质粒DNA的提取PPT课件.ppt

质粒质粒DNA的提取的提取小组成员：卜斌、王桂平、陈茜 柳文祥、王宣高 基本原理基本原理：1.掌握碱裂解法提取质粒的原理2.了解实验中所使用的试剂的作用技术操作技术操作: 1.碱裂解法抽提大肠杆菌质粒DNA 什么是质粒（plasmid）？က 质粒是染色体外的稳定遗传因子က 大小1-200Kbက 双链、闭环、超螺旋DNAက 主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中က 自主复制和转录，并表达所携带的遗传信息碱裂解法抽提质粒DNA基本原理： 利用质粒DNA与染色体DNA在变性与复性中的差异实现质粒的分离染色体DNA与质粒DNA 双螺旋结构解开 氢键断裂，保持双螺旋 沉淀物可溶状态大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质 上清中的质粒 质粒DNA 酚氯仿抽提 NaOH和SDS溶液裂解变性 加入中和液 迅速复性在高盐浓度下，染色体DNA交联形成不溶性网状结构并与蛋白质-SDS复合物等形成沉淀 溶液Ⅰ：葡萄糖（50mmol/L）；Tris·HCl（ 25mmol/L， ） 低浓度的葡萄糖溶液使细胞处于低渗状态而细胞澎胀； 葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，减少抽提过程中的机械剪切作用，防止破坏DNA。

EDTA的作用是螯合掉Mg2+、Ca2+等二价金属离子，防止DNA酶对质粒分子的降解作用 Tris•Cl能使溶菌液维持溶菌作用的最适PH范围溶液Ⅱ： NaOH （） ；SDS （ 1%，新鲜配制）溶液II：SDS的作用：破坏细胞膜；解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变性NaOH(pH>12)的作用：破坏氢键，使DNA分子变性溶液Ⅲ： 60ml的5mol/L KAC ； 的冰醋酸； 水溶液III：由KAc与HAc组成，是pH值为的高盐溶液能中和溶液II的碱性，使DNA复性K+离子会与SDS形成溶解度很低的盐并与蛋白质形成沉淀而除去溶液中的染色体DNA也会与蛋白质-SDS形成相互缠绕的大分子物质，很容易与小分子的质粒DNA分离。