生物样品2010.ppt成都

生物样品检测技术生物样品检测技术中国疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心 陶雪陶雪•概述•生物样品的采集和保存•生物样品检测方法• •生物监测质量保证规范生物监测质量保证规范一、概述一、概述n n生物样品定义生物样品定义机体的体液、分泌物、排泄物以及脏器组机体的体液、分泌物、排泄物以及脏器组 织等，如血液、唾液、乳液、泪液、汗液织等，如血液、唾液、乳液、泪液、汗液 、粪便、尿液、头发、指甲等粪便、尿液、头发、指甲等生物样品测定的意义生物样品测定的意义n n反映人体接触毒物的水平反映人体接触毒物的水平n n了解毒物在体内的吸收、分布、生物转化了解毒物在体内的吸收、分布、生物转化 和排除情况和排除情况n n为职业病的临床诊断和药物疗效提供可靠为职业病的临床诊断和药物疗效提供可靠 的依据的依据n n制定生物样品中有毒物质的生物接触限值制定生物样品中有毒物质的生物接触限值 提供科学依据提供科学依据生物样品测定的内容生物样品测定的内容n n测定生物样品中有毒物质的含量测定生物样品中有毒物质的含量n n测定有毒物质的代谢产物测定有毒物质的代谢产物n n测定生物样品中毒物引起生化指标的改变测定生物样品中毒物引起生化指标的改变n n测定生物样品中酶学指标测定生物样品中酶学指标生物样品的本底值生物样品的本底值n n定义定义生物样品的本底值也称参比值，是生物样品的本底值也称参比值，是 指有些生物监测指标在不接触职业毒指有些生物监测指标在不接触职业毒 物的健康人群，也可检测到的一定水物的健康人群，也可检测到的一定水 平平。

制定生物样品本底值的意义制定生物样品本底值的意义1.1.是劳动卫生检验和职业病防治、诊断研究的基本是劳动卫生检验和职业病防治、诊断研究的基本 资料 2.2.评价环境污染水平评价环境污染水平 3.3.了解职业者接触有毒物质的程度，评价工作场所了解职业者接触有毒物质的程度，评价工作场所 的污染情况的污染情况 4.4.为制定卫生标准，制定生物接触限值提供科学的为制定卫生标准，制定生物接触限值提供科学的 依据制定生物样品本底值的基本要求制定生物样品本底值的基本要求1.1.确定分析方法：首选标准的或统一的分析方确定分析方法：首选标准的或统一的分析方 法否则，应根据分析方法制定程序（程序法否则，应根据分析方法制定程序（程序 包括测定条件、标准曲线、检测限、精密度包括测定条件、标准曲线、检测限、精密度 、准确度、干扰实验、样品的稳定性）选择、准确度、干扰实验、样品的稳定性）选择 分析方法分析方法 2.2.测定对象的选择：测定对象通常选择不接触测定对象的选择：测定对象通常选择不接触 被测毒物的正常人排除了影响测定指标被测毒物的正常人排除了影响测定指标 的疾病和因素的人）的疾病和因素的人）制定生物样品本底值的基本要求制定生物样品本底值的基本要求3.3.确定样本数量：样本数量的确定应根据测定的目确定样本数量：样本数量的确定应根据测定的目 的的要求和被测指标的波动范围及人力、物力而的的要求和被测指标的波动范围及人力、物力而 定，一般不少于定，一般不少于100100例。

例 4.4.确定本底值范围：按统计学方法对测定结果进行确定本底值范围：按统计学方法对测定结果进行 正态性检验，根据测定结果的分布类型，选用相正态性检验，根据测定结果的分布类型，选用相 应的统计方法偏态分布用百分位法计算本底值应的统计方法偏态分布用百分位法计算本底值 范围；测定数据成正态分布，用正态分布计算本范围；测定数据成正态分布，用正态分布计算本 底值范围底值范围二、生物样品采集和保存二、生物样品采集和保存采样方法采样方法 采样时间和间隔采样时间和间隔测定目的储藏储藏 存放存放 采集何种样品采集何种样品采样时间的选择采样时间的选择具有生物限值的化合物，其生物材料采集具有具有生物限值的化合物，其生物材料采集具有 明确规定，应严格执行明确规定，应严格执行没有限值的生物样品，采集时间应根据毒物代谢没有限值的生物样品，采集时间应根据毒物代谢 动力学为依据：动力学为依据：半减期短的半减期短的( (几分钟～几小时几分钟～几小时) )化合物，其在各化合物，其在各 种组织中的水平变化很快，所以采样时间限制要严种组织中的水平变化很快，所以采样时间限制要严 格；格；半减期较长的毒物或代谢物，它们在各种组织半减期较长的毒物或代谢物，它们在各种组织 中的浓度反映了较长时间的接触程度，所以采样时中的浓度反映了较长时间的接触程度，所以采样时 间可以不太严格。

