色，胞浆内有棕黄色至深棕黄色(或棕红色)颗粒者。

每张切片采集 10～15 个视野（即 10～15 张测试图像） ，用 SimplePCI 6 专业图像分析系统（Cimpix INC.USA）测算其平均光密度值1.2.4 统计学处理应用 SPSS11.5 软件进行 t 检验和线性回归分析对所得结果进行分析，平均光密度值以±s 表示2 结果2.1 肝硬化组与非肝硬化组的表达3COX2 与 cMET 在肝细胞癌中，肝硬化组与非肝硬化组的表达之平均光密度值差异非常显著（P＜0.01)，详见表 1表 1COX2 和 cMET 在两组中的表达2.2 不同大小肿瘤中的表达COX2 和 CMET 在肝细胞癌中，大于 5 cm 组与小于 5 cm 组的表达差异详见表 2表 2 肝细胞癌 COX2 和 cMET 的表达2.3COX2 和 cMET 的相关性将 COX2 和 cMET 的平均光密度值进行线性回归分析，系数为 0.7929，回归方程显著，方程有意义(方差 F 分析 F 值为44.02，P＜0.01)，提示 cMET 和 COX2 呈高度正相关 3 讨论研究标明，COX2 和 cMET 在结直肠癌、胃癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、肾癌等恶性肿瘤中过表达，在恶性肿瘤的发生发展过程中起一定作用，尤其与恶性肿瘤的血管生成密切相关。

COX2 特异抑制剂能降低 VEGF 的表达，产生抗血管生成作用，这与 VEGF 启动子结合 Sp 蛋白的位点有关，可能与蛋白质降解体依赖的 Sp1 、Sp4 蛋白质的降解有关［3］ 在正常的肝脏组织中不表达 COX2 ，虽然很早就在肝细胞癌中检测到 COX2 的表达，但是其在肝细胞癌的发生发展过程中究竟起何作用，仍然未有定论在肝细胞癌中，COX2 上调 VEGF 的表达，其机制可能是通过前列腺素合成，而 COX2 上调 VEGF 的表达的效应可以被COX2 抑制剂 NS398 阻断，提示 COX2 的上调表达与 VEGF 表达和肝细胞癌血管生成密切相关，COX2 酶在原发性肝细胞癌的发生发展过程中有重要作用［45 ］ Horiguchi 等报道在 HGF 转基因小鼠中通过 HGF 自分泌途径，HGF/cMET 信号转导通路 cMET 激酶活性增强，促进由突变剂二乙基亚硝基诱导的肝细胞癌的产生，微血管密度明显升高且可以观察到 VEGF 表达水平的升高，提示 cMET 可以通过上调 VEGF 的表达促进肿瘤血管生成［6］ 因此认为，COX2 和 CMET 参与了肿瘤血管生成，在肿瘤的发生发展过程中有重要作用，探索二者在肝细胞癌当中的相互关系有积极的意义。

目前尚未见肝细胞癌中 COX2 和 cMET 相互关系的报道本研究主要通过免疫组织化学法对 28 例肝细胞癌患者组织染色，利用美国 Simple PCI6 专业图像分析系统截取显微镜下的 10～15 个视野，测算 cMET 和 COX2 的平均光密度值，分析和探索在肝细胞癌中 COX2 和 cMET 表达的意义首先，目前一般认为肿瘤大于 2 cm 时，主要靠新生血管来提供营养支持，若无新生血管血供支持，肿瘤中心将坏死肿瘤越大，越需要新生血管来提供营养支持已经有研究证明 cMET 和 COX2 均可上调 VEGF 的表达［3，6］ 因此，COX2 和cMET 在较大的肝细胞癌中呈更高表达来促进肿瘤血管生成，与肿瘤越大越需要新生血管形成提供营养支持相适应肝硬化是肝细胞变性、坏死，引起炎细胞浸润，继而出现纤维组织增生和肝细胞结节状再生的过程，所以易于解释伴有肝硬化的肝细胞癌炎症因子 COX2 表达会比非肝硬化组更高肝细胞生长因子作用于唯一受体蛋白 cMET 而促进肝细胞的增生，肝硬化肝细胞增生需要肝细胞生长因子的刺激，因此受体蛋白 cMET 的表达水平相应的会更高表达水平更高的 cMET 和 COX2 ，进一步促进 VEGF 的上调表达，增强肿瘤血管生成，促4进肿瘤的增长。

最后，HGF 以一种剂量依赖的方式刺激胃癌细胞 SCM1 的生长，在胃粘膜细胞中，HGF 上调 COX2 基因的表达和前列腺素的合成，可以被 NS398阻断Jones 等通过对实验大鼠胃上皮细胞的研究认为 HGF 通过 cMET 磷酸化和 ERK2 细胞信号转导途径，来诱发激活 COX2 基因的表达［78 ］ 另外的研究表明，在过表达 COX2 的食管癌细胞中，以抑制 COX2 导致 cMET 表达下降［9］ 结合本实验结果，cMET 和 COX2 正相关，本文认为在肝细胞癌中，HGF 作用 cMET ，cMET 再与 COX2 相互作用，COX2 再作用于 VEGF，后者促进血管生成，即 HGFcMETCOX2VEGF 这条途径可能是促进肝细胞癌肿瘤血管生成，从而促进肿瘤生长的重要途径之一，可以为肝细胞癌抗血管生成的血管抑制治疗策略提供新的靶点和思路参考文献】［1］ 彭利，左连富，王顺祥，等.肝癌组织中COX2 、VEGF、MMP2 、MMP9 的表达及相互关系的免疫组化研究［J］.实用肿瘤杂志，2005， 20（2） ，134-136.［2］ 王玉萍，楚天骄，党秋红，等. 乳腺癌中肝细胞生长因子及其受体C。