饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺稚螺生长、肌肉组成与免疫功能的影响.docx

    饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺稚螺生长、肌肉组成与免疫功能的影响    冼健安+陈江+张秀霞+方哲+黄丹枫+王冬梅Reference：为探讨饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺稚螺生长、肌肉组成与免疫的影响，在基础饲料中添加三个不同浓度（1.2×107CFU/100 g、1.2×108CFU/100 g和1.2×109CFU/100 g）的乳酸菌，养殖初始体重为062 g的方斑东风螺10周结果显示，与对照组相比，饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺稚螺的生长性能和肌肉组分均没有显著影响饲料中添加1.2×107CFU/100 g乳酸菌能够显著提高方斑东风螺的超氧化物歧化酶（SOD）活性，但在添加量为1.2×108CFU/100 g和1.2×109CFU/100 g时SOD活性反而受到抑制;添加1.2×109CFU/100 g乳酸菌抑制酸性磷酸酶（ACP）活性;饲料中添加乳酸菌对过氧化氢酶（CAT）和碱性磷酸酶（AKP）活性没有显著影响结果表明饲料中添加乳酸菌不影响方斑东风螺稚螺的生长性能和肌肉成分，添加量为1.2×107CFU/100 g时可一定程度上提高抗氧化活力，但较高的添加量对免疫功能会产生抑制作用。

Keys：方斑东风螺;乳酸菌;免疫乳酸菌是一类可发酵碳水化合物产大量乳酸的细菌，是动物和人类肠道中重要的生理性菌群之一，在自然界广泛分布绝大多数乳酸菌对动物和人无毒、无害、无副作用，且在动物肠道体内担负着重要的生理代谢功能[1]众多研究以及实践应用已表明将乳酸菌等有益菌制作成微生物制剂，应用到水产养殖中，具有增强水产动物机体免疫功能、提高抗病抗应激能力、促进生长等作用，且安全无毒、无污染、不产生抗药性，是抗生素的理想替代品之一乳酸菌作为饲料添加剂已应用到凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）、罗非鱼（GIFT Oreochromis niloticus）、草鱼（Cetenpharyngodon idellus）、石斑鱼（Epinephelus coioides）、刺参（Apostichopus japonicus）等水产动物中[2-6]，但在方斑东风螺饲料中的添加效果尚未见报道本研究探讨饲料中添加不同含量的乳酸菌对方斑东风螺的生长性能、肌肉组分以及非特异性免疫功能的影响，以期为乳酸菌在方斑东风螺饲料中的合理应用提供一定的科学依据1材料和方法1.1材料嗜酸乳酸菌（Lactobacillus acidophilus，细菌含量为6.0×108CFU/g）菌粉由中国热带农业科学研究院热带生物技术研究所提供。

1.2饲料配制本饲料是以鱼粉为主要的蛋白源，α-淀粉为主要糖源，鱼油为主要脂肪源配制试验所需要的基础饲料基础饲料组成及营养成分见表1不添加乳酸菌的基础饲料为对照组，在基础饲料中分别添乳酸菌1.2×107CFU/100 g、1.2×108CFU/100 g和1.2×109CFU/100 g配制3种试验组饲料各原料粉碎后过80目筛，然后按照配方称取原料，用饲料混合机混合均匀，再加入鱼油以及含有不同浓度枯草芽孢杆菌的水，混合揉成面团状软颗粒饲料，按照估算的日投喂量小份分装，置于-20 ℃冰箱保存，投喂前解冻至室温表1基础饲料的组成及营养水平原料鱼粉豆粕α-淀粉酵母粉血球蛋白粉多维a多矿b胆碱鱼油多糖预混料含量/%46182242220.53.30.2营养水平粗蛋白粗脂肪灰分含量/%42.7613.109.36注：a多维：维生素A 2500000IU，维生素B1 7 g，维生素B2 45 g，维生素B5 10 g，维生素C 80 g，维生素D 5 g，维生素E 50 g，肌醇 60 gb多矿：Ca 230 g，K 36 g，M g 9 g，Fe 8 g，Zn 30 g，Mn 2 g，Cu 1 g，Co 0.1 g，I 0.5 g， Se 0.04 g。

