实验2样品中化学成分系统预试和单项预试.docx

实验2植物体中化学成分的单项预试与系统预试一、 实验目的与要求1. 学习和掌握预试的程序和方法，并对预试结果能正确地进行初步判断2. 通过预试初步了解植物中化学成分，有利于正确设计某种成分的提取分离方案二、 基本原理植物体小所含的化学成分很多，在提取分离Z前，一般先进行预试,初步了解其中可能含 有的各类成分，有利于正确设计提収分离方案为了全面了解各类成分在植物体中的存在状 况（如资源植物化学成分调查），可进行系统预试有时根据实际需要对进行单项预试如为 了寻找馆体激素原料，就可只进行馆体皂甘及其昔元的定性反应在实践中一些植物材料如 中草药等可能己被制成一定制剂，则可根据制剂方法选择性地进行某些成分的预试,如用水 蒸汽蒸谓法制成的有效制剂,可主要进行挥发油、内酯成分预试；用水煎酒梢沉淀法所制成 的制剂，町不必再进行蛋白质、多糖成分的预试在预试实验中，-•般利用各类成分的化学特征反应现象来鉴别实验现象包括颜色动态 变化、沉淀反应、放出气体反应快慢等，可使用试管法试验来进行，也可采用层析法（PC、 TLC）在分离的基础上进行反应前者样品用量稍人，简单易行，反应明显，不需特殊设备，但 反应现彖冇时不易观察准确。

后者方法简便，快速、用量少，比较灵敏；rti于多种定性试剂都有例外情况，植物化学成分的复杂性和相互干扰,提取液颜色深，使 显色反应不易观察，以及检测方法的灵敏性等问题，因此往往根据初步预试结果完全肯定或 否定某种成分的存在与否是不全面的三、 仪器与试剂1. 仪器：试铮滤纸简易水蒸汽蒸锚装置〔冷凝器、蒸憎烧瓶、接收器），分液漏斗，锥形瓶, 水浴锅，紫外灯，阿贝折光仪，载玻片，硅胶薄层，培养皿2. 试样与试剂：乙醇，乙醯，甲醇，改良碘化钮钾试剂,4%NaOH乙醇,2% 3, 5-二硝基苯甲 酸乙醇液，1%醋酸镁甲醇，1%A1C4溶液，3%FeCl3乙醇液，5%K0H溶液，5%氢氧化鞍，5%磷 钳酸乙醇溶液（新配制）,异创亏酸铁试剂（包括I、11、III）,邻苯二甲酸-苯胺试剂，1%氯 化诙溶液，1%铁氧化钾水溶液，1%甲基红乙醇溶液，0.1%甲基橙水溶液，0.05%漠酚蓝乙醇 液，0.2%即三酮溶液,3%碳酸钠,新制重氮化试剂,10%NaCL, 10%白明胶,澳水,新制石灰 水，酷酸，酷酸铅，盐酸，碘化汞钾试液，硅鸭酸试剂，新制碱性洒石酸铜试剂，10%HCl, 5%a-蔡酚乙醇溶液，2%红血球悬浮液，1.8%NqC1水溶液，醋阡，氯仿，浓硫酸，5%氢氯化 钠溶液，5%盐酸溶液，三氯化锤的氯仿饱和溶液，浓盐酸，镁粉，醋酸铅（饱和）溶液，1% 醋酸镁甲醇溶液，碱性苦味酸试液，NaOH饱和乙醇液，0.5%硫酸铜溶液，5%硫酸，无水硫 酸钠四、 实验内容与步骤1.预试样液制备记录待预试植物材料的来源、收集吋间、生境状况、待检测部位、有关学名及特征（如 色泽、气味等），将预试材料研成粗粉过20目筛（如为新鲜样品，愆吋高温使臨失活（105C /1-2 min）后在 50-60C烘 48h）。

1）水浸液：収待试植物粗粉2g,加入20 mL水,室温浸泡过夜，滤取10 mL滤液供检试氨基酸、多肽 和蛋白质等,余液及残渣在50-60C水浴上温浸0.5h抽滤，滤液供检试单糖、多糖、皂苜、 芹类、酚类、有机酸、糅质等成分也可用水预先润湿lh后，在超声波条件下促提2次， 每次10血,振荡0. 5ho⑵乙醇提取液：取植物粗粉5g,加95%乙醇约50 mL,水浴上回流15 min,过滤滤液浓缩至1/2, —部分供 检测黄酮、蔥醞、香豆素、强心廿、讷类、内酯、幽体化合物等项预试一部分继续浓缩至 糖浆状物以2%HC1 10汕溶解成酸液，供检试酚类、冇机酸、生物碱等⑶乙讎提取液：对于植物色索较多的材料若进行挥发油及脂类检试，可进行如此处理取粗粉5g,加乙 瞇50 mL,水浴回流20 min,过滤，滤液浓缩至5 mL,供圆形滤纸层析法检查内酯、汕脂、游 离香豆素、游离黄酮、游离蔥服和挥发油⑸甲醇提取液：乙瞇处理过的材料,用甲醇20讥水浴回流10 min趁热过滤，供检测黄酮营、恿:醞昔、 强心甘和香豆精昔等2. 圆形滤纸层析法预试（根据具体情况采用乙醇提取液、水提取液或乙醯提取液）取直径12cm的圆形层析滤纸一张，在距中心l-2cm处用毛细管绕中心圆周等分点8-10 个样点，样点直径人小为3 rnni左右,溶剂挥T•后，在滤纸中心穿一纸芯,在盛有展开剂的培养 皿中进行层析，上面覆盖一只同样大小的培养皿。

