【毕业设计 医学论文】survivin、livin在脑胶质瘤组织中的表达及意义.doc

Survivin、Livin在脑胶质瘤组织中的表达及意义【摘要】目的：探讨Surviving Livin在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义方法：收集52例人 脑胶质瘤组织标木，另取30例正常脑组织为对照组应用免疫组织化学方法分别检测52 例脑胶质瘤组织和30例正常脑组织中的Surviving Livin蛋白的表达，并测定52例不同病 理分级的脑胶质瘤-组织中Survivin. Livin蛋白表达利用HP1AS-2000图像分析系统测定 Survivin、Livin在各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率结果：Survivin. Livin 在30例正常脑组织中均不表达，而在52例脑胶质瘤组织中呈高阳性表达，两者Z问差异均 具有显著性（P【关键词】Survivin； Livin；脑胶质瘤；免疫组化Abstractobjective： To explore the expression of Survivin、Livin in human gliomas and its implication. Methods： Fifty-two samples of gliomas were pided into four groups by WHO sta ndard and thirty n ormal bra in samples were seemed as con trol group ・ All the samples were stained with SP immunohistochemistry to observe the expression of Survivin, Livin and the gliomas malignancy. Image analysis system was applied to measure the expression level of Survivin, Livin at differcnt stage of gliomas and in n oriikd bra in tissues ・ Results： No positive sta ini ng was found in n ormal bra in samples, while the expression rate in gliomas was very high・ The image analysis indicated that the average optical density of Survivin, Livin protein positive immunostaining in gliomas was significantly higher than in normal brain tissues, and the positive area rate of Surviviru Livin protein positive immunostaining in gliomas was obviously higher than in normal brain tissues. Furthermore, compared with that in I Tl degree of gliomas, the average optical density of Survivin, Livin protein positive immunostaining in III"IV degree of gliomas increased markedly, and the positive area rate of Survivin, Livin protein positive immunostaining in III〜IV degree of gliomas increased rcmarkably・ Conelusions： Survi vin, Liv in play tin imports nt role in the development of gliomas ・ The Survi vin, Livin protein expression level increased with the degree of maligrmncy. Survivin and Livin were supposed to be the new targots for gene therapy of gliomas・Key words Survivin； Livin； gliomas； immunohistochcmistry脑胶质瘤是最常见的颅内肿瘤，其发生、发展是一个多步骤、多因索参与的过程，除了原 癌基因的激活，抑癌基因的失活外，某些凋亡调控基因的异常表达也促使细胞恶性转化［1］。

Survivin. Livin是新近发现的凋亡抑制基因，其表达产物具有独特的结构，能够保持特定 的细胞抵抗一系列刺激原诱导，抑制细胞凋亡［2, 3］o木研究采用免疫组织化学链霉索亲 和素-过氧化物酶-生物素(streptavdin-peroxidase-biotin, SP)法，检测 Survivinx Livin 在人脑胶质瘤组织中的表达，探讨其与肿瘤发生、发展及病理学分级Z间的关系，为脑胶质 瘤的基因治疗提供新的理论依据1材料与方法1.1材料来源及分纽选择我院1998年1月、2006年12月间手术切除后经病理证实的人脑胶质瘤组织标木52例, 其中男32例,女20例,年龄19~67岁，平均38.6±3.5岁按WHO病理分级,I级12例, II级10例，m级15例，IV级15例另随机选取30例同期颅脑损伤患者手术获得的无神经 系统肿瘤的正常脑组织标木作正常对照，对照组男18例，女12例，年龄17~65岁，平均 37.7±3.2岁所有脑组织标木均以10%福尔马林固定，常规石蜡包埋1.2方法1.2.1主要试剂鼠抗人Survivin单克隆抗体购白北京中山生物技术有限公司，鼠抗人Livin单克隆抗体购 自美国Imgenex公司，SP试剂盒购于北京中山生物技术有限公司，显色试盒及多聚赖氨酸 购于北京中山生物技术有限公司。

1.2.2主要仪器YWY781型医用微波议(250W, 50Hz),浙江临安电子器材厂生产;家用高压锅1.2.3IIE 染色常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及IIE染色1. 2. 4免疫组织化学SP法检测Surviving Livin蛋白相关抗原主要步骤：组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理lOmin以抑制内源性过氧化物 酶活性，Surviving Livin分别采用高压抗原修复，正常羊血清处理lOmin以减少非特异性 背呆，一抗4°C孵冇过夜，生物素标记的二抗处理10min,链霉菌抗生物素蛋片-过氧化物酶 复合物处理10min, DAB显色液显色，自来水冲洗终止反丿应，苏木精复染，脱水，透明，封 片用PBS代替一抗作为阴性对照组1.2.5免疫组织化学结果判断在纽•织切片中，细胞胞浆染为黄色至棕黄色为阳性细胞阴性对照除细胞核染成蓝色外， 胞浆内无棕黄色反应物利用IIPIAS-2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏 影像公司)对表达进行定最分析，每张切片随机选取5个完整而不重吾的高倍镜视野(X 400),测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反就血积和所有细胞总血积，计算阳性 面积率。