1.3养殖管理养殖试验于2014年6-8月在海南省琼海市长坡镇椰林村某方斑东风螺养殖场内进行方斑东风螺稚螺由该养殖场提供，选取同一批螺苗，暂养在30 cm×40 cm×35 cm规格的塑料箱中，用基础饲料驯养两周挑选活力好、规格相近的个体作为试验稚螺，随机分配至各组中，每组3个重复箱子底部铺上3～4 cm厚的沙子，海水进行过滤后用作试验用水，盐度30‰～31‰，水温27 ℃±2 ℃，流水养殖饲料日投喂量为螺重的4%～5%，并根据实际摄食情况进行调整，每天19：00投喂养殖周期为10周1.4样品采集与指标测定东风螺取样前禁食24 h，统计存活率（SR）后，称量终末体重（FBW），计算试验方斑东风螺的增重率（WGR）、特定生长率（SGR）和饲料系数（FC）东风螺放入液氮中速冻，运至实验室置于-80 ℃冰箱保存1.4.1生长性能增重率（weight gain rate，WGR，%）=100%×（螺终末平均体重-螺初始平均体重）/螺初始平均体重特定生长率（specific growth rate，SGR，%/d）=100%×（Ln螺终末平均体重-Ln螺初始平均体重）/饲养天数肉壳比 = 螺肉的质量（g）/螺壳的质量（g）存活率（survival rate，SR，%）=100×试验结束时螺的颗数/开始时螺的颗数脏体比（viscerosomic index，VSI，%）=100%×内脏团重（g）/螺体重（g）肥满度（condition factor，CF）=肉重（g）/螺体重（g）1.4.2饲料和肌肉营养组成用105 ℃烘箱干燥法测定饲料和螺肌肉的水分（GB/T6435-1986）;将烘干的饲料和螺肌肉组织粉碎，用凯氏定氮法测定饲料和螺肌肉的粗蛋白含量（GB/T6432-1994）;用索氏抽提法测定饲料和螺肌肉的粗脂肪含量（GB/T6433-1994）;采用550 ℃灼烧法测得灰分含量（GB/T6438-1992）。

1.4.3免疫酶活性每个重复各随机选取3只螺，每饲料组共9只，每只螺的组织单独测定在-80 ℃冰箱取出样品，待适当解冻后，于冰上解剖分离出肝胰脏，用4 ℃的生理盐水冲洗，用吸水纸将水吸干，准确称取组织重量，按重量体积比加入9倍的生理盐水制成10%的组织匀浆，4 ℃、2 500 r/min离心10 min，取上清液用于酶活测定组织匀浆粗提液蛋白质含量用考马斯亮蓝法测定超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性测定采用南京建成生物工程研究所的试剂盒进行1.5统计分析结果显示为平均值 ± 标准差（Mean ± SD），利用SPSS19.0对试验结果进行单因素方差分析（One-way ANOVA）， P<0.05确认为差异性显著2结果2.1乳酸菌对东风螺生长性能和肌肉组成的影响乳酸菌对生长性能影响的结果见表2经过70 d的试验养殖，方斑东风螺的增重率达到233%～246%，但与对照组相比，饲料中添加三个浓度乳酸菌对东风螺的增重率、特定生长率、肥满度、肉壳比、脏体比和存活率均没有显著影响（P>0.05）如表3所示，饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分均没有显著影响（P>0.05）。

