常用培养基的配方531.pdf

’. 伊红美蓝培养基 原理 一般用来鉴定大肠杆菌 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落金葡菌在此培养基上不生长 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带 H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： ①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按 1：10 稀释 ③取 0.1 毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上用平板划线分离法进行分离 ④将划线后的培养皿倒置 37℃温箱中培养 18～24 小时培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽 ⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成） 配置方法 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至 900ml 蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至 1000ml，调整 PH 为 7.2~7.4。

趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以 115℃灭菌 20min，贮存于冷暗处备用 制法 ； ’. 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正 PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌 15min 备用临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至 50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板 麦康凯培养基 原理 1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基 2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色 配置方法 蛋白胨 17g 脙胨 3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 乳糖 10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL 麦康凯-制法 1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于 400mL 蒸馏水中，校正 pH7.2将琼脂加入 600mL加热溶解将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌 15min 备用 2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至 50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后 倾注平板 注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

吲哚试验 吲哚（indol）试验 有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质） ，经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性 LB 培养基 配方 胰化蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g 琼脂 1.5-2g 水 100ml LB 培养基-LB 培养基条件 LB 培养基-固态培养基 LB 固体培养基 1L 和液体一样，加 15g 琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板 LB 固体培养基倒板 1.配制：100mlLB 培养基加入 1.5g 琼脂粉 ； ’. 2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的 LB 固体培养基置与 55℃的水浴中，待培养基温度降到 55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀 3.倒板： 一般 10ml 倒 1 个板子 培养基倒入培养皿后， 打开盖子， 在紫外下照 10-15 分钟 4.保存：用封口胶封边，并倒置放于 4℃保存，一个月内使用 牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂） 配方 蛋白胨 10g；牛肉膏 3g ；氯化钠 5g；琼脂 15～20g；蒸馏水 1000mL； 制法 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入 15%氢氧化钠溶液约 2mL，校正 pH 至 7.2～7.4。

加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化分装烧瓶，121℃高压灭菌 15min 注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为 2% 甲基红试验 甲基红试验-化学属性 甲基红（Methyl Red）试验 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基 PH 值下降至 pH4.5 以下，使甲基红指示剂变红 甲基红试验-试验方法 挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于 36±1°C 或 30°C（以 30°C 较好）3~5 天，从第二天起，每日取培养液 1ml，加甲基红指示剂 1~2 滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色迄至发现阳性或至第 5 天仍为阴性、即可判定结果 甲基红为酸性指示剂，pH 范围为 4.4~6.0，其 pK 值为 5.0故在 pH5.0 以下，随酸度而增强黄色，在 pH5.0 以上，则随碱度而增强黄色，在 pH5.0 或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验 尿素酶 某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。

将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35℃孵育 18~24h，观察结果红色为阳性，不变为阴性主要用于肠杆菌科变形杆菌属、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定 明胶液化 明胶液化 gelaune liquefaction 指细菌把明胶胶分解成液状的现象 明胶液化-它的特征 这种能力可因细菌种类不同而有显著差异， 因此很早以来就被用来作为鉴别、 测定细菌的一种特征 明胶液化-适应范围 葡萄球菌属、变形菌属、芽孢杆菌属均具有液化能力，而大肠杆菌就无这种液化能力由于明胶是在热水中溶解胶原（collagen）而成的蛋白质，因此，它是由产生于体外的蛋白酶进行分解的用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象 ； ’. VP 试验 VP 试验-试验简介 [英] VP test 微生物检验中常用的生化反应之一 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸， 丙酮酸缩合， 脱羧成乙酰甲基甲醇， 后者在强碱环境下， 被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称 V－P（+）反应 VP 试验-试验方法 1）O’Meara 氏法：将试验菌接种于通用培养基，于 36±1°C 培养 48h，培养液 1ml 加 O’Meara 试剂（加有 0.3%肌酸 Creatine 或肌酸酐 Creatinine 的 40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管 1~2min，静置于室温或 36±1°C 恒温箱，若 4h 内不呈现伊红、即判定为阴性。

亦有主张在 48~50°C 水浴放置 2h 后判定结果者 2）Barritt 氏法：将试验菌接种于通用培养基，于 36±1°C 培养 4 天、培养液 2.5ml 先加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液 0.6ml,再加 40%氢氧化钾水溶液 0.2ml，摇动 2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或 36±1°C 恒温箱，如 2h 内仍不显现红色、可判定为阴性 3）快速法：将 0.5%肌酸溶液 2 滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环， 乳化接种于其中， 加入 5%α-萘酚 3 滴， 40%氢氧化钠水溶液 2 滴， 振动后放置 5min，判定结果不产酸的培养物不能使用 本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别 在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时， 通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替 生理盐水 生理盐水就是 0.9%的氯化钠水溶液,因为它的渗透压值和正常人的血浆、 组织液都是大致一样的，所以可以用作补液（不会降低和增加正常人体内钠离子浓度）以及其他医疗用途，也常用作体外培养活组织、细胞 氯化钠：俗称盐、食盐。

菌注射用水一般使用来溶解难溶于生理盐水药物使用的， 生理盐水就是我们静脉点滴常用的 0.9％的氯化钠注射液，外用具有一定的杀菌消毒作用所以它们不是一样的概念. 人体细胞生活中所处液体环境的浓度 配方： 哺乳类 需用生理盐水浓度是 0.9%称取 0.9 克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到 100 毫升 血琼脂平板 制法：取营养琼脂（PH7．6） ，加热使其溶解待冷至 45-50℃，以灭菌操作于每 100 毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血 5-10 毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用 血琼脂平板-用途 用途： 1． 一般棉拭子均接种此培养基 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用 ； ’. 胰蛋白胨 胰蛋白胨水 成分 胰蛋白胨 10g；蒸馏水 1000mL；pH7.0 制法 将上述成分溶解，校正 pH分装试管，121℃高压灭菌 15min Baird－Parker 氏培养基 成分 胰蛋白胨 10g ；牛肉膏 5g ；酵母膏 1g ；丙酮酸钠 10g ；甘氨酸 12g ； 氯化锂(LiCl·6H2O) 5g ；琼脂 20g ；蒸馏水 950mL ；PH7.5 。

增菌剂的配法 30%卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1%亚蹄酸钾溶液 10mL 混合，保存于冰箱内 制法 将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解冷至 25℃，校正 pH分装每瓶 95mL，121℃高压灭菌 15min临用时加热溶化琼脂，冷至 50℃，每 95mL 加入预热至 50℃的卵黄亚蹄酸钾增菌剂 5mL，摇匀后倾注平板培养基应是致密不透明的使用前在冰箱储存不得超过 48h 血浆凝固酶 血浆凝固酶-血浆凝固酶 血浆凝固酶:是能使含有肝素等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质,致病株大多数能产生,是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标. 。