间可以不太严格 采样时间的选择采样时间的选择在生物限值或检测方法中规定的采样时间在生物限值或检测方法中规定的采样时间 ：：n n班前是指工作班前班前是指工作班前1 1小时n n班中是指开始正常工作后班中是指开始正常工作后2 2小时到下班前小时到下班前1 1小小 时n n班末是指下班前班末是指下班前1 1小时n n班后是下班后班后是下班后1 1小时n n下一班班前是指第二个工作班前下一班班前是指第二个工作班前1 1小时n n工作周末的班末是指一个工作周（通常为工作周末的班末是指一个工作周（通常为5 5个个 工作班）的最后一个工作班下班前工作班）的最后一个工作班下班前1 1小时小时 采样环境采样环境n n检测对象应离开工作场所，脱去工作服，检测对象应离开工作场所，脱去工作服， 洗净手、脸及取样部位，有条件的要在洗洗净手、脸及取样部位，有条件的要在洗 浴后进行浴后进行n n采样地点应清洁，没有污染；选择避风和采样地点应清洁，没有污染；选择避风和 上风方向的场所进行，同时注意由于通风上风方向的场所进行，同时注意由于通风 造成的污染造成的污染n n检测原形化合物时，对环境的污染要特别检测原形化合物时，对环境的污染要特别 注意。

注意 容器的选择和清洗容器的选择和清洗n n一般根据待测物的化学性质、样品的性状一般根据待测物的化学性质、样品的性状 和样品需要保存的条件来选择容器和样品需要保存的条件来选择容器 n n待测物是无机金属和类金属化合物，可用待测物是无机金属和类金属化合物，可用 高压聚乙烯塑料、聚丙烯塑料、石英、硬高压聚乙烯塑料、聚丙烯塑料、石英、硬 质玻璃等容器质玻璃等容器n n待测物为有机化合物，采样用的容器应选待测物为有机化合物，采样用的容器应选 用玻璃或聚乙烯等制品用玻璃或聚乙烯等制品容器的选择和清洗容器的选择和清洗注意事项：注意事项：n n要避免使用橡胶和添加染料的制品要避免使用橡胶和添加染料的制品n n如果样品需要冷冻保存，则不宜用玻璃容器，以如果样品需要冷冻保存，则不宜用玻璃容器，以 防冻裂n n采样用的容器应进行本底值抽检，空白值要低于采样用的容器应进行本底值抽检，空白值要低于 方法的检出限方法的检出限n n在采样容器上必须贴上统一的标签，标签上注明在采样容器上必须贴上统一的标签，标签上注明 采样日期、样品编号采样日期、样品编号( (与采样记录用统一的编号与采样记录用统一的编号) ) 、加入了什么防腐剂及加入量等项目。