表2饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺生长性能的影响乳酸菌浓度（CFU/100 g）01.2×1071.2×1081.2×109初始平均体重IBW/g0.64±0.010.62±0.000.62±0.010.62±0.01终末平均体重FBW/g2.15±0.042.06±0.102.11±0.052.14±0.06增重率WGR/%235.16±4.40ab232.81±14.77ab241.93±8.11ab246.30±7.39a特定生长率SGR/（%/d）1.73±0.03ab1.72±0.07ab1.76±0.04a1.78±0.03a肥满度CF0.38±0.03a0.35±0.02a0.34±0.04a0.39±0.05a肉壳比0.64±0.07a0.60±0.04a0.58±0.09a0.65±0.13a脏体比VSI/%8.31±0.68a8.76±0.71a7.87±1.20a8.99±2.00a存活率SR/%91.67±2.89a90.3±3.82a92.50±0.00a91.67±2.89a注：表中数据均为平均值±标准差表中同一行上标不同小写字母表示组间差异性显著（P<0.05）。

下表同表3饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺肌肉组成的影响（%）乳酸菌浓度（CFU/100 g）01.2×1071.2×1081.2×109水分 Moisture72.64±0.95a73.29±0.52a72.37±0.87a72.60±0.85a粗蛋白 CP62.81±1.54a63.67±1.97a63.54±2.12a63.23±2.35a粗脂肪 CL21.88±2.92a22.29±2.29a22.89±2.82a22.04±3.60a灰分 Ash7.79±1.03a7.56±0.21a7.67±0.72a8.08±0.79a2.2乳酸菌对东风螺免疫功能的影响结果如表4所示，与对照组相比，饲料中添加浓度为1.2×107CFU/100 g的乳酸菌使东风螺肝胰腺SOD活力提高9.5%（P<0.05）;添加浓度为1.2×108和1.2×109CFU/100 g时，SOD活力分别下降了10.3%和19.0%（P<0.05）;饲料中添加乳酸菌对CAT和AKP活力没有显著影响（P>0.05）;添加浓度为1.2×109CFU/100 g时，ACP活力下降37.5%（P<0.05）表4饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺免疫功能的影响乳酸菌浓度（CFU/100 g）01.2×1071.2×1081.2×109SOD（U/mg prot）74.82±4.39b81.91±1.46a67.09±0.48c60.57±0.92dCAT（U/mg prot）0.96±0.13a0.92±0.12a0.92±0.05a0.98±0.06aAKP（金氏单位/g prot）36.15±2.31a32.58±1.87a34.09±2.06a30.48±3.94aACP（金氏单位/g prot）27.92±1.62a31.36±1.21a26.43±1.67a17.45±0.60b3讨论乳酸菌是人和动物肠道非常重要的一类益生菌群，已被开发广泛应用于食品、医药、轻工业和畜牧业等领域。

乳酸菌在肠道中定植后，通过自身的生长、繁殖及代谢改善宿主的胃肠道环境，抑制病原菌的生长，提高宿主的免疫功能，具有很好防病治病作用;另一方面，乳酸菌分泌乳酸、产生多种消化菌和营养物质，提高宿主消化吸收能力，促进生长[7-8]乳酸菌是水产养殖中最为常用的微生态制剂之一，其在饲料中的添加效果因试验动物不同而有所差异添加10%的乳酸菌组凡纳滨对虾的增重率和特定生长率分别较对照组提高7.13%和4.23%，饵料系数降低了8.38%[4]乳酸菌添加量为106 CFU/g时，草鱼鱼种的增重率比对照组提高 26.47%[9]饲料中分别添加8×105、4×106、2×107、1.5×108 CFU/g 的嗜酸乳酸菌，对吉富罗非鱼增重率、特定生长率等生长指标的影响不显著[5]本研究中也发现饲料中添加乳酸菌对方斑东风螺的生长性能没有显著影响不同的研究得出差异的结果，可能与试验动物肠道特点、乳酸菌菌种特性、菌对试验动物肠道以及养殖环境的适应性等有关 以往的研究均显示，饲料添加乳酸菌对水产动物体组成没有显著性影响，如吉富罗非鱼[5]和凡纳滨对虾[10]本研究也得到一致的结果，乳酸菌对方斑东风螺肌肉可食用部分的组成没有显著影响。

以往的研究显示乳酸菌及其代谢物对病原菌有较好的抑制作用乳酸菌代谢物在酸性条件下对鳗弧菌的抑制效率在90%以上[11]，对副溶血。