薄层色谱法测定苏丹红.doc

薄层色谱法测定苏丹红1. 试剂和仪器苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液，乙醚，正己烷，0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，硅胶G，7.5cm*2.5cm玻璃板、毛细管、250mL广口试剂瓶、尺子和铅笔等2. 苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液的配制（提前配制）分别称取苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ各0.5mg，用乙醚溶解后用正己烷定容至50mL，相当于100μg/mL的苏丹红3. 展开剂的配制正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）4. 薄层板的制备（至少提前一天准备）取7.5cm*2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液8mL，调成均匀的糊状，用滴管吸取此糊状物，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在玻璃板或水平的桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h，取出，稍冷后置于干燥器中备用5. 点样取1块用上述方法制好的薄层板分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在一块板的起始线上点苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ标准溶液和混合液4个样点。

样点间距0.5-0.8cm如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点干燥后进行样点直径不应超过2mm6. 展开用正己烷+乙醚+氯仿（体积比为7:1:0.5）作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250mL广口瓶中进行展开点样一端应浸入展开剂0.5cm盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的 ，比较样点的Rf值的大小7. 数据处理计算公式：比移值： Rf = R1/ R2R1：原点至样品斑点中心之间的距离，cmR2：原点至展开剂前沿的距离，cm相对比移值： Ris=Rf（i）/Rf（s）Rf（i）是试样至原点的距离 ，cmRf（s）是标样至原点的距离，cm数据结果记录表展开剂展开剂距离样品编号样品点距离比移值Rf样品成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　8. 思考题（1） 在一定的操作条件下为什么可利用Rf值来鉴定化合物？（2） 在混合物薄层谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？（3） 展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？。