展开后，取出滤纸，待溶剂挥干后将滤纸沿 虚线剪开，各喷以不同显色剂，检测各类成分的存在与否展开剂为甲醇,95%乙醇或甲苯等⑴挥发汕的检查首先观察滤纸上有无油迹样斑点，加温烘烤时若油迹消失,证明有挥发油，若未消失，需 用试管法进一步确证为进一步检查，可用石油瞇：乙酸乙酯（95 : 5）展开乙瞇提取液，喷以新配制5%香兰醛 浓硫酸溶液，如在斑点上出现黄色、棕色、红色或兰色反应，表明含有挥发汕⑵生物碱检查显色剂:改良碘化钮钾试剂:橙色、棕红色斑点为正反应⑶强心昔检查显色剂:先喷以2% 3, 5-二硝基苯甲酸乙醇溶液,再喷以4%NaOH乙醇溶液，紫红色斑点 为正反应⑷黄酗及背类检查先在紫外灯下观察荧光,再喷以1%A1CL溶液观察荧光是否加强，如原显黄色、黄绿色斑 点,反应后，荧光显著加强为正反应亦可将醇提取液（乙醇或甲醇）点于滤纸上进行以下试验：a. 在一点上点加1%酬酸镁甲醇溶液，烘干，紫外灯下观察，二氢黄酮町显兰色荧光，其它 黄酮类呈黄色荧光b. 另一点以氨薰蒸，出现黄色、棕黄色萤光斑点（与氨接触呈黄色或黄色加深，取离后数 分钟，黄色消褪或变浅），为正反应c. 喷以3%FeCl3乙醇液出现绿、兰、棕色斑点，为正反应。

⑸蔥醞及其廿类检查显色：a・于口然光下观察色带，然后在紫外灯下观察荧光坏b.氨薰:观察是否出现红色 环,再置紫外灯下观察荧光环c.喷5%K0H溶液或5%氢氧化馁溶液或1%醋酸镁甲醇液，如经 90C烘烤5分钟后显橙黄、橙红、紫红色班点或色环为正反应⑹备体类及诂类化合物检杏5%磷钳酸乙醇溶液（新配制）喷后120C烘5分钟若显兰-兰紫色为疋反应（需用试管法进 一步确证）皂廿、生物碱及其它述原性物质也呈正反应⑺酯类、内酯、香豆素及其昔的检查使用异拜岳酸铁试剂（包括I、II、III）时先将I与II按1： 2比例混合过滤后,滤液作 为显色剂，喷后烘干再喷以III,最后在80C烘2分钟，若显兰-紫色斑点为正反应亦可点样于滤纸片上，紫外灯下呈天兰色荧光,氨薰示荧光增强或颜色改变，表示有香豆⑻还原糖的检查用邻苯二甲酸-苯胺试剂显色104C烘5分钟,显红-棕色斑点为正反应⑼酚性成分检查1%氯化铁溶液与1%铁氤化钾水溶液等量混合，喷后显兰-紫斑点为正反丿讥（10） 有机酸的检查a. pH试纸检杳:水提液和醇提液，若显酸性,可能含有游离冇机酸或酚性成分b. 混合指示剂检查：1%甲基红乙醇溶液5 mL, 0. 1%甲基橙水溶液15 mL及0. 1%石蕊水溶 液20 mL混合均匀示使用，喷示样点显黄-红色斑点正反应。