加入了什么防腐剂及加入量等项目 头发的采集和保存头发的采集和保存n n采集头发的优点采集头发的优点 采样时受检者无疼痛、无创伤采样时受检者无疼痛、无创伤 样品容易储藏和运送样品容易储藏和运送 样品可长期保存，必要时可复检能够反映某样品可长期保存，必要时可复检能够反映某 个时期微量元素的吸收和代谢的历史个时期微量元素的吸收和代谢的历史三、生物样品的检测方法介绍三、生物样品的检测方法介绍n n本部分仅介绍目前常用的生物样品中化学本部分仅介绍目前常用的生物样品中化学 物质的检测方法物质的检测方法常用检测技术常用检测技术分分类类类类方方 法法 光光谱谱谱谱法法分子光分子光谱谱谱谱 原子光原子光谱谱谱谱 色色谱谱谱谱法法气相色气相色谱谱谱谱 液相色液相色谱谱谱谱 离子色离子色谱谱谱谱质谱质谱质谱质谱 法法气气质质质质 液液质质质质 ICP-MSICP-MS电电电电化学化学 法法极极谱谱谱谱法法 电电电电位溶出位溶出 电电电电位分析法位分析法 电导电导电导电导 法法 容量法容量法酸碱滴定、氧化酸碱滴定、氧化还还还还原滴定、原滴定、络络络络合滴定、合滴定、 . .…… 分子光谱分子光谱（分光光度法（分光光度法））ØØ 紫外分光光度法紫外分光光度法ØØ 红外分光光度法红外分光光度法ØØ 可见分光光度法可见分光光度法 ØØ 荧光分光光度法荧光分光光度法用于无机和有机化合物的测定用于无机和有机化合物的测定原子光谱法原子光谱法ØØ 原子吸收光谱法原子吸收光谱法 (AAS) (AAS) ØØ 原子荧光光谱法原子荧光光谱法 (AFS)(AFS)ØØ 原子发射光谱法原子发射光谱法 (AES)(AES)主要用于金属和类金属的测定主要用于金属和类金属的测定色谱法色谱法用于分离和测定多种有机化合物和阴用于分离和测定多种有机化合物和阴 离子等化合物离子等化合物色色谱类别谱类别谱类别谱类别分析分析对对对对象象气相色气相色谱谱谱谱(GC)(GC)分子量小于分子量小于400400有机物有机物高效液相色高效液相色谱谱谱谱( ( HPLC)HPLC)分子量分子量400~1000400~1000有机物有机物离子色离子色谱谱谱谱(IC)(IC)F F- -、、ClCl- -、、SO4SO42-2-等等电化学法电化学法用于测定氟及一些金属化合物，灵敏度用于测定氟及一些金属化合物，灵敏度高，精密度取决于仪器性能和操作。

高，精密度取决于仪器性能和操作ØØ 催化极谱法催化极谱法ØØ 电位溶出法电位溶出法 ØØ 离子选择电极法离子选择电极法样品检测定量方法样品检测定量方法Ø 校准曲线法Ø 标准加入法Ø 内标法定量方法：定量方法：校准曲线法校准曲线法l l标准曲线法：用标准溶液直接配制标准系标准曲线法：用标准溶液直接配制标准系列进行测定，样品基体不干扰测定时使用列进行测定，样品基体不干扰测定时使用l l工作曲线法：样品基体对测定有干扰时，工作曲线法：样品基体对测定有干扰时，在标准系列中加入样品基体直接进行测定，在标准系列中加入样品基体直接进行测定，或同样品一起处理后再测定或同样品一起处理后再测定校准曲线的要求校准曲线的要求校准曲校准曲线浓线浓线浓线浓 度度 点点 （包括（包括试剂试剂试剂试剂 空空 白）白）光光谱谱谱谱法法 ≥ ≥5 5个个色色谱谱谱谱法、法、电电电电化学法等化学法等≥ ≥3 3个个相关性相关性 (r)(r)GFAAS ≥0.99GFAAS ≥0.99其它方法其它方法≥ ≥ 0.9990.999定量方法定量方法：：标准加入法标准加入法样品基体对测定有干扰时，取等量的样品若干份样品基体对测定有干扰时，取等量的样品若干份，其中一份不加标，其它分别加入不同量的标准溶液，其中一份不加标，其它分别加入不同量的标准溶液 ，制成标准系列，进行样品处理后测定。

各信号值减，制成标准系列，进行样品处理后测定各信号值减 去试剂空白信号后绘制标准曲线，其延长线与浓度轴去试剂空白信号后绘制标准曲线，其延长线与浓度轴 的交点为样品测定值的交点为样品测定值样品样品0 0加标加标1 1加标加标2 2加标加标3 3样品测定样品测定 值值C C定量方法：定量方法：内标法内标法内标法是一种间接或相对的校准方法，在分析测定样品内标法是一种间接或相对的校准方法，在分析测定样品 中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除由于操作条中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除由于操作条 件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度件的波动而。