分光光度计性能检查.ppt

哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学实验一实验一 可见分光光度计性能检查可见分光光度计性能检查刘丽燕刘丽燕哈医大公卫学院哈医大公卫学院哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学一、实验目的一、实验目的二、二、实验原理实验原理三、试剂与器材三、试剂与器材四、仪器的使用方法四、仪器的使用方法五、实验步骤五、实验步骤主要内容主要内容哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学1、掌握、掌握T6新悦新悦-可见分光光度计主要性能的检定方可见分光光度计主要性能的检定方 法和仪器的使用法和仪器的使用2、熟悉仪器的主要性能和技术指标熟悉仪器的主要性能和技术指标3、了解仪器的基本结构了解仪器的基本结构一、实验目的一、实验目的哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学紫外－可见分光光度法（紫外－可见分光光度法（ultraviolet-visible spectro-photometry, UVS）是根据物质的分子对紫外可）是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法成进行定性或定量及结构分析的方法Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。

定律是分光光度法定量分析依据 A=εb c可见光区可见光区400～～760nm紫外光区紫外光区200～～400nm二、实验原理二、实验原理哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学结构示意图：光源结构示意图：光源→→单色器单色器→→样品池样品池→→检测器检测器→→信号显示装置信号显示装置一、主要部件一、主要部件（一）光源：可见分光光度计（一）光源：可见分光光度计→→钨灯钨灯 λ=320-2500nm 紫外分光光度计紫外分光光度计→→氢灯，氘灯氢灯，氘灯λ=150-400nm（二）单色器：将光源连续光谱按波长顺序色散并选出所需单（二）单色器：将光源连续光谱按波长顺序色散并选出所需单 色光三）吸收池：普通玻璃和石英玻璃三）吸收池：普通玻璃和石英玻璃四）检测器：光信号变成电信号（光电管、光电倍增管）四）检测器：光信号变成电信号（光电管、光电倍增管）五）信号显示装置：将输出信号经处理转换成透光度或吸光（五）信号显示装置：将输出信号经处理转换成透光度或吸光 度再显示或记录下来。

度再显示或记录下来二、实验原理二、实验原理哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学1、试剂：氯化钴溶液、试剂：氯化钴溶液2、、6、、10mg/ml2、器材：、器材：T6新悦－可见分光光度计新悦－可见分光光度计 玻璃吸收池；玻璃吸收池；100ml烧杯；烧杯； 镜头纸；滤纸；一次性吸管镜头纸；滤纸；一次性吸管三、试剂与器材三、试剂与器材哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学四、仪器的使用方法四、仪器的使用方法1、开机：打开电源，仪器初始化，约、开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成 预热预热1h2、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入吸光度测量界面如果要进行透光度或定量测入吸光度测量界面如果要进行透光度或定量测量，可以按量，可以按MODE键进行切换键进行切换※※哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学3、设置测量波长：、设置测量波长：在测量界面下，按在测量界面下，按GOTO λ键键 在数字在数字键盘上键入波长数值键盘上键入波长数值 按按ENTER键键4、设置吸收池模式和个数：、设置吸收池模式和个数：按按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。

键，切换至系统应用界面1）按上翻键，设置吸收池类型：）按上翻键，设置吸收池类型：1CELL——固定池，只有一个吸收池可用于测量固定池，只有一个吸收池可用于测量5CELL——五联池，最多有五个吸收池可用于测量五联池，最多有五个吸收池可用于测量8CELL——八联池，最多有八个吸收池可用于测量八联池，最多有八个吸收池可用于测量哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学（（2）按下翻键，设置吸收池个数按下翻键，设置吸收池个数例如：如果实验需要例如：如果实验需要6个吸收池进行测量，个吸收池进行测量，那么吸收池类型应设置为那么吸收池类型应设置为8CELL，吸收池个数，吸收池个数设为设为6注意：注意：1、设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的、设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳大，容易使检测器疲劳2、、设置吸收池个数的正确操作是按下翻键进行选择，设置吸收池个数的正确操作是按下翻键进行选择，而非在数字键盘上键入。

如键入而非在数字键盘上键入如键入2 2，钨灯将被关掉钨灯将被关掉哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学5、自动校零：、自动校零：按按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面键，切换到测量界面在在1号吸收池中放入空白溶液，按号吸收池中放入空白溶液，按ZERO键进行空白校正键进行空白校正注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正要再次进行空白校正哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学6 6、测量样品：从、测量样品：从2 2号吸收池开始，号吸收池开始，依次放入样品，按依次放入样品，按STARTSTART键，仪器测量键，仪器测量全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值7 7、打印结果：在已连接打印机的情况下，按、打印结果：在已连接打印机的情况下，按PRINTPRINT键打印数据。

