碱性磷酸酶Km值的PPT课件.ppt

碱性磷酸酶Km值的测定 底物浓度 酶浓度 pH 温度 激活剂 抑制剂 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定 影响 酶促反应的因素 底物浓度对反应速率影响 在其他因素不变 的情况下，底物浓度 对反应速率的影响呈 矩形双曲线关系 SS V V S：底物浓度 V：不同S时的反应初速度 Vmax：最大反应速度(maximum velocity) m：米氏常数(Michaelis constant) VmaxS Km + S Km值 Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时 的底物浓度 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可近似表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值 vv K Km m KmS 2 Km + S Vmax VmaxS V V maxmax V V SSKKm m V V maxmax/2 /2 双倒数作图法 VmaxS Km+S V = （林贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/S 两边同取倒数 m值与max值的测定 注意事项 1 底物和酶取样准确 2 保温时间准确 1234567 加入酶的时 间 加入碱性溶液 终止反应的 时间 9:00:009:00:309:01:309:02:009:02:309:03:009:01:00 9:15:009:15:309:16:009:16:309:17:009:17:309:18:00 保证每个试管的反应时间为15分钟 实验报告 1 绘制矩形双曲线图 2 绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱 性磷酸酶对磷酸本二钠的Km值 注意事项 1 做如下表格 2 可电脑作图 3 若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数(1/2,1/16) 4 实验的最终目的是测得Km值，因此实验报告最 终必须得出结论：Km值等于多少 1234567 Abs S 1/ABS 1/S 。