四乙酰葛根素在模拟人体胃肠环境中的稳定性研究.doc

1四乙酰葛根素在模拟人体胃肠环境中的 稳定性研究作者：陈国庆，张毅，翁代群，周志，杜洪飞，胡人月，杨鲁，杨大坚【摘要】 目的考察四乙酰葛根素(4ac)在模拟人胃肠环境的稳定性方法采用高效液相色谱法测定 4ac 的降解剩余百分含量结果 4ac 在 0.062 5～1.0 mg/ml 浓度范围内线性良好，平均回收率为 101.05%(RSD=1.59%)人工肠液(加酶和不加酶)中，4ac 在室温 25℃和 37℃时较稳定;人工胃液(加酶和不加酶)中，4ac 在室温25℃和 37℃时不稳定，半衰期分别为 18.99，9.76，13.33 h 和 8.22 h结论 4ac 在人工肠液中稳定性较好，可开发肠溶制剂 【关键词】 四乙酰葛根素; 稳定性; 人工胃液; 人工肠液; 高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTo study the stability of tetraacetyl-puerarin(4ac) in artificial gastric juice and intestinal juice. MethodsThe degrading content of 4ac was determined by HPLC.ResultsThe linear range of 4ac was good between 0.062 5 and 1.0mg/ml, recovery was 101.05% (RSD=1.59%). 4ac was stable in artificial intestinal juice (including with enzyme) at 25℃ and 37℃. T1/2 of 4ac was 18.99,9.76,13.33 h and 8.22 h in artificial gastric juice (including with enzyme) at 25℃ and 37℃.ConclusionIt is stable in artificial intestinal juice and can be developed enteric preparation.Key words： Tetraacetyl-puerarin; Stability; Artificial gastric juice ; Artificial intestinal juice ; HPLC葛根素是葛根心脑血管活性的主要物质基础[1，2]，临床上常用于治疗冠心病、心绞痛及脑血栓等疾病[3，4]。

实验证明，犬口服葛根素的生物利用度低，其绝对生物利用度约为 3%，大部分葛根素以原形从粪便中排出为了提高葛根素的生物利用度，通过乙酰化的方法对葛根素糖基上的羟基进行修饰，制成了四乙酰葛根素(Tetraacetyl-puerarin，2',3',4',6'-四乙酰基葛根素，4ac)，其脂溶性和表观油/水分2配系数比葛根素大，生物利用度得到提高，在改善心脑血管疾病方面明显优于葛根素，是治疗心脑血管疾病的新药物[5～7]本实验旨在采用高效液相色谱法，测定葛根素衍生物 4ac 在人工胃肠液中的稳定性，为 4ac 的进一步研究打下基础1 仪器与材料1.1 仪器 Aglient 1200SL 高效液相色谱仪，紫外检测器;数控恒温水浴(北京康林科技有限责任公司)，FE20/EL20 pH 计(METTLER TOLEDO 公司)1.2 试剂四乙酰葛根素由重庆市中药研究院自制，经 HPLC 法测定含量均在98% 以上;胃蛋白酶(北京鼎国生物技术有限公司)，胰蛋白酶(重庆惠而利生化试剂中心);乙腈为 HPLC 级，其它试剂为分析纯，水为去离子水2 方法与结果2.1 人工胃肠液的配制参照相关文献[8]，分别配制人工胃液、人工肠液、含酶人工胃液(含胃蛋白酶)和含酶人工肠液(含胰蛋白酶)，备用。

2.2 色谱条件色谱柱为 Eclipse XDB-C18(50 mm ×4.6 mm，1.8 μm)，流动相为乙腈-水(40∶60)，进样量为 2 μl，流速为 0.8 ml·min-1，柱温为 25℃，检测波长为250 nm 2.3 标准曲线的绘制 精密称取干燥恒重的 4ac 标准品，用乙腈溶解成浓度为 2.5 mg/ml 的储备液，然后分别加水稀释为含 4ac 浓度为1.0，0.5，0.25，0.125，0.062 5 mg/ml 的标准液，分别进入液相色谱仪，记录峰面积以 4ac 浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，其回归方程为 A=7 292.5C+56.193(r=0.999 9)，在 0.062 5～1.0 mg/ml 范围内线性关系良好由于回归3方程中 b/a100，因此采用外标一点法定量2.4 回收率试验精密吸取已知含量的供试品溶液适量，分别加入高、中、低梯度浓度的 4ac 对照品溶液适量，按“2.2”项下色谱条件进样测定，并计算回收率结果见表 1表 1 回收率试验结果加入量 C/mg·ml-1 平均测得量 C/mg·ml-1 回收率(%)平均值(%)2.5 精密度实验取配置好的 0.25 mg/ml 的 4ac 标准溶液，分别于同日连续测定 5 次，及 5 d 内连续测定 5 次(1 次/d)，分别计算日内、日间精密度。