亦可用0. 05%》臭酚蓝乙醇液喷雾, 在兰色背景上有黄色斑点即为正反应11） 氨基酸检查0.2%前三酮溶液喷后，于80C烘10分钟,显红、兰、紫色斑点为正反应,亦有少数氨基 酸呈黄色斑点（们胺亦会呈类似颜色）O3. 试管预试法（根据情形选择水提取液，酸性乙醇提取液或甲醇提取液）（1）酚性成分的检试a. 三氯化铁试验:取酸性乙醇捉取液1 mL于试管中加入1-2滴l%FeCls醇溶液，若显绿、 兰绿或暗紫色为正反应b. 重氮化试验:取酸性乙醇提取液1 mL,加入1讥3%碳酸钠溶液,沸水浴中加热3分钟， 冷却后加入新制重氮化试剂1-2滴显红色为正反应为进一步确定为一般酚性成分还是糅质,可利用糅质与牛物碱或明胶能产牛沉淀的性质, 去除糅质后再进行试验⑵糅质检试a. 三氯化铁试验:吸収热水提取液1讥，同上法Q）检试b・氯化钠白明胶试验:吸取热水提取液1汕,加入氯化钠白明胶试剂（10%NaCL+10%白明 胶）1-2滴,如有混浊或白色沉淀出现即为正反应c. 生物碱反应:水提取液1 mL,滴加0. 1%咖啡碱水溶液产生沉淀即为正反应试验b、c两项可用来鉴別糅质•伪革柔质，如果耍鉴別nJ水解糅质与缩合糅质nJ继续以下 试验。

d. 混水反应:水提取液2 mL加入滉水数滴，对水解糅质不产生沉淀反应，缩合糅质产生沉 淀e. 石灰水反应:水提取液2 mL加入新制石灰水数滴，可水解糅质呈青灰色沉淀，缩合糅质 产生棕色或红棕色沉淀f. 醋酸铅反应:水提取液2 mL分别加醋酸数滴，摇匀后再滴加酷酸铅溶液数滴，可水解糅 质产生絮状沉淀，缩合糅质无沉淀产生g. 糅红试验:取2 mL,加盐酸0. 5 mL,加热煮沸30 min,冷却,可水解糅质不发生沉淀，缩 合革柔质有红色沉淀发生⑶生物碱的检试取10 mL酸性乙醇提取液，用5%NHQH调至中性，水浴上蒸干，加3 mL 5%硫酸溶液溶解残 渣,过滤后，滤液作如下检杏：a. 碘化钮钾试验：1 mL滤液加碘化钮钾试液1-2滴,如生成浅黄色一枯红色沉淀为正反 应b. 碘化汞钾试验:1 mL滤液加碘化汞钾试液1-2滴,如有白色或浅黄色沉淀生成即为正 反应c. 硅钩酸试验:滤液1 mL,加硅钙酸试剂1-2滴，如有浅黄色或白色沉淀即为正反应d. 碘化碘钾试验:滤液1 mL,滴加碘化碘钾试剂2滴,产生棕色沉淀即为正反应若大多试剂或全部为止反应，即表示样品中可能有生物碱⑷糖、多糖及廿类成分检试a. 碱性酒石酸铜试验:取热水提取液1 mL,加入新制碱性酒石酸铜试剂4-5滴，沸水浴中 加热5分钟，若有砖红或棕红色Cu20沉淀，表明具有还原性糖存在。

若为负反应，可进一步检查取热水提取液1 mL,加10%HCl ImL,沸水浴中加热10分钟， 使之水解，冷却后调pH至中性，按上法检杏，呈正反应，即表明含有多糖或廿类若沉淀显黄 色，预示其小可能含有胶性成分对井类可用其它方法进一步预试b. Q -蔡酚试验:取1汕热水提収液，加入5%「蔡酚乙醉溶液2-3滴,摇匀，沿管壁缓缓 加入0. 5 mL浓Il2S04,交界面如很快出现紫红色环，即含有糖类、多糖或仟类，此反应很灵敏， 在过滤时注意不可引入纤维或植物材料粉末，否则会干扰结果⑸皂昔的检试乩泡沫试验:取热水提取液2 mL（若为酸性需调节至弱碱性）加塞用力振摇一分钟，若产 生多最蜂駕状泡沫，放置10分钟，亦未见减少，表明含有皂廿b. 溶血试验:一支试管加入蒸镉水0. 5 mL,另一支加热水提取液0. 5 mL;再分别加入0. 5 mL 1. 8%NaCl水溶液，振摇示加入1汕2%红血球悬浮液，摇匀，观察溶血现象c. 醋酊浓硫酸试验:取水提取液5 mL,在水浴上蒸干，加入1 mL醋酊使其溶解，滴于T•燥 试管中，沿管壁缓缓滴入浓硫酸,观察颜色变化，界面是否有紫色环产生？d. 氯仿-浓硫酸试验:取水提取液2 mL在水浴上蒸干，用氯仿1 mL溶解，转入干燥小试管 中，沿壁小心滴入1 mL浓出S 04 o若氯仿层显红或兰色，硫酸层有绿色荧光，示有信体皂昔。

进一步试验可用2支试管各加水提取液1 mb, 一支加入2 mL 5%氢氯化钠溶液，另一支加 入2 mL 5%盐酸溶液，塞紧后用力振摇一分钟，若二管泡沫高度和仿，为三祜皂芹，若碱液管泡 沫高数倍则表明含有當体皂甘⑹辎体植物辎醇）、粘类成分检试a. 冰醋酸-浓硫酸试验：乙醇提取液1 mL,水浴上蒸T后用1 mL冰醋酸溶解。