超高效液相串联二级质谱的使用及银杏内酯样品检测.pptx

超高效液相色谱串联二级质谱的使用及银杏内酯样品检测超高效液相色谱串联二级质谱的使用一、超高效液相色谱串联二级质谱的基础知识二、岛津LCMS8030液质联用仪系统组成三、岛津LCMS8030使用规程四、银杏内酯的检测分析 一、超高效液相色谱串联二级质谱的基础知识 超高效液相色谱串联二级质谱（UPLC-MS/MS）UPLC-MS/MS将超高效液相色谱快速高效的分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力相结合可以同时得到化合物的保留时间、分子量及特征结构碎片等丰富的信息广泛应用于医药、生化、环境卫生和食品等领域•超高效液相色谱的特点： 超高效液相色谱以耐高压的泵系统（一般在60Mpa以上）结合超高液相色谱专用色谱柱可以快速分离复杂的组分（一般10min以内）MS/MS的原理： 二级质谱是在一级质谱的基础上对经一级质谱选择分离的母离子进行碰撞断裂，并对碎片离子进行监测，可以同时得到分子量和特征结构碎片的信息较一级质谱可以得到跟多关于目标物的信息•三重四极杆•三重四极杆常用的监测模式•1.母离子扫描•2.子离子扫描•3.中性离子丢失扫描•4. Q3扫描•5.MRM监测扫描方式扫描方式Q1 Q1 Q2 Q2 碰撞室碰撞室Q3 Q1全扫描扫描a通过所有离子b通过所有离子bQ3全扫描通过所有离子b通过所有离子b扫描a子离子扫描设定d离子碎裂c, 然后通过所有碎片扫描a母离子扫描扫描a离子碎裂c, 然后通过所有碎片设定d中性丢失扫描扫描a离子碎裂c, 然后通过所有碎片扫描a扫描功能注注: :扫描扫描a a: : 全扫描或选择离子传输通过所有离子通过所有离子b b 或碎片或碎片: : 在设定的质荷比范围内通过所有离子或碎片离子碎裂离子碎裂c c: : 通过与氩气碰撞使离子碎裂设定设定d d: : 设定通过特定质荷比的离子9为分析物为分析物 1 1 / / 碎片碎片 1 1设定设定 Q1, Q1, 碰撞室和碰撞室和 Q2 Q2 电压电压等待片刻等待片刻( (切换时间或扫描延迟时间切换时间或扫描延迟时间) )为分析物为分析物 1 1 / / 碎片碎片 2 2设定设定 Q1, Q1, 碰撞室和碰撞室和 Q2 Q2 电压电压监测碎片监测碎片1 1的信号的信号 ( (驻留时间驻留时间) )等待片刻等待片刻( (切换时间或扫描延迟时间切换时间或扫描延迟时间) )为分析物为分析物 2 2 / / 碎片碎片 1 1设定设定 Q1, Q1, 碰撞室和碰撞室和 Q2 Q2 电压电压等待片刻等待片刻( (切换时间或扫描延迟时间切换时间或扫描延迟时间) )监测碎片监测碎片1 1的信号的信号( (驻留时间驻留时间) )为分析物为分析物 2 2 / / 碎片碎片 2 2 设定设定 Q1, Q1, 碰撞室和碰撞室和 Q2 Q2 电压电压等待片刻等待片刻( (切换时间或扫描延迟时间切换时间或扫描延迟时间) )监测碎片监测碎片2 2的信号的信号( (驻留时间驻留时间) )监测碎片监测碎片2 2的信号的信号( (驻留时间驻留时间) )MRMs分析状态下的质谱仪工作流程二、岛津LCMS8030液质联用仪系统组成超高效液相色谱系统ESI离子源单触式安装或移除位置调节旋钮:-2mm至+3 mm。

ü全新设计的锥形喷雾毛细管最大限度地减少了样品堵塞ü 实现免工具维护三重四极杆三、岛津LCMS8030使用规程•开机： （1）依次打开自动进样器，柱温箱，泵，氮气发生器以及CBM和电脑电源等待仪器连接 （2）打开LabSolutions主窗口，双击lcms8030，进入实时分析窗口，点击自动排气等待排气完成 测样测样Q3扫描模式：点击文件，新建方法，创建Q3全扫描（即创建+/-两种扫描模式），设置扫描范围与扫描速度以及扫描时间（1min），设置Lc时间为1min，设置流动相比例和柱温箱温度保存方法，下载方法点击单次分析，设置进样瓶号，样品架号，进样量为0.2ul点击确定，进行分析 MRM优化：新建方法，选择MRM模式，根Q3扫描结果，确定母离子，执行MRM优化得到优化结果，保存方法检测：安装色谱柱，调用保存的优化的MRM方法，设置色谱条件，保存方法，下载方法，点击批处理，建立批处理方法，保存批处理，点击开始批处理数据分析：在LabSolutions主窗口点击Postrun，双击Browser，对数据进行处理关机关机 点击实时分析窗口中的lc，ms开关，关闭泵，柱温箱和质谱仪。

等待加热模块温度降到50摄氏度左右，退出软件关闭泵、柱温箱、自动进样器和CBM以及氮气发生器的电源四、银杏内酯的检测分析•实验目的（1）熟悉岛津lcms8030液质联用仪的结构、分离检测原理和操作程序2）掌握银杏内酯标样的分析方法•实验原理 四种银杏内酯在经过超高效液相色谱分离后进入ESI电离源，经电离后进入Q1，在Q1中筛选出目标离子，目标离子在Q2中经碰撞破裂，碎片粒子进入Q3，Q3分析记录碎片粒子信息从而同时得到目标物的保留时间，分子量，碎片信息等仪器和试剂 1.仪器：岛津lcms8030液质联用仪（配氮气发生仪）1.材料：银杏内酯标准品3.试剂： 乙腈（色谱纯） 甲醇（色谱纯） 水（哇哈哈纯净水）•实验步骤 1.标准品溶液的配制与流动相处理：（1）精确称量适量白果内酯、银杏内酯A、B、C，用甲醇溶解定量于容量瓶中，配制成四种内酯浓度约为1mg/ml的混合标准溶液2）将乙腈和水分别经过0.45um微滤膜过滤，并超声脱气处理20min •2.质谱条件优化母离子的选择 采用Q3全扫描模式，检测母离子。

根目标物的分子量以及母离子的丰度确定母离子和ESI电离模式子离子和碰撞电压的优化 根据所选择的母离子和电离模式，执行MRM自动优化程序，得到优化结果，保存方法均采不接柱，进样量0.2ul3.色谱条件的设置 色谱柱：Waters ACQUITY UPLC C18 （50*2.1mm,1.7um） 流动相：A-水；B-乙腈 流量：0.5ml/min 柱温：38℃ 时间（min）流动相A流动相B090%10%570%30%5.1090%10%890%10%流动相洗脱程序•标准曲线的制作： 将配制好的标准品溶液稀释成0,5,10,15,20五个浓度梯度，调用保存的方法，进样分析，进样量为3ul得到数据样品检测，用同样的方法对样品溶液进行分析，得到数据 样品检测：用同样的方法对样品溶液进行分析，得到数据•4.数据采集 打开实时分析软件，采集数据•结果处理： 在Browser窗口中对标准品的物质峰进行积分，并以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，生产标准曲线添加未知样品，查看样品结果。

注意事项1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用 3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液4、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器5、气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡 思考题1、试述MRM模式下各四极杆室的运行情况2、如果知道一种物质的碎片大小，想知道这种物质的分子量，该选用何种扫描模式？。