家兔实验性弥散性血管内凝血教案.ppt

家兔实验性弥散性血管内凝血￿￿￿￿Still￿waters￿run￿deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深￿￿￿￿Where￿there￿is￿life,￿there￿is￿hope有生命必有希望有生命必有希望目的应用静脉注射应用静脉注射兔脑浸液兔脑浸液方法，复制方法，复制家兔实验性家兔实验性DICDIC通过实验和几项血液学通过实验和几项血液学指标的测定及结果分析，了解实验室诊指标的测定及结果分析，了解实验室诊断断DICDIC的常用方法，联系理论知识加深理的常用方法，联系理论知识加深理深深DICDIC的病因及发病机理的病因及发病机理 实验内容1.1.称重、固定（称重、固定（清醒状态清醒状态）、）、局部浸润麻醉局部浸润麻醉2.2.手术：颈动脉插管，采集正常血标本手术：颈动脉插管，采集正常血标本3.3.造模：造模：i.v.2i.v.2％兔脑浸液，％兔脑浸液，60mg/kg60mg/kg（慢（慢,<2ml/min,<2ml/min，，注意兔子挣扎注意兔子挣扎) )4.4.采集采集DICDIC血标本，离心分离血浆备用血标本，离心分离血浆备用5.5.测定样本：测定样本：①①KPTT,②PT,③Fg,④3PKPTT,②PT,③Fg,④3P6.6.结果汇总结果汇总测定指标和方法1.1.白陶土部分凝血活酶时间白陶土部分凝血活酶时间（（Kaolin partial thromboplastin time , KPTT））玻片法（挑丝法）玻片法（挑丝法） 2.2.凝血酶原时间凝血酶原时间( (prothrombin time, PT) )玻片法（挑玻片法（挑丝法）丝法） 3.3.纤维蛋白原纤维蛋白原（（fibrinogen, Fg）含量，饱和盐水）含量，饱和盐水法法4.4.血浆鱼精蛋白副凝固试验血浆鱼精蛋白副凝固试验（（Plasma Protamine Paracoagulation test，，3P）） 清洁平皿和试剂清洁平皿和试剂37℃37℃预热预热滴加滴加20ul20ul血浆和血浆和20ul KPTT20ul KPTT试剂试剂, ,用清洁针头混匀预热用清洁针头混匀预热3min3min滴加滴加20ul 0.025mol/L20ul 0.025mol/L氯化钙溶液氯化钙溶液, ,立即启动立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值记录时间（正常值3535～～45s45s））KPTT测定方法清洁平皿和试剂清洁平皿和试剂37℃37℃预热预热滴加滴加20ul20ul血浆预热血浆预热1min1min滴加滴加40ul PT40ul PT试剂，立即启动秒表，试剂，立即启动秒表，同时用清洁针头不断混匀和挑拨同时用清洁针头不断混匀和挑拨一旦挑出丝状物立即停止秒表一旦挑出丝状物立即停止秒表记录时间（正常值记录时间（正常值1111～～13s13s））PT测定方法纤维蛋白含量测定方法试管编号试管编号1 12 23 34 4调零管调零管测定管测定管调零管调零管测定管测定管生理盐水生理盐水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml饱和盐水饱和盐水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml正常血浆正常血浆0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlDICDIC血浆血浆0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml37℃37℃孵浴孵浴3min3min，，520nm520nm波长比色，读取波长比色，读取ODOD值值纤维蛋白含量测定方法各加生理盐水各加生理盐水4.5ml 4.5ml 各加饱和盐水各加饱和盐水4.5ml4.5ml（调零管）（调零管） （测定管）（测定管） 1423正常血浆各正常血浆各0.5ml DIC0.5ml DIC血浆各血浆各0.5ml0.5ml3P试验试管标记试管标记1.1.正常正常2.DIC2.DIC正常血浆正常血浆0.5ml0.5mlDICDIC血浆血浆0.5ml0.5ml1 1％鱼精蛋白溶液％鱼精蛋白溶液50ul50ul50ul50ul轻轻摇匀，轻轻摇匀，37℃37℃水浴孵浴水浴孵浴15min15min，黑色背景观察沉淀物，黑色背景观察沉淀物结果组别组别KPTT(sec.)PT(sec.)Fg(mg%)3P正常正常DIC正常正常DIC正常正常DIC正常正常DIC12345注意事项1.1.采采血血时时不不得得将将动动脉脉夹夹移移开开，，以以免免放放血血后后不不能能及及时时夹闭动脉造成放血过量和失血。

