电镜技术作业c.doc

电镜技术作业c优点：超高压电镜不但分辨率高、单色性好，血且电子穿透力强，对材料的损伤较 小，可以观察较厚的材料（0.5-10um）,场深大，成像有立体感，血且不会影响分 辨率不同：其切片材料的制备与普通电镜有所不同用于超高压电镜的厚切片制备与普通超薄切片相似，只是有一些特殊要求： 样品块要相对软一些，以保护刀口和便于制作连续切片覆盖的支持膜要厚，并喷碳加固，以抗高压电子轰击选用折叠式载网或单缝载网，以防切片脱落和阻挡视野采用浸没法染色，并适当延长染色吋间包埋前可先进行整体染色2.不同：扫描电子显微镜主要是用来观察物体表面超微形态的设备，适合观察固态的 生物材料，对于固态非生物材料现在一般采用扫描探针显微镜來观察用扫描电镜也可以观察生物材料断而或剥蚀面的结构（亚细胞形态），不过 需要预先进行切割或蚀刻处理有时甚至也可进行细胞化学标记物的形态观察扫描电镜的成像机理与透射电镜不同，所观察的是反射电子像（二次电子 像），在对材料的处理上与透射电镜材料的要求不尽相同扫描电镜优点：扫描透射电镜的优点是可以观察较厚的样品（200-400nm）,未染色的超薄切 片也能通过调整亮度和反差形成良好的成像在200kV加速电斥下对样品的辐 射损伤和污染很小。

受真空度要求高（10-10Torr的超高真空度下工作）、场发射电子枪质量等因素 影响，分辨力不及单纯使用透射电镜多数样品用TEM观察己经足够，扫描透射功能用处不大3. 冰冻切片、冰冻取代等多种低温处理技术的应用较好地解决了对生物活性物 质的结构标记观察问题缺点：仍然不能实现永久的活体观察4. 在显微尺度上，表面张力对生物材料形态的影响十分强大表而张力是存在 于固■液、液•气界而上的主要物理力Z-O液■气界面上表面张力的作用是造成生 物样品收缩的主要原因，因此，使用适当的干燥方法进行干燥是样品处理中影响 制样质量的最关键一步利用临界点状态对材料进行干燥，材料理论上不会产生收缩和形变，对于质地较 软的材料这种方法是最好的干燥方法对于质地较硬，不容易发牛形变的材料，不用临界点干燥也能获得满意的图像5 •文章：Freeze-Etching and Vapor Matrix Deposition for ToF・SIMS Imaging of Single Cells冷冻蚀刻，在去除样品通过进入真空环境的分析升华多余的地表水的做法，己被 广泛应用于电子显微镜配合使用在这里应用此技术的吋间飞行二次离子质谱(TOF - SIMS)的低温保存的单细胞成像。

通过去除多余的水而上，在真空浓 缩样品，统一的表而产生是由静态SIMS成像的理想选择我们表明，采用去除 沉积水的条件不会产生不利影响细胞的形态并没有在最顶端的表而层分子的重 新分配此外，我们发现水可以可控再沉积到样品在低于・100C的温度真空水 的再沉积增加了对牛物没有空间分辨率损失碎片离了而冷冻蚀刻方法利用率将 提高提供更大的地表环境控制的SIMS分析低温样品的准备工作的可靠性使用 这些程序，已经获得的两个原子轰击，以及C60+团簇离子轰击高品质的光谱。