键打印数据8 8、结束测量：按、结束测量：按SHIFT/RETURNSHIFT/RETURN键，从读数界面返键，从读数界面返回测量界面，关闭电源回测量界面，关闭电源注意：关电源后，系统中存储的数据结果将丢失注意：关电源后，系统中存储的数据结果将丢失哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学 测量全部完成后，切换到测量界面，然后关闭测量全部完成后，切换到测量界面，然后关闭仪器电源仪器电源 用蒸馏水清洗吸收池，倒扣于滤纸上晾干；如用蒸馏水清洗吸收池，倒扣于滤纸上晾干；如果吸收池污染严重，冲洗后置于果吸收池污染严重，冲洗后置于7070％～％～8080％的酒％的酒精中浸泡精中浸泡 将用过的仪器、试剂等放回原位将用过的仪器、试剂等放回原位哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学五、实验步骤五、实验步骤1 1、仪器外观检查、仪器外观检查2 2、稳定度检测、稳定度检测3 3、波长准确度（校正）与波长重复性、波长准确度（校正）与波长重复性4 4、线性误差检查、线性误差检查5、透光度重现性检定、透光度重现性检定6、杂散辐射率、杂散辐射率7、吸收池的配套性检定、吸收池的配套性检定哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学1 1、仪器外观检查、仪器外观检查 2 2、稳定度检测、稳定度检测 零点零点稳定度稳定度：波长设置：波长设置500nm，将吸收池推杆推，将吸收池推杆推 至最顶端，至最顶端，按按““zero”键，调节键，调节吸光度为吸光度为0 0，，观察观察3min，记录读数。

示值，记录读数示值的最大漂移量，即为零点稳定度的最大漂移量，即为零点稳定度 技术指标：技术指标： 0.002 /3min四、实验步骤四、实验步骤哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学3 3、波长准确度（校正）与波长重复性：、波长准确度（校正）与波长重复性：（（1 1）波长准确度（校正））波长准确度（校正）系统自动检测内置镨钕玻璃片的系统自动检测内置镨钕玻璃片的特征波长，时间大约特征波长，时间大约1min1min检测完成后，系统显示实测波长值检测完成后，系统显示实测波长值ΔλΔλ= =λλ示示- -λλ808 ＞＞1nm时，按时，按enter键校正，键校正，ΔλΔλ= =λλ示示- -λλ808＜＜1nm时，不需波长校正，按时，不需波长校正，按▼键，键，再按再按enter，系统返回系统应用界面系统返回系统应用界面 开机，预热开机，预热按按SHIFT/RETURN按数字键按数字键9哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学（（2 2）波长）波长重现性检定重现性检定 以蒸馏水为参比，以蒸馏水为参比，测定测定CoCl2溶液溶液(6mg/ml)在在510nm处的处的吸光度吸光度（英文缩写为（英文缩写为A或或ABS）。

逐一作）逐一作3次次测量，记录吸光度值代入公式计算波长重复性测量，记录吸光度值代入公式计算波长重复性,并绘制波长并绘制波长吸收曲线吸收曲线结果分析：重现性应小于结果分析：重现性应小于δλ注意：注意：①①吸收池不得有气泡吸收池不得有气泡②②倒溶液至三分之二处即可倒溶液至三分之二处即可哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学4、线性误差检查：、线性误差检查：测量界面测量界面1）设置波长键：）设置波长键： λ=510nm（（2）设置吸收池个数：）设置吸收池个数：（（3）空白校正：）空白校正：（（4）测量：将）测量：将2、、6、、10mg/ml的的CoCl2溶液溶液分别倒入分别倒入2、、3、、4号吸收池中，按号吸收池中，按START键键开始测量，记录吸光度读数测量三次开始测量，记录吸光度读数测量三次哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学计算并分析结果：计算并分析结果：线性误差计算公式：线性误差计算公式：结果分析：结果分析：吸光度值范围吸光度值范围允许线性允许线性误差误差0.1～～0.36％％0.3～～0.63％％0.6～～0.84％％哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学5、透光度重现性检定、透光度重现性检定 以蒸馏水为参比，测定以蒸馏水为参比，测定6mg/mlCoCl2510nm处处的的透光度透光度（英文缩写（英文缩写T），分别测定），分别测定3次，记录读次，记录读数。

数结果分析：重现性应小于结果分析：重现性应小于％％哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学6、杂散辐射率、杂散辐射率 以蒸馏水为参比，测定以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2在在 360nm处的处的透光度透光度，即为仪器在此波长处的杂，即为仪器在此波长处的杂散辐射率散辐射率 技术指标技术指标：： 杂散辐射率杂散辐射率≤％％哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学7、吸收池的配套性检定、吸收池的配套性检定检查方法：检查方法：700nm分别测定蒸馏水透光度，空气分别测定蒸馏水透光度，空气调零，其中最大读数与最小读数之差，应不超过规调零，其中最大读数与最小读数之差，应不超过规定值 ≤±0.5%哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学注意事项1、吸收池为光学玻璃制造，其透光面不能与硬物接、吸收池为光学玻璃制造，其透光面不能与硬物接 触，也不得用手触摸，池外溶液只能用擦镜纸将触，也不得用手触摸，池外溶液只能用擦镜纸将 毛面摺里面，沾去溶液或顺一个方向轻拭，不允毛面摺里面，沾去溶液或顺一个方向轻拭，不允 许用力来回擦试，以免有灰尘磨损透光面测定许用力来回擦试，以免有灰尘磨损透光面。

测定 时透光面上不得留有水珠或纤维时透光面上不得留有水珠或纤维2、不同型号的仪器其技术指标要求会有一定的差别不同型号的仪器其技术指标要求会有一定的差别哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学预习预习实验二实验二 荧光分析法测定尿中维生素荧光分析法测定尿中维生素B2的含量的含量预习重点：预习重点：1、方法原理、方法原理 2、标准曲线、标准曲线。