以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测最值邙H性面积 率二单位面积中阳性反丿应的总面积/单位面积中细胞的总面积X100%)o1・3统计学分析对备组免疫纽•织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方芳分析和SNK-q 检验，检验水准a为0. 05o2结果2. ISurvivinx Livin在脑胶质瘤和正常脑组织中的表达所有的胶质瘤显示了不同程度的Survivin> Livin蛋H表达，而在正常脑组织中Swrvivin、 Livin表达均为阴性图像分析结果显示，脑胶质瘤组织与正常脑纟II.织Z间Survivin蛋白 表达的平均光密度分别为0. 4478+0. 0356、0. 1135±0. 0052,阳性面积率分别为0. 5237± 0.0402、0. 1672±0. 0082,脑胶质瘤纽•织与正常脑组织Z间平均光密度及阳性面积率的并界 有显著性（P2. 2Survivinx Livin在不同病理级别胶质瘤中的表达图像分析结果显示，脑胶质瘤I 级利LIV级中Survivin蛋白表达的平均光密度分别为 0.3875土0.0321、1. 1573±0. 1203,阳性面积率分别为 0.4256土0.0342、1.3237±0. 1331, 脑胶质瘤广II级利『IV级Z河平均光密度及阳性面积率的差界有显著性（P平均光密度和阳性面积率（略）注：* nriv级组与广H级组比较，p3讨论H前普遍认为肿瘤的发生是细胞增殖与细胞凋亡失衡所致，受细胞内外多种因素影响。

凋 亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein, IAP）是一类内源性细胞抑制因-了,其过 度表达引起凋亡不足与肿瘤发生密切相关［4~6］因此，凋亡抑制基因成为恶性肿瘤分了生 物学治疗的研究热点脑胶质瘤由于其多质性和浸润性的特点，手术切除难以完全彻底，放 射治疗不敏感化疗多产生I耐药，故复发率高、预示差成为H前临床治疗的世界性难题 Survivin、Livin在人脑胶质瘤组织中的高表达反应，给胶质瘤的靶向基因治疗带来了新的 思路Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的新成员,人Survivin基因全长14. 7kb,是该家族中迄 今为止发现的分了最最小、抗凋亡作用最强者Survivin在细胞周期中呈周期依赖性表达, 尤其在细胞周期的G2/M期呈高表达，能够直接抑制细胞凋亡下游终端效应器caspase-3和 caspase-7,从而参与肿瘤的形成与发展［7］有研究表明，Survivin在神经系统恶性肿瘤 中可释放其他IAP家族的蛋白，并通过这些蛋片间接抑制caspase-3,从而间接参与肿瘤的 形成和发展［8］本研究发现，脑胶质瘤组织中Survivin蛋白表达阳性率明显高于正常脑 组织（PLivin是近年来新发现的哺乳动物凋亡蛋白抑制因了，目前对具研究共少［9］。

Livin在生 理状态下，通过凋亡途径淸除体内衰老和界常的细胞，有利于维持体内组织的动态平衡 Livin过度表达在肿瘤中直接或间接抑制凋亡，不仅有利于细胞的继续增殖，还有利于异常 基因的进一步积聚，促使细胞恶性转化，从而有利于肿瘤的进展［10］木研究发现，脑胶 质瘤中Livin呈高阳性表达，并且Livin表达阳性率及程度随胶质瘤病理分级的升高而增加（P因此，Survivin. Livin在脑胶质瘤组织中的表达上调对胶质瘤的发生、发展发挥重要的 促进作川，并且其表达率与肿瘤的病理分级、恶性程度呈显著正相关尽管其具体的作川机 制尚不明确，但对胶质瘤中凋亡抑制因了 Survivin、Livin的表达研究，有助于理解胶质瘤 的生物学特性，从而为胶质瘤基因治疗靶点的选择和进一步的临床治疗提供依据参考文献】1邓艳春，王吉村，刘新平，等.基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌 基因•癌症，2005, 24 (6)： 680^684・2 Jin Sung Jang, Kyung Mee Kim, Kyung Hee Kang, et al. Polymorphisms in the survivingene and the risk of lung cancer, Lung Cancer, 2008, 60 (1 )： 31 "39.3 Bin Liu。