实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完课件.ppt

实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完1实验实验四四食品中细菌总数及大肠菌群的检测食品中细菌总数及大肠菌群的检测食品微生物学基础实验食品微生物学基础实验实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完2一、目的要求一、目的要求1 1、掌握食品中微生物学基本指标的检测、掌握食品中微生物学基本指标的检测方法了解食品质量与细菌和大肠菌群数方法了解食品质量与细菌和大肠菌群数量的重要关系量的重要关系2 2、通过实验，初步掌握食品中污染的活、通过实验，初步掌握食品中污染的活细菌计数方法，以判别食品的卫生质量细菌计数方法，以判别食品的卫生质量实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完31 1、菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应、菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据行卫生学评价时提供依据 2 2、大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌、大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌由由肠杆菌科肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌属、艾希氏菌属、枸橼酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和肠杆菌属枸橼酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义二、实验原理二、实验原理实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完4 一、待测样品：一、待测样品： 奶粉还原液、豆腐等奶粉还原液、豆腐等 二、培养基二、培养基平板计数琼脂培养基、月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉汤（平板计数琼脂培养基、月桂基磺酸盐胰蛋白胨肉汤（LSTLST）、）、煌绿乳糖胆盐肉汤（煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLBBGLB））, 225m1, 225m1无菌生理盐水、无菌生理盐水、 9m19m1无无菌生理盐水、菌生理盐水、1mol/L1mol/L氢氧化钠、氢氧化钠、1mol/L1mol/L盐酸 三三、、无无菌菌培培养养皿皿、、革革兰兰氏氏染染色色液液、、移移液液器器、、枪枪头头、、培培养养箱箱、、水水浴浴锅锅、、电电子子天天平平、、电电炉炉、、玻玻璃璃珠珠（（直直径径为为5mm5mm））、、试试管管架架、、酒精灯、灭菌镊子、酒精灯、灭菌镊子、75%75%酒精棉球、玻璃蜡笔、不锈钢勺等酒精棉球、玻璃蜡笔、不锈钢勺等。

三、实验材料三、实验材料实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完5四、操作方法一、细菌总数一、细菌总数：： (1) (1) 以无菌操作将检样以无菌操作将检样2525克克( (或或25ml)25ml)放于装有放于装有225ml225ml灭菌生理盐水和玻璃珠的三灭菌生理盐水和玻璃珠的三角瓶中，充分振荡制作成角瓶中，充分振荡制作成1:101:10的均匀稀释液，样品的均匀稀释液，样品PHPH值应在值应在6.5-7.56.5-7.5之间，必之间，必要时用要时用1mol/L1mol/L氢氧化钠或氢氧化钠或1mol/L1mol/L盐酸调节盐酸调节( (固体食品需先用无菌均质器均质后固体食品需先用无菌均质器均质后再稀释再稀释) ) (2) (2) 用移液器，吸取用移液器，吸取1:101:10稀释液稀释液1ml1ml，注入含有，注入含有9ml9ml灭菌生理盐水的试管内，振灭菌生理盐水的试管内，振摇均匀，制成摇均匀，制成1:1001:100的稀释液的稀释液 (3) (3) 另取枪头，按上述操作进行另取枪头，按上述操作进行1010系列稀释成不同浓度的稀释液，如此每递增系列稀释成不同浓度的稀释液，如此每递增稀释一次，即换用稀释一次，即换用1 1支无菌枪头。

支无菌枪头 (4) (4) 根据对标本污染情况的估计，选择根据对标本污染情况的估计，选择2-32-3个稀释度，分别在作个稀释度，分别在作1010倍递增稀释的倍递增稀释的同时，即吸取该稀释度的稀释液同时，即吸取该稀释度的稀释液1ml1ml于灭菌培养平皿内，每个稀释度作两个平于灭菌培养平皿内，每个稀释度作两个平皿 (5) (5) 稀释液吸入平皿后，将融化并冷却至稀释液吸入平皿后，将融化并冷却至45℃45℃的平板计数琼脂培养基注入平皿的平板计数琼脂培养基注入平皿约约15ml15ml，并转动平皿使其混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有，并转动平皿使其混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml1ml灭菌灭菌生理盐水的灭菌平皿作空白对照生理盐水的灭菌平皿作空白对照 (6) (6) 待琼脂凝固后，翻转平板，置待琼脂凝固后，翻转平板，置36+1℃36+1℃恒温箱内培养恒温箱内培养4848 2 2小时后取出，计算小时后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克样品所含菌落总数平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克样品所含菌落总数实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完6菌落总数的检验程序菌落总数的检验程序检样25g(或25ml)样品＋225ml稀释液，均质10倍系列稀释选择2-3个样品匀液各取1ml,分别加入无菌培养皿内每皿加入15-20ml培养基摇匀36℃±1℃培养48±2h计算菌落数，报告实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完7梯度稀释实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完8操作方法操作方法二、大肠菌群检验二、大肠菌群检验：： 取样品及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成取样品及稀释方法与菌落总数检验方法相同，做成1:101:10的均匀稀的均匀稀释液为检样，取样量为释液为检样，取样量为1ml1ml及及0.1ml(0.1ml(相当于相当于1 1克及克及0.10.1克奶粉样品克奶粉样品) )各各3 3管。

管1 1．初发酵试验．初发酵试验　　 选择待测样品选择待测样品3 3个适宜稀释度接种于个适宜稀释度接种于LSTLST发酵管内，接种量在发酵管内，接种量在1ml1ml以上者，用双料以上者，用双料LSTLST发酵管；每一稀释度接种发酵管；每一稀释度接种3 3管，置管，置3636 1℃1℃温箱内，培养温箱内，培养2424 2 2小时，如所有发酵管都不产气，继续培养小时，如所有发酵管都不产气，继续培养2424 2 2小时，观察倒管内是否产气，如未产气可报告为大肠菌群小时，观察倒管内是否产气，如未产气可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则进行复发酵试验阴性；如有产气者，则进行复发酵试验 2 2．复发酵试验．复发酵试验 将所有产气的将所有产气的LSTLST发酵管分别转接在发酵管分别转接在BGLBBGLB肉汤管中，置肉汤管中，置3636 1℃1℃温箱内，培养温箱内，培养48h 48h  2 2 小时小时, ,然后取出，观察产气情况然后取出，观察产气情况产气者，计为大肠菌群阳性管产气者，计为大肠菌群阳性管 3 3．报告．报告 　　 根据复发酵试验的阳性管数，查大肠菌群最可能数根据复发酵试验的阳性管数，查大肠菌群最可能数(MPN)(MPN)检检索表。

得出每索表得出每1m1(g)1m1(g)食品中存在的大肠菌群数的近似值食品中存在的大肠菌群数的近似值实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完9检样25g或25ml＋225ml稀释液，均质10倍系列稀释，选三个适宜稀释度接种LST肉汤管36℃±1℃培养48±2h不产气产气接种BGLB肉汤36℃±1℃培养48±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表，报告LSTLST发酵管现象发酵管现象实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完101 1．影响杂菌总数准确性的因素有哪些？．影响杂菌总数准确性的因素有哪些？2 2．在食品卫生检验中为什么要选用大肠．在食品卫生检验中为什么要选用大肠菌群作为食品被污染的指标之一菌群作为食品被污染的指标之一? ?3 3．在细菌总数检测中做空白对照实验的．在细菌总数检测中做空白对照实验的目的是什么？目的是什么？五、思考题五、思考题实验四食品中细菌总数及大肠菌群的检测完11谢 谢。