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《过柱纯化》PPT课件.ppt

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  • 卖家[上传人]:新**
  • 文档编号:590930230
  • 上传时间:2024-09-16
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    • 6 6、电泳、割胶、纯化、电泳、割胶、纯化DNA 1、实验目的:(p140) 将所需要的DNA片段进行回收,纯化 (TaKaRa公司 凝胶回收试剂盒)2、实验原理: 实验操作实验操作1.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶 表面的液体此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶, 尽量减小凝胶体积,提高DNA回收率* 2.切碎胶块胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间,提 高DNA的回收率 3.称量胶块重量,计算胶块体积计算胶块体积时,以1 mg=1µl 进行计算4.向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer,DR-I Buffer的加量如下 表:5.均匀混合后75℃加热融化胶块(低熔点琼脂只需在45 ℃),间断 振荡混合,使胶块充分融化(约6~10分钟) *切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下,以防止DNA损伤 6.加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer,均匀混合7.将溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液 (可重复一次,提高DNA回收率)。

      8.将500 µl的Rinse A加入Spin Column中,12,000 rpm离心30s, 弃滤液 9.将700 µl的Rinse B加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒, 弃滤液 10.重复操作步骤9,然后12,000 rpm再离心1分钟 11.将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column 膜的中央处加入25 µl 的灭菌蒸馏水*,室温静置1分钟* 12. 12,000 rpm离心2分钟洗脱DNA把灭菌蒸馏水加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率 mark未纯化前未纯化前质粒质粒DNA 未纯化前未纯化前质粒质粒DNA未纯化前未纯化前PCR产物产物 。

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