夹闭动脉造成放血过量和失血2.2.采采集集抗抗凝凝血血需需掌掌握握好好血血液液: :抗抗凝凝剂剂之之比比例例(1:9)(1:9)并并充分混匀（颠倒混匀）充分混匀（颠倒混匀）3.3.注注射射兔兔脑脑浸浸液液前前，，要要做做好好第第二二次次采采血血的的一一切切准准备备工工作作，，并并向向导导管管内内注注入入生生理理盐盐水水（（因因原原来来插插管管内内可能已有血栓阻塞）可能已有血栓阻塞）4.4.注注射射兔兔脑脑浸浸液液是是实实验验成成败败的的关关键键步步骤骤，，要要缓缓慢慢推推注注(<2ml/min)(<2ml/min)，，密密切切注注意意家家兔兔反反应应，，如如有有明明显显的的呼吸急促和躁动不安呼吸急促和躁动不安，应，应立即放血立即放血注意事项5.5.离离心心分分离离血血浆浆前前，，必必须须先先平平衡衡离离心心管管分分离离出出血浆吸入清洁试管备用血浆吸入清洁试管备用6.6.测测KPTTKPTT、、PTPT的的平平皿皿必必须须清清洁洁、、干干燥燥、、无无油油脂脂KPTTKPTT试剂使用前须摇匀试剂使用前须摇匀7.7.测测FgFg时时，，血血浆浆一一旦旦与与饱饱和和盐盐水水接接触触要要立立即即进进行行充充分分混混匀匀，，以以防防产产生生局局部部沉沉淀淀，，同同样样，，比比浊浊前亦要再次混匀。

前亦要再次混匀8.8.测测3P3P时时，，要要先先加加血血浆浆，，再再加加鱼鱼精精蛋蛋白白，，以以免免鱼鱼精蛋白接触管底不洁物造成假阳性精蛋白接触管底不洁物造成假阳性讨论1.1.兔脑浸液引起兔脑浸液引起DICDIC的原因和机制？的原因和机制？2.2.KPTTKPTT、、PTPT、、FgFg和和3P3P各指标的临床意义是什各指标的临床意义是什么？分别反应什么变化么？分别反应什么变化? ?3.3.KPTTKPTT、、PTPT、、FgFg和和3P3P的测定原理及发生变化的测定原理及发生变化的原因和机制的原因和机制? ?DIC动物模型的复制方法l凝血酶凝血酶l蛇毒蛇毒l兔脑浸液兔脑浸液l内毒素内毒素l羊水羊水实验室诊断DIC的方法 筛选指标筛选指标：：l血小板计数（血小板计数（platelet，，PLT））l凝血酶原时间凝血酶原时间( (prothrombin time，，PT) ) l纤维蛋白原含量（纤维蛋白原含量（fibrinogen，，Fg））l纤溶指标：纤溶指标：FDPFDP测定、测定、3P3P试验、优球蛋白溶解试验、优球蛋白溶解时间、时间、D-D-二聚体，等二聚体，等实验室诊断标准实验室诊断标准( (以下三项以上异常以下三项以上异常) ) 1.PT延长或缩短延长或缩短3s以上，以上，KPTT延长或缩短延长或缩短10s以上；以上；2.血浆血小板活化产物含量增加：血浆血小板活化产物含量增加：β-TG、、PF4、、TXB2、、P-选择素；选择素；3.凝血激活分子标志物含量增加：凝血激活分子标志物含量增加：F1+2、、TAT、、FPA、、SFMC；；4.抗凝活性降低：抗凝活性降低：AT-Ⅲ：：A降低、降低、PC活性降低；活性降低；5.血管内皮细胞受损分子标志物增高：血管内皮细胞受损分子标志物增高：ET-1和和TM。