结果，日内RSD=0.147%，日间 RSD=0.107%2.6 4ac 在人工胃肠液中稳定性试验精密吸取 4ac 储备液 0.5 ml，分别用人工胃液、人工肠液、含酶人工胃液和含酶人工肠液稀释至 5 ml，再分别置于常温25℃和 37℃恒温水浴中，于设计的不同时间点取出，用 0.45 μm 滤膜过滤后进样测定，每组平行测定 3 个样品HPLC 法测定 4ac 在人工胃肠中的浓度变化情况见图 1～22.7 4ac 在不同人工胃肠环境中降解参数从图 1～2 可知：在体外模拟人体肠环境中 4ac 较稳定，基本不发生降解，不同环境各取样点平均剩余含量见表 2;在体外模拟人体胃环境中，从变化曲线表明 4ac 不稳定，随时间延长其 4ac 含量逐渐减少，经零级或一级速率方程模拟，表明 4ac 的降解过程属于表观一级反应方程结果见表 31 4ac 在人工加酶胃肠液的含量变化曲线3 讨论通过本次稳定性试验表明，4ac 在人工肠液中具有很好的稳定性，而在人工胃4液中则很快发生降解，且随温度升高其降解率增加当酶存在的情况下，4ac 在人工肠液中依然具有很好的稳定性，在人工胃液中虽然降解率也随温度升高而增加，但降解速率却比不含胃蛋白酶的人工胃液要低，这说明胃蛋白酶有一定的抑制4ac 降解的作用。

图 2 4ac 在人工胃肠液的含量变化曲线表 2 人工肠液中四乙酰葛根素含量变化参数计算表样品名称平均剩余含量(%)RSD(%) 表 3 人工胃液中四乙酰葛根素含量变化参数计算表样品名称一级速率方程相关系数药物的稳定性是关系药品质量的重要内容，尤其是口服后药物在胃、肠道中的稳定性，将直接影响药物在胃、肠道吸收入血前的有效性相关研究表明，4ac 在进入血液后会发生水解，脱去乙酰基生成葛根素[9]进行制剂学方面研究时，可采用口服给药系统，为提高 4ac 的生物利用度选择通过肠道释放药物，避免 4ac在胃中很快降解还原成葛根素，从而降低了药物生物利用度参考文献】[1] 高秀荣. 葛根素注射液改善冠心病微循环的临床观察[J]. 中国微循环，2002，6(4)：216.[2] 许旭伟. 葛根素对新生大鼠脑细胞内钙超载的影响[J]. 中西医结合心脑血管病杂志，2003，1(2)：74.[3] 祝 星. 葛根素对冠心病患者心肌缺血的疗效[J]. 第二军医大学学报，2003，24(3)：343.[4] 邓晓尧. 葛根素治疗不稳定型心绞痛疗效观察[J]. 海南医学，2003，14(1)：14.5[5] 郭东艳，杨大坚，陈士林. 葛根素及其衍生物在大鼠体内的药代动力学研究[J]. 陕西中医学院学报，2008，31(1)：52.[6] 郭东艳，杨大坚，陈士林. 葛根素及其衍生物对实验性 SD 大鼠急性血瘀症血液流变学的影响[J]. 辽宁中医杂志，2006，33(10)：1363.[7] 郭东艳，宋浩亮，陈士林. 葛根素及其衍生物抗心肌缺血心律失常的实验研究[J]. 辽宁中医药大学学报，2006，8(5)：45.[8] 庄 越，曹宝成，萧瑞祥. 实用药物制剂技术[M]. 北京：人民卫生出版社，1999：275.[9] 郭东艳，陈士林，杨大坚. 葛根素衍生物 4ac 混悬液及其纳米粒在 Beagle犬体内的药代动力学研究[J]. 时珍国医国药，2009，20(1)：197.。